z植物生理學(xué)試驗(yàn)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-01-06 13:05本頁(yè)面
【正文】 呤、 6呋喃甲基腺嘌呤、赤霉素等。 ? [實(shí)驗(yàn)步驟 ] 分別配制 MS培養(yǎng)基的大量元素 20倍、微量元素 200倍、有機(jī)物 200倍母液、植物激素：萘乙酸、 6芐基腺嘌呤、 6呋喃甲基腺嘌呤、赤霉素等的 1mg/L的母液并分裝。 按以下方案設(shè)計(jì)附加激素的培養(yǎng)基配方及配制培養(yǎng)基 （激素濃度 mg/L） NAA 6BA） 0 0 MS (1號(hào) ) 1 1/0（ 4號(hào)） 2 2/0（ 7號(hào)） 1 0/（ 2號(hào)） 0/1（ 3號(hào)） 1/（ 5號(hào)） 1/1（ 6號(hào)） 2/（ 8號(hào)） 2/1（ 9號(hào)） （ 1）取母液 大量元素 微量元素 鐵鹽 有機(jī)物 （ 2）稱量蔗糖 (30g/L) (3)稱瓊脂粉 (7g/L) 加蒸餾水 600ml/L 混合 定容 調(diào) pH值 分裝 封瓶口 高壓滅菌 冷卻 凝固 ?[注意事項(xiàng) ] 不要將培養(yǎng)基倒在瓶口上。 高壓滅菌不能超過(guò) 20min. ?[思考題 ] 試述培養(yǎng)基中蔗糖的作用。 高壓滅菌的時(shí)間是多長(zhǎng)？為何不宜過(guò)長(zhǎng)和過(guò)短？ 實(shí)驗(yàn) 16 植物組織培養(yǎng) 2材料的消毒、接種與培養(yǎng)（愈傷組織的誘導(dǎo)與器官的分化） ? [實(shí)驗(yàn)原理 ] 用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段叫 外植體（ explant） ,外植體切口可經(jīng)脫分化誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織，愈傷組織經(jīng)分化可形成根、芽等器官。植物激素在愈傷組織分化過(guò)程中起重要作用；當(dāng)生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素比值高時(shí)，有利于根的分化，當(dāng)二者比值低時(shí)有利于芽的分化，當(dāng)二者比值相等時(shí)有利于愈傷組織的生長(zhǎng)。 ? [儀器與用品 ] 儀器：超靜工作臺(tái)；恒溫培養(yǎng)箱、光照培養(yǎng)箱；或光、暗恒溫培養(yǎng)室；噴霧器；手術(shù)剪刀；槍頭鑷子；解刨刀；衛(wèi)生紙 。 紫外燈；酒精燈等。 材料：菊花花蕾、嫩莖、嫩葉。 [實(shí)驗(yàn)步驟 ] 接種室和超靜工作臺(tái)的通風(fēng)和消毒； 1）、接種室先開紫外燈 20分鐘，關(guān)燈后 2030分鐘人在進(jìn)入； 2）、超凈工作臺(tái)表面用 70%乙醇擦拭一遍，后開啟紫外燈并通風(fēng) 20分鐘。 操作者的消毒 更換干凈的工作服，戴工作帽和口罩；用肥皂水清洗雙手，擦干，再用酒精棉球擦拭一遍。 外植體的消毒 1）如果材料表面有灰塵，現(xiàn)用自來(lái)水沖洗 35分鐘。用吸水紙擦干表面水分。 2)以后在工作臺(tái)中進(jìn)行，將菊花嫩莖切成 45厘米的小段、花蕾的花瓣分開、嫩葉片一分為二，且放置在消過(guò)毒的三角瓶中，倒入 70%乙醇并浸泡 30秒鐘，用無(wú)菌水沖洗一次后，再用 %的升汞溶液浸泡 8分鐘。期間需要?jiǎng)由侥_平數(shù)次；最后用無(wú)菌水沖洗 56次，無(wú)菌紙吸干備用 切割材料和接種 剪刀、鑷子等金屬器具，在酒精燈火焰上灼燒滅菌，等冷卻后，將材料分割成小段或小塊接種。莖段和花瓣分成 ，葉片切成 。每瓶接種 45個(gè)外植體；每皿接種 810個(gè)外植體。每接種一瓶或一皿材料將剪刀、鑷子灼燒一遍，以防交叉污染。接種后，瓶口在火焰上旋轉(zhuǎn)一圈，稍停一會(huì)用封口瓶膜封口，并用牛皮筋扎緊。 在培養(yǎng)器皿外壁上，用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)基編號(hào)、材料名稱和接種日期。 培養(yǎng)、觀察培養(yǎng)物的生長(zhǎng)現(xiàn)象。 統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并填寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊(cè)。 ? [注意事項(xiàng) ] 接種時(shí)，手和衣袖與酒精燈火焰保持適當(dāng)?shù)木嚯x，以免燒傷。 接種時(shí)嚴(yán)格按無(wú)菌操作程序進(jìn)行。 ? [思考題 ] ? 為什么選用兩種消毒劑對(duì)材料進(jìn)行消毒？ ? 接種時(shí)要注意哪些環(huán)節(jié)才能保證材料的消毒即徹底又不傷害材料的生活力？ 實(shí)驗(yàn) 17 模式植物擬南芥的栽培與突變體表性分析 [實(shí)驗(yàn)原理 ] 擬南芥是重要的植物生理及分子生物學(xué)的模式植物。植物生理學(xué)的許多新知識(shí)、新理論都是用它的野生型及其突變體做對(duì)比研究獲得的，如花發(fā)育的 ABA模型，因此學(xué)會(huì)其栽培和突變體表性分析對(duì)揭示植物生命活動(dòng)的規(guī)律有重要的意義。 [儀器與用品 ] 光照培養(yǎng)室、超靜工作臺(tái)、冰箱、高壓滅菌鍋。培養(yǎng)皿、 20目篩、營(yíng)養(yǎng)土、草炭土、蛭石、小塑料盆、塑料托盤、移液器（ 200ul,1000ul） 干濕度計(jì)。 材料：擬南芥 C型野生型和 sos sos sos3 突變體。 [方法與步驟 ] 配制 MS固體培養(yǎng)基：設(shè)置 4個(gè) NaCl濃度即： 0、 50、100、 200mM各 250ml/小組， MS0多配制 100ml/小組 .培養(yǎng)基滅菌后倒平板 。 WT,sos1， sos2， sos3 的種子，經(jīng)常規(guī)消毒滅菌后，播種到 MS0平板上 。 播有種子的平板置于 4℃ 冰箱中低溫處理 23天。 平板轉(zhuǎn)移到 25℃ 光照培養(yǎng)室培養(yǎng)到 7天，光強(qiáng) 120140 umol/. 將一部分苗轉(zhuǎn)移到含 NaCl梯度濃度的平板上；平板上小苗擺成兩排，上面為對(duì)照，下面為突變體。平皿豎插到特制的培養(yǎng)架上培養(yǎng)。 另一部分小苗轉(zhuǎn)移到土壤中栽培。把營(yíng)養(yǎng)土、草炭土、蛭石按 1： 1： 1的比例混勻，過(guò)篩，并轉(zhuǎn)入小塑料盆中，把小盆整齊擺放在塑料盤中，從盤底注入水，將土壤浸透后移栽小苗。小苗從培養(yǎng)皿中取出并在清水中洗凈根部的培養(yǎng)基，每小盆移栽 45顆小苗，小苗基部用手按實(shí)，使之與土壤密切接觸。 觀察表型：平皿中培養(yǎng)的小苗 .土壤中的小苗培養(yǎng) 23周后，每個(gè)材料澆灌 4個(gè) NaCl濃度的水，每盆澆灌 25ml， 供澆 3次每次相隔一周。 記錄觀察結(jié)果并統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，寫成實(shí)驗(yàn)報(bào)告 。 [思考題 ] ? 播種后的擬南芥為何要在 4℃ 冰箱低溫處理 23天？ ? 比較野生型和 sos sos sos3突變體在含鹽的平板和澆灌系列梯度的鹽溶液后的表型差異，并分析為什么 ？
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