血清學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)ppt課件-資料下載頁
2025-01-05 17:00本頁面
【正文】 可到 10－ 100pg）中等大小的靶蛋白 原理 二抗孵育 蛋白提取與定量 一抗孵育 封閉 轉(zhuǎn)膜 SDS聚丙烯酰胺電泳 蛋白變性 顯影 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 作用 緩沖液 PH 凝膠濃度 濃縮膠 使蛋白樣品濃縮 低， 25% 分離膠 使蛋白樣品分離 高，根據(jù)蛋白大小 電泳緩沖液： SDS系統(tǒng) 。 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 灌制分離膠 隔絕空氣 灌好后一般室溫放置 30－ 40分鐘 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 灌制積層膠 插入梳子 上樣及電泳 ? 提前將樣品沸水浴 5分鐘， 13000rpm離心 10分鐘。 ? 根據(jù)自己的設(shè)計上樣。 ? 80V恒壓跑濃縮膠。 ? 看溴酚藍(lán)壓縮成一條線后把電壓調(diào)為 100V。 ? 當(dāng)溴酚藍(lán)跑至離膠的下面還有 － 停止電泳。 轉(zhuǎn)膜 蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，凝膠在負(fù)極一側(cè)，膜在正極一側(cè)，接通電源以后，蛋白質(zhì)由負(fù)極向正極轉(zhuǎn)移至膜上。 膜的封閉 為避免膜與作為檢測試劑的特異性第一抗體發(fā)生非特異性結(jié)合，使非特異性背景提高，需對膜上的潛在結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行封閉處理 ,一般用5％的脫脂奶粉或者 3％的 BSA室溫或 37度封閉2小時。 轉(zhuǎn)好蛋白的膜 Protein Protein 封閉 Protein Protein Blocking Agent Blocking Agent Blocking Agent 一抗孵育 Protein Protein Blocking Agent Blocking Agent Blocking Agent Primary Antibody 二抗孵育 Protein Protein Blocking Agent Blocking Agent Blocking Agent E E Primary Antibody Secondary Antibody 顯影 Protein Protein Blocking Agent Blocking Agent Blocking Agent E E Primary Antibody Secondary Antibody－ Enzyme (E) s s s s s P P P P Substrate +/+ / NT 5 20 60 180 360 NT 5 20 60 180 360 min TNPBSA TNPBSA 250 150 100 75 50 37 25 20 AntipTyr (4G10) pP38 P38 pJNK JNK pAkt Akt NT 5 20 60 180 360 NT 5 20 60 180 360 min TNPBSA TNPBSA +/+ /
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1