現(xiàn)代造血理論ppt課件-資料下載頁
2025-01-05 13:21本頁面
【正文】 體細胞培養(yǎng)中能促進造血細胞集落形成。主要有以下幾種： ? （ erythropoietin， EPO） 主要的生物學(xué)功能是刺激紅系祖細胞的增殖和分化，以提高紅細胞數(shù)量。 ? (GCSF) 除促進粒系祖細胞形成集落外， GCSF可誘導(dǎo)某些白血病細胞株分化成熟，激活中性粒細胞的吞噬功能，誘導(dǎo)早期造血干／祖細胞從場期進人細胞周期。 ? (GMCSF) GMCSF除了促進中性粒細胞、單核細胞祖細胞增殖、分化成熟外，對成熟細胞也產(chǎn)生作用 ? （ MCSF） 促進單核系祖細胞的增殖和分化，激活巨噬細胞的吞噬和分泌功能。 ? （ multiCSF） 促進造血干／祖細胞的增殖、分化，促進多系集落生長。 ? （ thrombopoietin, TPO） 促進造血干／祖細胞的增殖、分化；促進巨核細胞集落形成。 ? （二） 白細胞介素 （ interleukin, IL) ? 白細胞介素主要是白細胞產(chǎn)生的信號分子，不僅在免疫系統(tǒng)中傳遞信息，同時也參與造血系統(tǒng)的造血調(diào)控，其主要生物學(xué)功能見（臨床免疫學(xué)檢驗》。 ? （三） 其他細胞因子 ? （ stem cell factor, SCF） 又稱肥大細胞生長因子 促進肥大細胞生長；協(xié)同促進造血干／祖細胞增殖、分化。 ? 2． FLT3配基 (FLT3 ligand, FL) ? 誘導(dǎo)處于靜止期的造血干／祖細胞進人細胞周期，促進其擴增。 ? 目前發(fā)現(xiàn)對造血有調(diào)節(jié)作用的細胞因子有近 50種，它們對造血的調(diào)控有正向和負向調(diào)節(jié)，一種細胞因子對一類細胞可能以正向調(diào)節(jié)為主，而對另一類細胞則可能是反向抑制，并且不同的濃度作用效果也不一樣。 ? 大多數(shù)人類的細胞因子可以通過基因工程制備，有的已成功用于臨床，如 EPO較早地用來治療各種貧血，尤其是與腎功能衰竭、化療、腫瘤骨髓浸潤有關(guān)的貧血，取得了顯著療效； GCSF應(yīng)用于治療化療引起的中性粒細胞減少癥，骨髓移植和外周血造血干／祖細胞的動員等。 第三節(jié) 造血干／祖細胞體外培養(yǎng)技術(shù) ? 體內(nèi)造血干／祖細胞在一個極復(fù)雜的造血微環(huán)境中增殖、分化生成血液細胞。 ? 體外造血祖細胞培養(yǎng)就是在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，將從機體中分離出的造血祖細胞進行培養(yǎng)，使之生存、增殖分化。 ? 造血祖細胞培養(yǎng)主要應(yīng)用于： ? 1）檢測造血祖細胞在骨髓、外周血和臍血中的數(shù)量 ? 2）研究體外造血祖細胞類型、特性及生理意義 ? 3）利用人工培養(yǎng)條件易于改變并能嚴格控制的特點，研究造血調(diào)節(jié)； ? 4）用于造血系統(tǒng)疾病發(fā)生機制，診斷、預(yù)后判斷、療效觀察及治療藥物的選擇等方面的研究。 一、造血干／祖細胞體外培養(yǎng)的基本條件 ? （一）實驗室條件 ? （二）培養(yǎng)的支持物 ? （三）營養(yǎng)液 ? （四）細胞因子 ? （五）血清 二、造血干／祖細胞體外培養(yǎng) 各種造血祖細胞的培養(yǎng)條件、體系組成雖有差異，但培養(yǎng)過程大致相同。 造血祖細胞的培養(yǎng)步驟如下： ? （ 1）分離培養(yǎng)細胞，并制成單個核細胞懸液。 ? （ 2）配制培養(yǎng)體系：按比例將培養(yǎng)液、細胞、血清、刺激因子加入培養(yǎng)體系瓶內(nèi)，混勻。 ? （ 3）將配制的培養(yǎng)體系在 37℃ 水浴，保溫 10min。 ? （ 4）培養(yǎng)體系保溫的同時，將瓊脂等支持物煮沸融化（甲基纖維素不需加熱）。 ? （ 5）待支持物降至 40℃ 左右，加入培養(yǎng)體系并混勻。 ? （ 6）將混勻后的培養(yǎng)體系加入培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板孔內(nèi)，一般平行做 3份。 ? （ 7）待培養(yǎng)物冷卻凝固后，于 5%CO飽和濕度及 37℃ 溫箱內(nèi)孵育。 CFUGM需 7~10天，CFUE需 7天， BFUE需 14天。 ? （ 8）觀察結(jié)果。包括記數(shù)集落數(shù)，對部分難以確定細胞性質(zhì)的集落應(yīng)固定、染色后分析。 ? （一）粒一單核細胞系祖細胞（ CFUGM）培養(yǎng) ? 【原理】受檢者血液或骨髓經(jīng)過分離獲得的單個核細胞在適當(dāng)?shù)募毎蜃?(GMCSF)作用下，在體外半固體瓊脂上形成由不同成熟階段的粒細胞和單核細胞組成的細胞集落。每個集落可視為由一個粒一單核細胞系祖細胞增殖、分化而來。集落數(shù)的多少可以反映造血細胞中粒一單核細胞系祖細胞的水平。 ? （二）紅系祖細胞（ BFUE,CFUE）培養(yǎng) ? 【原理】在培養(yǎng)體系中加人適量的 EPO，使骨髓中的造血細胞在半固體培養(yǎng)基上形成由紅細胞組成的集落（ BFUE和 CFUE）。每個集落可視為一個紅系祖細胞增殖分化而來，集落的多少可反映造血細胞中紅系祖細胞的量。 Thank you ！
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