植物組織培養(yǎng)第四章胚胎培養(yǎng)和離體授粉-資料下載頁
2025-05-10 00:25本頁面
【正文】 過雌蕊的離體培養(yǎng)，使無菌花粉授于柱頭上，得到含有可育的種子和果實的技術(shù)。 方法 :在花藥尚未開裂時切取母本花蕾，消毒后，在無菌條件下用鑷子剝?nèi)セò旰托廴铮Ａ糨嗥?，將整個雌蕊接種在培養(yǎng)基上，當天或第二天在其柱頭上授以無菌的父本花粉。 （二）離體子房授粉 定義：通過人工方法將 花粉直接引入子房 ，使花粉粒在子房腔內(nèi)萌發(fā)，并進行正常受精，最后獲得具有生活力的種子。又稱 子房內(nèi)授粉 。 兩種形式：活體子房內(nèi)授粉 /離體子房內(nèi)授粉 1）活體子房內(nèi)授粉： 指被授粉的子房并不離體，仍然活在植株上，對其用花粉懸浮液進行授粉，使活體子房發(fā)育并形成成熟種子的過程。 ①步驟： 確定供試植物的開花和花藥開裂時間； 對母本花蕾去雄并套袋； 采集父本花粉； 將花粉引入子房。 ②花粉粒引入子房有兩種方法：直接引入法和注射法 直接引入法： 用鋒利刀片在子房壁或子房頂端上開一切口，把花粉從切口處送進子房。 注射法： 用 100mg/L硼酸將花粉粒配制成懸浮液，每滴含 100300個花粉粒。母本開花后，將子房用酒精棉表面消毒，在子房兩側(cè)彼此對應的位置上鉆兩個小孔，用注射器由一個小孔向子房注射懸浮液，注滿子房腔，到另一小孔流出為止，用凡士林封閉小孔。 2） 離體子房內(nèi)授粉： 指用無菌花粉對離體培養(yǎng)的子房進行授粉，使其發(fā)育為成熟種子的技術(shù)。 方法： 取即將開花的花蕾，經(jīng)過表面消毒，剝離花萼和花瓣，去掉柱頭和花柱，在試管中將無菌花粉授予子房頂端切口處，或?qū)⒒ǚ垡胱臃績?nèi)，實現(xiàn)受精過程。 （三）離體胚珠授粉 定義： 離體培養(yǎng)未受精的胚珠，并在胚珠上授粉，最終在試管內(nèi)結(jié)出正常種子的技術(shù)。 方法： 將胎座上切下的單個胚珠（裸露胚珠）接種在培養(yǎng)基上，然后撒播花粉于胚珠表面，實現(xiàn)受精。 將帶有完整胎座或部分胎座的胚珠接種在培養(yǎng)基上，并撒播花粉進行受精。 二、離體授粉的方法 （一）試驗材料的選擇 最好選擇子房較大并有多個胚珠的植物 （二）離體授粉的程序 確定開花、花藥分裂、授粉、花粉管進入胚珠和受精的時間 去雄后將花蕾套袋隔離（開花前） 制備無菌子房和胚珠 制備無菌花粉 胚珠（或子房）的試管內(nèi)授粉 離體授粉成功的標志： 授粉后由胚珠或子房形成有生活力的種子。 三、影響離體授粉受精的因素 （一）外植體 柱頭和花柱的影響 胎座的影響（子房或胚珠上帶有胎座，有利于離體受精的成功） 外植體的生理狀態(tài)（開花后 1~2d剝離的胚珠比當天剝離的胚珠結(jié)實率高） （二）培養(yǎng)基（ Nitsch,white,MS等） CaCl 培養(yǎng)基中蔗糖濃度一般為 4%~5%、常用的 有機附加物 （三）培養(yǎng)條件 一般在黑暗或光照較弱的條件下培養(yǎng)，溫度 2025℃ 思考： 解釋胚胎培養(yǎng)概念 說明成熟胚與幼胚對培養(yǎng)基成分的不同要求 什么是胚乳培養(yǎng)？其培養(yǎng)的溫度要求一般在多少范圍？ 胚乳培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基種類是哪些？ 簡述子房發(fā)育成植株的染色體情況 胚珠培養(yǎng)和子房培養(yǎng)有何應用？
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