原位雜交技術(shù)原理及其應用-資料下載頁
2025-05-12 17:52本頁面
【正文】 13）預雜交緩沖液孵育 30分鐘； 14）準備核酸探針混合物：使用預雜交緩沖液稀釋探針， 85℃ 加熱 5分鐘，置于冰塊中 10分鐘； 原位雜交操作 流程 15）雜交；第二天 16）將玻片置于 SSC中 2次，每次 5分鐘以去除封片； 17） PBS清洗 3分鐘； 18） RNA酶溶液中（或 ）， 37℃ 孵育 30分鐘； 19） PBS清洗 5分鐘； 20）室溫， 2 SSC清洗 10分鐘； 21） 37℃ ， 1 SSC清洗 10分鐘； 22） 37℃ ， SSC清洗 10分鐘； 23）緩沖液孵育 10分鐘； 24）緩沖液（ 1%正常綿羊血清和 %Triton X100）孵育 30分鐘； 25）加入抗地高辛抗體， 37℃ 孵育 3 小時； 26）緩沖液清洗 2次，每次 10分鐘； 27）緩沖液清洗 2次，每次 5分鐘； 28）制成 NBT/BCIP暗處保存 3060分鐘，顯微鏡下進行觀察，如果背景尚佳，顯色時間可延長到 16小時； 29）停止緩沖液的反應，用水進行簡單的清洗； 30）固紅，脫水以及封片進行核的復染。 使用 地高辛 標記的 寡核苷酸探針 進行 石蠟切片 的 原位 DNA雜交 第一天 1） 二甲苯于 37℃ 脫蠟 2次，每次 15分鐘； 2） 無水乙醇浸泡 2次，每次 5分鐘； 3） 95%乙醇浸泡 2次，每次 5分鐘； 4） PBS清洗 5分鐘； 5） 2%焦碳酸二乙酯室溫下浸泡 10分鐘； 6） PBS清洗 5分鐘； 7） 加入胃蛋白酶 25ul/ml， 37℃ 孵育 10分鐘； 8） PBS清洗 2次，每次 5分鐘； 9） HCl孵育 30分鐘； 10） PBS清洗 2次，每次 5分鐘； 11） %無水乙酸和 10分鐘； 12） PBS清洗 5分鐘； 13）預雜交緩沖液孵育 30分鐘； 14）準備寡核苷酸探針混合物：使用預雜交緩沖液稀釋探針； 15）雜交；第二天 16）將玻片置于 SSC中以去除封片； 17）室溫， 2 SSC清洗 10分鐘； 18） 37℃ ， 1 SSC清洗 10分鐘； 19） 37℃ ， SSC清洗 10分鐘； 20）緩沖液孵育 10分鐘； 21）緩沖液孵育 30分鐘； 22）加入抗地高辛抗體 37℃ 孵育 3小時； 23）緩沖液清洗 2次，每次 5分鐘； 24）緩沖液清洗 2次，每次 5分鐘； 25）制成 NBT/BCIP暗處保存 3060分鐘，顯微鏡下進行觀察，如果背景尚佳，顯色時間可長到 16小時； 26）停止緩沖液的反應，用水進行簡單的清洗； 27）固紅，脫水以及封片進行核的復染。 成年大鼠海馬、齒狀回DAT1mRNA陽性神經(jīng)元 大鼠杏仁外側(cè)核 DAT1 mRNA陽性神經(jīng)元 A 大鼠舌下神經(jīng)核 (12)DAT1 mRNA 陽性神經(jīng)元 100 B 大鼠延髓中央網(wǎng)狀核 DAT1 mRNA 陽性神經(jīng)元 200 FISH – Fluorescent In Situ Hybridization 熒光原位雜交 探針 DNA 加入熒光標記 解螺旋，雜交 FISH 16 16 例如左圖 : 通過使用 painting 探針（針對 16號染色體 )，可以確認 16號染色體的一段易位到了 9號染色體。 使用 Vysis AneuVysion探針組對 13, 18, 21, X, Y 染色體進行雜交 普通圖像 分類色圖像 5號染色體上雜交了 7種探針，這些探針在位置上分別有部分重疊。 18 條帶 7 條帶 原始圖像 DAPI圖像 實例 : X / Y 著絲點探針 單個或多個全染色體（ WCP) 探針 探測缺失 探測易位 bcr / abl 雜交到有爪蟾蜍染色體上的衛(wèi)星探針 (SAT1) Multi color ISH 450 500 550 600 650 700 750020214000600080001000012021140001600018000202102202124000260002800030000 T M B D A B N FOptical DensityW a v e l e n g t h ( n m )TMB chr. 1 DAB chr. 15 NF chr. 7 Courtesy of T. Ried, M. Macville (NIH, NHGRI) 多色原位雜交 2. a b c人類頻譜染色體組型分析 a c e4. b d頻譜 FISH ab8.111515157多色原位雜交 實習課 ? 實習時間： 共聚焦： 1月 12日 2： 30 ? 共聚焦實習地點：科研樓 10樓， Thanks
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