實(shí)驗(yàn)三植物不定芽誘導(dǎo)與快繁技術(shù)-資料下載頁
2025-05-15 01:46本頁面
【正文】 片培養(yǎng)時(shí)：選取植株頂端未充分展開的幼嫩葉片 —— 流水沖洗 —— 蘸有少量 75%酒精的紗布擦拭葉片兩面 —— 放入 %升汞溶液中消毒 58min—— 無菌水沖洗 34次 —— 消毒后葉片轉(zhuǎn)入到鋪有濾紙的無菌培養(yǎng)皿內(nèi) —— 解剖刀切成 （如葉柄和子葉） —— 上表皮朝上接在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。 方法二： 70%酒精漂洗約 10秒，飽和漂白粉液中浸 315分鐘，無菌水沖洗數(shù)次，放在無菌的干濾紙上吸干水分以供接種用。對(duì)一些粗糙或帶絨毛的葉片要延長(zhǎng)滅菌時(shí)間。注意要選擇成熟的葉片。 同一葉片的柵欄組織比海綿組織較成熟。培養(yǎng)葉肉時(shí)因海綿組織在分裂前就死亡， 如果柵欄組織不發(fā)達(dá)就難培養(yǎng)。 葉片愈傷組織誘導(dǎo)形成 ⑵ 培養(yǎng)基 常用 MS、 B White、 N6等培養(yǎng)基， 3%糖，培養(yǎng)基中添加椰子汁等有機(jī)添加物，有利于葉片組織培養(yǎng)中的形態(tài)發(fā)生。 大多數(shù)雙子葉植物的葉組織培養(yǎng)，細(xì)胞分裂素特別是 KT、 6BA有利于芽的形成，生長(zhǎng)素特別是 NAA有利于根的發(fā)生， 2,4D有利于遇傷組織的形成。一般 BA 13mg/l， NAA 。 ⑶ 培養(yǎng) 2528℃ ，光照 1214h，光照度 15002021Lx，不定芽分化和生長(zhǎng)期間 300010000Lx。 影響葉肉組織培養(yǎng)的因素 ⑴基因型 不同植物種類、同一物種的不同品種間在葉組織培養(yǎng)特性上有一定的差異。 ⑵細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的組合 兩種細(xì)胞分裂素都能促進(jìn)芽的分化， 6BA的作用好于 KT，但 6BA對(duì)不定芽的進(jìn)一步發(fā)育（莖葉的形成）有抑制作用。 ⑶ 細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的組合 細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素配合使用，誘導(dǎo)芽分化效果好于單獨(dú)使用細(xì)胞分裂素。 ⑷供試植株的發(fā)育時(shí)間和葉齡 個(gè)體發(fā)育早期的幼嫩葉片較成熟幼嫩葉片分化能力高，發(fā)育完全的葉片組織器官分化能力較幼齡葉片組織再分化能力低得多。 ⑸葉脈 葉脈、葉柄分化能力較強(qiáng)。 ⑹ 極性 葉背面朝上放置就不生長(zhǎng)。 ⑺損傷 損傷后刺激誘導(dǎo)愈傷組織生長(zhǎng)和器官發(fā)生。 離體葉組織的莖和芽發(fā)生途徑 ⑴直接產(chǎn)生不定芽 ⑵由愈傷組織產(chǎn)生不定芽 ⑶胚狀體形成 ⑷其他途徑 葉片的分化程度較高，一般需要通過誘導(dǎo)愈傷組織并經(jīng)再分化才能產(chǎn)生植株，變異率較高。再分化能力弱的植物種類而言，葉片離體再生的難度相當(dāng)大。 思考 簡(jiǎn)述植物離體根培養(yǎng)方法 植物莖尖培養(yǎng)有什么類型？ 莖尖微繁技術(shù)要點(diǎn) 說明葉組織培養(yǎng)的一般方法 簡(jiǎn)述葉片培養(yǎng)中葉片消毒的一般程序 探討 試比較根、莖、葉作外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)的特點(diǎn)
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