【正文】 靜置 6 min； 在 實(shí)驗(yàn) 最大吸收波長 510 nm處測定吸光度，得酶解溫度 對藕節(jié) 中總黃酮得率結(jié)果的影響， 如圖 24所示 。 圖 24 酶解溫度對藕節(jié) 中總 黃酮得率的影響 由圖 24 可知，隨著酶 解 溫度的增大 藕節(jié)中總 黃酮 得率增大 ，當(dāng) 解 酶溫度為 55℃時(shí) 得率 有最大值，而后隨著酶解溫度的 升高 總黃酮得率 反而減小，實(shí)驗(yàn) 結(jié)果表明藕節(jié)中總黃酮得率 較佳的 酶解溫度為 55℃ 。 酸堿度 對 藕節(jié) 中總 黃酮得率 的影響 分別用 吸量管 精確取 mL于 50 mL的容量瓶中加入 mL 5%亞硝酸鈉溶液振蕩，靜置 6 min； 加入 mL 10%硝酸鋁溶液振蕩，靜置 6 min； 加入 mL 1 mol/L氫氧化鈉溶液，用 70%的乙醇定容至刻度線，靜置 6 min； 在 最大吸收波長 510 nm處測定吸光度，得 酸堿度 對藕節(jié) 中總黃酮得率 結(jié)果 的影響， 如圖 25所示 。 圖 25 酸堿度 對藕節(jié) 中總 黃酮得率的影響 楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計(jì)） 7 由圖 25可知，隨著 pH 值增大 藕節(jié)中總 黃酮得率增大，當(dāng) pH 值為 得率 有最大值，而后隨著 pH值 的 增大 總黃酮得率 反而減小， 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藕節(jié)中總黃酮得率較佳的 pH值為 。 酶 解時(shí)間 對 藕節(jié) 中總 黃酮得率的影響 分別用 吸量管 精確取 50 mL 的容量瓶中加入 mL 5%亞硝酸鈉溶液振蕩，靜置 6 min； 加入 mL 10%硝酸鋁溶液振蕩，靜置 6min； 加入 mL 1 mol/L氫氧化鈉溶液，用 70%的乙醇定容至刻度線，靜置 6 min； 在 最大吸收波長 510 nm處測定吸光度 ，得酶 解時(shí)間 對藕節(jié)黃酮得率結(jié)果 的 影響，如圖 26所示 。 圖 26 酶解時(shí)間對藕節(jié) 中總 黃酮得率的影響 由圖 26可知，隨著酶解時(shí)間的增加藕節(jié)中總 黃酮得率 增加 ，當(dāng)酶解時(shí)間為 h時(shí) 得率 有最大值，而后隨著酶解時(shí)間的 增加 藕節(jié)中 總黃酮得率 反而減小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藕節(jié)中總黃酮得率較佳的酶解時(shí)間為 h。 正交實(shí)驗(yàn) 結(jié)果 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)，按 L9（ 34）正交實(shí)驗(yàn)的要求，確定按表 22的數(shù)值進(jìn)行 正交 實(shí)驗(yàn)。 表 22 因素水平表 水平 A 酶濃度 (mg/ml) B酶解溫度 /℃ C pH值 D酶解時(shí)間 /h 1 50 2 55 3 60 由表 23可知，用 70%乙醇溶液作提取溶劑，酶濃度 mg/mL， 酶解溫度 55℃ ， pH值 為 ，酶解時(shí)間為 h，即 A1B2C2D3為 藕節(jié)中總黃酮提取的較 佳 提取 條件。從表 33 中看出 A 酶濃度（ mg/mL)的極差最小，為最小誤差項(xiàng)，各 單 因素 對酶輔助 法提取 藕節(jié) 黃酮類化合物的影響程度為 : B（酶 解溫度 ）＞ D（酶解 時(shí)間 ）＞ C（ pH值）＞ A（酶解 濃度 ）。 楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計(jì)） 8 表 23 正交 實(shí)驗(yàn) 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)序號 因素 水平 總黃酮 得率/% A B C D 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 K1 K2 K3 R 按照正 交實(shí)驗(yàn)所確定的最佳提取條件進(jìn)行驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)， 做三次 平行實(shí)驗(yàn) ， 藕節(jié) 中黃酮的平均得率為 % ， 驗(yàn)證 實(shí) 驗(yàn)結(jié)果如表 24。 表 24 較 佳組合驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果 吸光度 黃酮得率（ %） 黃酮平均得率（ %） 由此可知，采用酶 輔助法 提取藕節(jié)中 總 黃酮 得率 為 %。 乙醇回流法提取藕節(jié)中的總黃酮實(shí)驗(yàn)結(jié)果 按 ， 測得藕節(jié) 中黃酮的平均得率為 % ，驗(yàn)證 實(shí)驗(yàn) 結(jié)果如表 25。 表 24乙醇 回流 法 提取 藕節(jié)中總黃酮 結(jié)果 吸光度 黃酮得率（ %） 黃酮平均得率（ %） 由此可知，采用 乙醇 回流 法 提取藕節(jié)中總 黃酮 得率 為 %。 3 結(jié)論 與討論 本 論文采用 酶 輔助法 提取 藕節(jié)中的總黃酮， 考查了酶濃度、酶解溫度、 pH值及酶解時(shí)間， 四個(gè)單 因 素對藕節(jié) 中總 黃酮得率的影響，最后通過正交實(shí)驗(yàn)確定最佳提取條件 為 ： 70%乙醇作提取劑，濃度 為 mg/mL， 酶解溫度 55℃ ， pH值 為 ，酶解時(shí)間為 h。 最終藕節(jié)總黃酮得率為 %。 本論文 與乙醇回流提取相比得率提高了 %，說明 酶 輔助法有一定的優(yōu)異性。 楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計(jì)） 9 參考文獻(xiàn) [1] 李瓊，施興風(fēng)，李學(xué)輝 .蕓豆種子黃酮類化合物的抗氧化性研究 [J].種子， 2021， 28（ 12）： 7778． [2] 陳叢瑾，黃克瀛，李德良等 .植物中黃酮類化合物的提取方法研究概況 [J].生物質(zhì)化學(xué)工程， 2021，41（ 3）： 4246． [3] 余美料，陳鎮(zhèn)，黎海妮等 .蓮藕總黃酮的提取及鑒別 [J].右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2021， 1（ 27）： 9697． [4] 姚曉琳，朱新榮，段春紅等 .酶解法提取甜橙皮黃酮研究 [J].糧食與油脂， 2021， 2： 4246． [5] 許金蓉，王清章 .蓮藕中黃酮含量與分布研究 [J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2021， 2（ 50）： 386388． [6] 宋曉凱，吳立軍 .天然藥物化學(xué) [M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社， [7] 任倩，李志平，楊朝霞 .酶輔助乙醇法提取土茯苓總黃酮條件研究 [J].研究簡報(bào)， 2021,9:4648 [8] 劉曉光，毛波，胡立興．酶解法提取山楂黃酮的工藝 [J].食品研究與發(fā)展， 2021,8（ 31）： 5659． 、[9] 周春華，陶俊，李良俊．蓮藕的化學(xué)成分與生物活性研究進(jìn)展 [J].氨基酸和生物資源， 2021， 29（ 4）： 6369．楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計(jì)） 10 致謝 本論文從選題和開題、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和操作、論文撰寫和最終完成等各個(gè)環(huán)節(jié)都凝聚了楚雄師范學(xué)院化生系全體教師的心血和智慧。感謝我的導(dǎo)師李會端老師及無機(jī)教研室主任宋建梅老師和管春平老師在整個(gè)論文完成過程中的悉心指導(dǎo)與大力幫助，在此謹(jǐn)向無機(jī)教研室的各位老師致以最衷心的感謝。 最后我要感謝化生系所有的教師四年來在學(xué)習(xí)上的指導(dǎo)、生活上的幫助。感謝我的家人、同學(xué)和朋友一 路上的陪伴、鼓勵(lì)和支持。