【導(dǎo)讀】申請書各項(xiàng)內(nèi)容，應(yīng)實(shí)事求是，逐條認(rèn)真填寫。謹(jǐn)，字跡清晰易辨。外來語要同時用原文和中文表達(dá)。第一次出現(xiàn)的縮寫。詞，須注出全稱。組蛋白調(diào)控IL-4與MS發(fā)病。為了驗(yàn)證這一假設(shè)，我們一方面檢測IL-4和c-Maf在MS血液。組蛋白去甲基化修飾促進(jìn)IL-4轉(zhuǎn)錄從而增加該基因表達(dá)。據(jù)，還將為尋找多發(fā)性硬化的分子標(biāo)志物和基因治療的新靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。申請金額──以萬元為單位，用阿拉伯?dāng)?shù)字表示。研究期限──研究期限一般從申請的次年１月算起。終止時間為完成年度的１２月。所用實(shí)驗(yàn)室──系指研究項(xiàng)目將利用的實(shí)驗(yàn)室。首次申請廣東省自然科學(xué)基金的單位，尚未編。重要作用的人員，本人應(yīng)在申請書上親自簽名。

　　

【正文】 遺傳等多個方面開展研究，已經(jīng)發(fā)表 SCI 收錄文章三篇（影響因子分別為 、 、 ），在多發(fā)性硬化及神經(jīng)免疫研究方面積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)。 近年部分論文（ *為第一作者）： 1. Bin Zhang*, Ying Jiang, Yu Yang, Fuhua Peng, Xueqiang Hu. Correlation between seurm thyroxine and plements in patients with multiple sclerosis and neuromyelitis optica. Neuroendocrinology Letters 20xx。 29(2),256260 (第一作者 , 影響因子 , SCI 收錄 ). 2. Fuhua Peng, Bin Zhang*, Xiufeng Zhong, Jin Li, Guihong Xu, Xueqiang Hu,Wei Qiu and Zhong Pei. Serum uric acid levels of patients with multiple sclerosis and other neurological diseases. Multiple Sclerosis 20xx。 14: 188–196 (共同第一作者 , 影響因子 , SCI收錄 ). 3. Ying Jiang, Yu Yang, Bin Zhang, Fuhua Peng, Jian Bao, Xueqiang Hu. Cerebrospinal fluid levels of iodothyronines and nerve growth factor in patients with multiple sclerosis and neuromyelitis optica. Neuroendocrinology Letters 20xx。 30(2): 8590. (第二作者 , 影響因子 18 , SCI收錄 ). （四）承擔(dān)科研項(xiàng) 目情況： （ 1） 廣東省科技廳資助項(xiàng)目 （ － ），項(xiàng)目編號： 20xxB36004006“ NgR在多發(fā)性硬化中的表達(dá)及 NgR(310)ectoFc的干預(yù)治療” ， 項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：高聰。取得預(yù)期的科研成果，結(jié)題中 。 （ 2） 廣東省自然科學(xué)基金 （ － ）項(xiàng)目編號： 815101820xx00036， 項(xiàng)目 名稱： RhoA/RhoK通路在 CD8+ T淋巴細(xì)胞介導(dǎo) MS軸索損害機(jī)制的研究 。項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：高聰，項(xiàng)目即將結(jié)題 。 （ 3）廣東省科技計(jì)劃（ － ）項(xiàng)目編號： 20xxB0130801363，項(xiàng)目名稱：ABCD2 評分結(jié)合神經(jīng)影像預(yù)測 TIA 預(yù)后的前瞻性臨床研究。項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：高聰，項(xiàng)目正在實(shí)施。 研究工作積累 （ 1）申請者的前期研究結(jié)果： 前期實(shí)驗(yàn)中我們進(jìn)行了以納米粒子 FAPEGPEI作為載體，介導(dǎo) TRAIL/CD雙基因治療大鼠膠質(zhì)瘤的相關(guān)研究，取得了較滿意的結(jié)果。我們通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)明確了 FAPEGPEI的基因轉(zhuǎn)染效率及細(xì)胞毒性作用，圖 1顯示 在 表達(dá)高濃度 FA受體的 293T和表達(dá)中濃度 FA受體的 C6細(xì) 胞中， FAPEGPEI/EGFP復(fù)合物比 PEGPEI和 PEI轉(zhuǎn)染效率高，而不表達(dá) FA受體的 HepG2細(xì)胞的 3種復(fù)合物的轉(zhuǎn)染效率無明顯差異。證實(shí) FAPEGPEI可以作為 C6和293T細(xì)胞基因靶向傳輸?shù)妮d體。 19 圖 1 復(fù)合物在 N/P＝ 15 綠色熒光蛋白表達(dá)水平（ BBRC: Impact factor： ） 圖 2 大鼠腦內(nèi)膠質(zhì)瘤模型和治療效果（ Biomaterials: Impact factor: .） 如圖 2－圖 4，我們采用立體定向腦內(nèi)注射瘤細(xì)胞成功建立了 Wistar 大鼠的 腦內(nèi) C6膠質(zhì)瘤模型，分別采用 CD、 TRAIL 單基因治療或 CD/TRAIL 聯(lián)合治療，發(fā)現(xiàn) CD、 TRAIL單基因治療組較未治療對照組的腫瘤平均體積明顯小，而聯(lián)合治療組的腫瘤平均體積最小。在 N/P 比 =15 的時候， FAPEGPEI 介導(dǎo)的 pIRES2EGFP/TRAIL 和 pIRES2EGFP/CDCD治療組 TRAIL治療組 C/T治療組 未治療對照組 空質(zhì)粒治療組 20 復(fù)合物的聯(lián)合轉(zhuǎn)染細(xì)胞殺傷作用最強(qiáng)。聯(lián)合基因治療組生存期明顯大于其他組。 因此，我們在納米載體的合成和修飾、納米載體表征、納米載體 /DNA 的復(fù)合、大鼠EAE 模型制作、體內(nèi)外基因轉(zhuǎn)染以及基因治療指標(biāo)的檢測方面均有良好的技 術(shù)基礎(chǔ)和豐富的經(jīng)驗(yàn)，以保證本課題的順利進(jìn)行。 圖 3 不同處理組大鼠的腫瘤平均體積（ Biomaterials: Impact factor: .） 圖 4 不同處理組大鼠的生存曲線（ Biomaterials: Impact factor: .） （ 2）本課題組的前期實(shí)驗(yàn) 本課題組對多發(fā)性硬化的發(fā)病機(jī)理和免疫病理進(jìn)行過一系列研究，并已成功建立穩(wěn)10 20 30 40 50 60 70 80100806040200T i m e ( D a y )Survival probability (%)Blank(PS) Blank(EGFP) Trail CD/5FC CD/Trail 21 定的能夠適應(yīng)本研究的實(shí)驗(yàn)動物 EAE 模型，課題組熟練掌握大鼠 EAE 模型的建立及免疫細(xì)胞的 分離、培養(yǎng)。同時我們的前期研究中 建立了納米材料介導(dǎo)的基因表達(dá)和基因沉默技術(shù)平臺，致力于多發(fā)性硬化發(fā)病機(jī)制的研究。 （ 3）近期預(yù)實(shí)驗(yàn) 我們采用熒光定量 RTPCR的方法檢測了 15例多發(fā)性硬化病人及 20例正常人的血液和腦脊液中 miR155和 cMaf的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn) miR155在 MS病人血液和腦脊液中的表達(dá)顯著高于正常人的， cMaf在 MS病人血液和腦脊液中的表達(dá)顯著低于正常人的。 實(shí)驗(yàn)所需的試劑及相應(yīng)的抗體國內(nèi)外均可購買，重組質(zhì)粒目前已成功通過克隆出來，正進(jìn)行測序。所需的納米材料 PEIPEGPLL已通 過中山大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院帥心濤教授研究組進(jìn)行合成。整個課題所需的材料和技術(shù)均已具備。 ２ .已具備的實(shí)驗(yàn)條件 ,尚缺少的實(shí)驗(yàn)條件和擬解決的途徑 (包括利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和部門開放實(shí)驗(yàn)室的計(jì)劃與落實(shí)情況 ) 本課題是一跨學(xué)科的研究，將以廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院和中山大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院為平臺完成整個實(shí)驗(yàn)過程。本課題組所在實(shí)驗(yàn)室是廣東省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室及省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。本實(shí)驗(yàn)室擁有分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作所需的所有儀器設(shè)備。工作人員有從事分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的技術(shù)人員，還配有細(xì)胞培養(yǎng)及神經(jīng)元培養(yǎng)的專門實(shí)驗(yàn)室及技術(shù)員。另外，還備有 激光共聚焦顯微鏡、生物發(fā)光儀、電穿孔系統(tǒng)和腦立體定向儀等重要儀器設(shè)備。中山大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院可提供：凝膠滲透及高效液相色譜儀、冷凍干燥機(jī)、 zeta粒徑和電位儀等。因此，本項(xiàng)目實(shí)施所需的實(shí)驗(yàn)條件完全具備，僅需補(bǔ)充試劑等消耗性用品及購買部分儀器配件及耗材。 22 五、經(jīng)費(fèi)預(yù)算 項(xiàng) 目 金 額 （萬元） 備 注 合計(jì)： 10 科研業(yè)務(wù)費(fèi)合計(jì) （ 1）實(shí)驗(yàn)用動植物的購置、種植和養(yǎng)殖費(fèi) （ 2）計(jì)算、測試、分析費(fèi) 1 熒光素酶 活性檢測和激光共聚焦分析 （ 3）國內(nèi)調(diào)研和學(xué)術(shù)會議費(fèi) （ 4）業(yè)務(wù)資料、報告、論文印刷費(fèi) （ 5）臨時用工勞務(wù)費(fèi) （ 6）其他 實(shí)驗(yàn)材料費(fèi)合計(jì) 7 （ 1）原材料、試劑、藥品等消耗性物品購置費(fèi) 4 載體、試劑及實(shí)驗(yàn)耗材 （ 2）標(biāo)本、樣品采集加工費(fèi) 3 標(biāo)本收集和保存 （ 3）運(yùn)雜包裝費(fèi) （ 4）其他 儀器設(shè)備購置費(fèi)合計(jì) （ 1）專用儀器設(shè)備的購置 費(fèi) （ 2）運(yùn)雜包裝費(fèi) （ 3）安裝費(fèi) （ 4）自制專用儀器設(shè)備的材料、配件和外協(xié) 加工費(fèi) （ 5）其他 實(shí)驗(yàn)室改裝費(fèi) 協(xié)作費(fèi) 管理費(fèi) 按 5％計(jì)算 生活補(bǔ)貼費(fèi) 注：開支范圍詳見《廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目財務(wù)管理辦法》 . 23 六、以往基金課題完成情況 對申請者負(fù)責(zé)的前 一個已結(jié)題廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目 (項(xiàng)目 名稱及順序號 ) 完成情 況、后續(xù)研究進(jìn)展及與本申請項(xiàng)目的關(guān)系加以詳細(xì)說明。另附該已結(jié)題項(xiàng)目已發(fā)表主要相關(guān)論文首頁復(fù)印件 (限三篇 )。 無。 七、申請者承諾 我保證上述填 報內(nèi)容的真實(shí)性。如果獲得資助，我與本 項(xiàng) 目組成員將嚴(yán)格遵守廣東省自 然科學(xué) 基金委員會的有關(guān)規(guī)定，切實(shí)保證研究工作時間，按計(jì)劃認(rèn)真開展研究工作，按時報送有關(guān)材 料。 申請者： 年 月 日 24 八、申請者所在單位及合作單位的審查與保證 1. 合作單位的審查意見與保證 本單位同意參加合作研究，保證對參加合作研究人員給予時間及工作條件的支持、督促其按計(jì)劃完成所承擔(dān)的任務(wù)。以下為需要說明的其它問題： 在 預(yù) 申報中，合作單位暫不用蓋章。 合作單位１ (公章 ) 合作單位２ (公章 ) 合作單位３ (公章 ) 2. 申請者所在單位領(lǐng)導(dǎo)的審查意見與保證 已對申請書內(nèi)容進(jìn) 行了審核 ,申請書填報內(nèi)容屬實(shí)并保證在項(xiàng)目獲得資助后做到以下幾點(diǎn) : (１ )保證對研究計(jì)劃實(shí)施所需的人力、物力和工作時間等條件給予支持； (２ )嚴(yán)格遵守廣東省自然科學(xué)基金管理委員會有關(guān)資助項(xiàng)目管理和財務(wù)管理的各項(xiàng)規(guī)定； (３ )督促項(xiàng)目負(fù)責(zé)人和本單位科研管理部門按廣東省自然科學(xué)基金管理委員會的規(guī)定及時報送有關(guān)報表和材料。 需要說明的其它問題 : 單位負(fù)責(zé)人 (簽章 ) 單位 (公章 ) 年 月 日 25