研究生分子醫(yī)學(xué)技能實(shí)驗(yàn)四-資料下載頁(yè)
2025-10-07 19:51本頁(yè)面
【正文】 啟動(dòng)和延伸時(shí)核苷酸錯(cuò)誤摻入，高濃度 dNTPs易產(chǎn)生錯(cuò)誤摻入，而濃度太低，勢(shì)必降低反應(yīng)物的產(chǎn)量。四種 dNTP的濃度應(yīng)相同，其中任何一種濃度偏高或偏低，都會(huì)誘導(dǎo)聚合酶的錯(cuò)誤摻入，降低合成速度，過早終止反應(yīng)。 ? 10 PCR反應(yīng) buffer： 已作成商品化的產(chǎn)品 ， 它包括： 250~500mmol/L KCl； 100~500mmol/LTrisHAC （ ） ；15~20mmol/L MgCl2（ 對(duì) Taq酶的活性影響很大 ，一般濃度為 ~， 實(shí)際應(yīng)用時(shí)根據(jù)反應(yīng)體系的情況進(jìn)行調(diào)整 。 ） ； %明膠或牛血清白蛋白 ? dd H2O 調(diào)節(jié)反應(yīng)體積 ? 液體石蠟油 影響 PCR的主要因素 ① PCR反應(yīng)體系的各個(gè)組分 ② PCR循環(huán)的溫度 （ 預(yù)變性 、 變性 、 退火 、 延伸 ） ③ PCR循環(huán)的次數(shù)和平臺(tái)效應(yīng) ④ 操作環(huán)境 平臺(tái)效應(yīng)及其原因 三、結(jié)果分析與問題討論
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