實驗五金黃色葡萄球菌檢測概述-資料下載頁
2025-05-12 06:48本頁面
【正文】 血漿凝固酶實驗 ? 取肉湯培養(yǎng)物 驗兔血漿于試管內(nèi)充分混合 ,置 36177。 1℃ 培養(yǎng) ,定時觀察是否有凝塊形成 ,至少觀察 6 h,以內(nèi)容物完全凝固 ,使試管倒置或 傾斜時不流動者為陽性。 1支加入金黃色葡萄球菌的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液或菌懸液 ， 另 1支加入營養(yǎng)肉湯或 ％無菌氯化鈉溶液 。 陽性和陰性對照 ? 血漿凝固酶試驗 ? (1)取潔凈玻片一張，于兩端各加兔血漿一滴。 ? (2)用接種環(huán)取金黃色葡萄球菌苔一環(huán)，在玻片一端兔血漿中研磨混勻，接種環(huán)滅 ? 菌后再取白色葡萄球菌苔一環(huán)，在另一端兔血漿中研磨均勻。 ? (3)觀察兔血漿有無凝集現(xiàn)象。 ? 四 .檢驗和控制 1．金黃色葡萄球菌的檢驗 樣品處理：無菌取 25g或 25mL食品樣品，放入 225mL滅菌生理鹽水中均質(zhì)，制成 101稀釋液。 增菌培養(yǎng)：將 101稀釋液接入 %NaCl肉湯或胰蛋白胨肉湯中， 37176。 C培養(yǎng) 24小時。 分離培養(yǎng)：將上述稀釋液或培養(yǎng)液分別劃線血平板和 BairdParker平板，置 37176。 C培養(yǎng) 2448小時。金黃色葡萄球菌在血平板上呈金黃或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周圍有溶血圈。在BairdParker平板上菌落為圓形，直徑 23mm，顏色灰或黑色，周圍有一渾濁帶。 ? 染色觀察：從平板上挑取可疑性菌落進行革蘭氏染色，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性，顯微鏡下呈葡萄狀排列無芽胞、莢膜，直徑 。 血漿凝固酶試驗：吸取 金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯 24小時培養(yǎng)物充分混勻，置 36177。 1176。 C培養(yǎng)，每隔半小時觀察一次，連續(xù)觀察 6小時，出現(xiàn)凝固，即將小試管傾斜或倒置時，內(nèi)容物不流動，判為陽性。同時做陰陽性對照。 耐熱核酸酶試驗：將 24小時肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理 15min，用接種環(huán)劃線刺種于甲苯胺蘭 DNA平板， 36177。 1176。 C培養(yǎng) 24小時，在刺種線周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。 ? 血漿凝固酶試驗：吸取 黃色葡萄球菌肉浸液肉湯 24小時培養(yǎng)物充分混勻，置 36177。 1176。 C培養(yǎng)，每隔半小時觀察一次，連續(xù)觀察 6小時，出現(xiàn)凝固，即將小試管傾斜或倒置時，內(nèi)容物不流動，判為陽性。同時做陰陽性對照。 ? 耐熱核酸酶試驗：將 24小時肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理 15min，用接種環(huán)劃線刺種于甲苯胺蘭 DNA平板， 36177。 1176。 C培養(yǎng) 24小時，在刺種線周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。 ? 問題與討論： ? ？為何凝固酶試驗需要用血漿而不是血清？ ? ？實驗室檢測血漿凝固酶的試驗方法有幾種？每種方法測定的物質(zhì)有何不同？哪種方法最好？ ? 、枸櫞酸鹽、 EDTA等，血漿凝固酶試驗中所用的血漿抗凝劑以哪種為最佳？是否可用脫纖維血漿？為什么？ ? ？比如動物血、人血等，哪種血源最佳？為什么？ ? ，你認(rèn)為血漿的最佳稀釋比例是多少？血漿過稀或過濃對結(jié)果有影響嗎？ ? ？濃度低了對結(jié)果觀察有影響嗎？是否可直接將待測菌加入稀釋血漿中？ ? Slidex Staphkit（葡萄球菌凝聚鑒定試劑盒）檢測時，哪些菌可能引起假陽性？此時你如何辨別？ ?
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