【正文】 精、金絲桃 甙 、 櫟 皮 苷 、 櫟精、 Ⅰ 3,Ⅱ 8一雙芹菜素、穗花杉雙黃酮、偽金絲桃素和金絲桃素 。 Daniel Merulo TLC法對貫葉連翹提取物中的金絲桃素和偽 金 絲桃素進行了分離和定性分析，應用二氯甲烷 :丙酮 :甲醇(::)作為展開劑，在紫外光下能觀測到金絲桃素和偽金絲桃素所發(fā)出的熒光，實驗測得金絲桃素的 ，偽金絲桃素的。 Kartnig,Th TLC法對金絲桃素和偽金絲桃素的定量分析技術(shù)，應用發(fā)射熒光檢測器在 550ng范圍內(nèi)對金絲桃素和在20200ng范圍內(nèi)對偽 金絲桃素能進行準確的定量分析，在給定條件 下實驗的 Rs%，該分析方法定量準確重復性好 。 Schuet,Heide et al. 第 36 頁，共 116 頁 分別應用 UV分光光度法與 HPLC法對貫葉連翹提取物進行了測定，實驗發(fā)現(xiàn)在定量分析 上 分光光度法不如 HPLC法，而且 HPLC法適用于進行例行分析 。 Debska,W. et 的金絲桃素含量，他們采用二甲亞 砜 (DMSO)和二甲基甲酞胺 (DMF)的 5%乙醇溶液溶解提取物，在 591nm處測定，該法的 Rs=%，實驗發(fā)現(xiàn) DMSO的溶 解度要優(yōu)于 DMFI。 此外 Giuseppe Micali et HPLC法直接測定食品和酒精飲料中金絲桃素的 方 法，檢測限為 。 根據(jù)實驗室例行分析的需要，我們建立了一種快速分析方法，流動相為乙睛 : 甲 醇 ： 磷酸 (59:40:1), UVVis檢測器，于 590nm處檢測。該法不須經(jīng)梯度淋洗，提取物不經(jīng)純化可直接進樣，金絲桃素的保留時間為 8min左右，該法方便、快速、準確性高，適于企業(yè)作常規(guī)分析。對于金絲桃素類物質(zhì)的檢測方法，應用最多的為 HPLC, HPLC加光譜法分析可靠 性較好， UV分光光度法測的數(shù)據(jù)普遍比 HPLC測的要高，在定量分析時 TLC法準確性最好。 建 立一 個 快速、準確和穩(wěn)定的金絲桃素分析方法對于實驗的順利開展具有重要意義。用所建立的分析方法對工業(yè)生產(chǎn)上的產(chǎn)品隨時進行質(zhì)量監(jiān)控，對于穩(wěn)定產(chǎn)品質(zhì)量和進行實驗條件的選擇至關(guān)重要。 雖然日前 國內(nèi)外對金絲桃素含量的分析測定報道較多，但有許多方法僅適于實驗室進行分析研究，分析方法復雜，可操作性差，不 第 37 頁，共 116 頁 適于大批量樣品的分析和工業(yè) 生 產(chǎn)上的常規(guī)分析?；蛘哂行┓治龇椒ǖ臏蚀_性較差，如分光 光度法， 由 于貫葉連翹提取物中含有許多種化學成分，對光度法分析的干擾較大，常導致測定的數(shù)據(jù)比真實值偏高，例如 :Madis植物制品公司在比較了 UV與 HPLC分析方法后發(fā)現(xiàn)， DAC紫外法得的 %的金絲桃素含量等于 HPLC法測定的 %。 在己報 道 的文獻中，對貫葉連翹提取物的分析主要集中在高效液相色譜法上。實驗結(jié)果也證實了該法的準確性，而且適于分析貫葉連翹提取物。 TheodorKartning等用 HPLC法對貫葉連翹的甲醇和丙酮提取物進行了分析測定， 76min內(nèi)測出了 9種化合物，其中金絲桃素的保留時間長達 。很明顯這種分析方法不適合處理大批量樣品，而且市場上也不容易得到每一種化合物的標準品，在例行分析中很難一一進行定性，實際上也沒有必要。 Geios Piperopouls等應用梯度淋洗法，分析了貫葉連翹的甲醇一丙酮提取物，實驗很好地分離了金絲桃素與假金絲桃素，所使用流動相為 :甲醇 :乙 腈 (5: 4), 三乙胺鹽水溶液，金絲桃素的保留時間為 ，檢測波長為590nm[z01。根據(jù) 項目業(yè)主實驗室 的現(xiàn)有條件，我們試驗了一種新的流動相配比，流動相為甲醇 :乙睛 :磷酸 =40: 59: 1，檢測器為 UV Vis多波長分光光度計，流動相流速為 ,檢測波長為 590nm，采用甲醇直接溶解提取物進樣，實驗證明該法穩(wěn)定性好，相對標準偏差僅為 % (n=7)，選擇性高，很好的分離了金絲桃素與假金絲桃素，其余組分干擾很小，適用于工業(yè)規(guī)模上的實驗檢測和實驗室研究的大批量樣品例行分析。 第 38 頁，共 116 頁 貫葉連翹的化學成分極其復雜，如何提取出具有高含量金絲桃素類物質(zhì)的提取物是本文所要研究的主要問題。由于金絲桃素類物質(zhì)具有較強極性，且 易溶于堿性有機溶劑。在目前國際上已產(chǎn)業(yè)化的貫葉連翹提取物生產(chǎn)主要采用含水甲醇、乙醇作為提取劑，本實驗室主要對乙醇的提取條件進行了研究，這是因為一方面乙醇化學毒性較低，即使在產(chǎn)品中有溶劑殘留也不會對產(chǎn)品質(zhì)量造成大的損害 。另一方面，含水乙醇提取不僅能較大程度的將金絲桃素類物質(zhì)提取出來，而且通過乙醇濃度的精確選擇可除去花色素，且盡量少的將葉綠素等強親脂性成分提取出來。但是用乙醇提取的提取物中金絲桃素的最大含量不超過 %,離國際藥物貿(mào)易中貫葉連翹提取物質(zhì)量標準 %還有相當大的 距離 ，與臨床實驗 的貫葉連翹提取物 %的金絲桃素產(chǎn)品差距還很大。綜述國內(nèi)外文獻，發(fā)現(xiàn)從貫葉連翹中提取金絲桃素類化合物主要有以下 5種方法 : ； 一石油醚一水萃取法 ； 3甲醇提取法 ； OH水溶液提取法 ； 油及葵花油一乙醇提取法 。 作為有效活性成分的提取劑，酮類和醇類對活性成分的提取率相差不大，水、 NaOH水溶液對金絲桃素的提取率非常低?？紤]到提取物的得率、提取物中活性成分的含量、提取劑的成本以及操作的安全性和盡量使用對環(huán)境無污染的溶劑，我們在實驗中使用乙醇水溶液覺得較為合適。至于 采用何種工藝，如何改變提取劑的配比最合適，需根據(jù)提取物中有效成分的含量進行適當?shù)倪x擇，既要考慮到得率，又要 第 39 頁，共 116 頁 考慮生產(chǎn)成本。 項目業(yè)主實驗室 采用含有堿性水溶液的乙醇提取貫葉連翹中有效成分。通過實驗發(fā)現(xiàn)，堿性水溶液的加入和乙醇的濃度對提取有著很大的影響。試驗了幾種不同堿性水溶液和乙醇水溶液(6080%)混合共同提取。首次發(fā)現(xiàn)可將貫葉連翹提取物中金絲桃素含量由不足 %提高到 0. 16%，這在貫葉連翹提取中是首次做到一次提取獲得合格產(chǎn)品的，這在國內(nèi)外也屬首次。 采用容積 為 。將貫葉連翹地上植株作為提取原料，粉碎至 80200目 ，將原料直接裝入萃取池。其裝填方法如圖 6所示 :1為玻璃纖維， 2為粉碎的貫葉連翹原料 (約 )。將萃取池串聯(lián)在超臨界流體萃取系統(tǒng)中。 改性劑 優(yōu) 改性劑注射泵按照計算濃度加入注射泵缸內(nèi)或者直接加入萃取器內(nèi)在達到設定條件后先靜態(tài)萃取 20min再進行動態(tài)萃取。在提取過程中需注意出口管路應保持在 6570℃ 之間，防止可能由于溫度過低造成萃取物析出而堵塞管路，超臨界流體萃取物用 20ml左右乙醇接收后在水浴加熱下用 CO2吹干，準確加入 ，待色譜分析。 5. 色 第 40 頁，共 116 頁 譜條件 色譜柱 : SpherilsorbC 18柱 (5μ , 200 ，大連化物所國家色譜中心 )， 流動相為甲醇 :乙 腈 :磷酸 (40: 59: 1， v/v/v )， 流速為 ， 柱溫為 30℃ ， UVvis檢測器的檢測波長為 590nm，注射休積 20μ l。 實驗證實單純用超臨界 CO,很難將貫葉連翹中的金絲桃素萃取出來，應用乙醇做改性劑回收乙醇溶液為深綠色，可見用乙醇做改性劑只能提取出葉綠素等一些親脂性物質(zhì)，這在以后用超臨界流體提取技術(shù)直接脫除貫葉連 翹粗提物中的脂性物質(zhì)，提純金絲桃素具有重要作用。運用氨水濕潤后的原料雖能將金絲桃素提取出來，但直接用粉碎的貫葉連翹做原料提取，原料體積大，所耗提取劑量多，能耗高，而且氨水對設備具有強腐蝕性，故用超臨界 CO2直接提取金絲桃素成分不適于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn) 。 經(jīng)實驗證實，超臨界流體 CO2加入改性劑后的最佳提取溫度和壓力分別為 60℃ 和 20Mpa，在金絲桃素的提取過程中用甲醇作改性劑比用乙醇效果要好，并證實用 15%的甲醇作改性劑時的提取效果最佳。由超臨界流體 CO2加入改性劑后的提取物譜圖可知 (見圖 10)，用超臨界 CO2提取 的貫葉連翹提取物中雜質(zhì)成分少，超臨界 CO2提取物譜圖較為簡單，這進一步證實了用超臨界流體提取具有良好的選擇性 。 第 41 頁，共 116 頁 貫葉連翹 提取物標準 標準依據(jù)：符合《中國藥典》（ 2021版）１部 貫葉連翹提取物（ St. John39。39。s Wort Extract Powder） 類別：標準化植物提取物 主要規(guī)格 : 金絲桃素 ％ 質(zhì)量標準： CP2021 含量測定： ％ 植物來源 : 藤黃科金絲桃屬 多年生草本植物Hypericum perforatum 第 42 頁，共 116 頁 提取部位：全草 產(chǎn)地生源 : 野生于陜西、甘肅等地。 采收時間 : 6 月盛花期打頂采收。 主治 : 清熱解毒，收斂止血，利濕，并能解除焦慮，失眠，神經(jīng)痛等癥狀。 產(chǎn)品性狀：氣特殊、味苦。深棕色或棕褐精細粉末。 有效成分 : 主要有效成分為二蒽酮類化合物如金絲桃素（ Hypericin）、偽金絲桃素 （ Pseudohypericin）、原金絲桃素（ Protohypericin）、原偽金絲桃素（ Protopseudohypericin）等，還含有山萘酚（ Kampferol）、木樨草素（ Luteolin）等多種黃酮以及貫葉連翹 素（ Hyperforin）、加 貫葉連翹 素（ Adhyperforin）等。 功效 : 本品可作為安全的神經(jīng)營養(yǎng)品，防治抑郁癥調(diào)節(jié)情感障礙和情緒失調(diào)，消除緊張與抑郁，恢復自信并能改善睡眠，貫葉連翹中提取的有效成分金絲桃素具有顯著的抗 DNA、 RNA 病毒作用，能直接作用于禽流感、豬瘟、口蹄疫等病毒 DAN，干擾該病毒復制、繁殖并對病毒有較強抑制作用。 注意事項 :本品的制劑與 5HT 再攝取抑制劑或增強 5HT 活性等 藥物合用可能會引發(fā)中樞神經(jīng)、外周神經(jīng)系統(tǒng)疾病，在使用前請仔細閱讀成品使用說明書，藥物相互作用問題請向藥師咨詢。 佛手提取物 標準來源：《中華人民共和國藥典》 2021 年版 主要指標：佛手醇、佛手多糖 重點檢測：佛手醇 2% 杜仲 第 43 頁，共 116 頁 標準來源：《中華人民共和國藥典》 2021 年版 主要指標：杜仲醇、杜仲膠、綠原酸 重點檢測：杜仲膠（ 6%），綠原酸（ %） 厚樸 標準來源：《中華人民共和國藥 典》 2021 年版 主要指標：厚樸酚 重點檢測：厚樸酚（ 3%） ?? 嚴格執(zhí)行《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》。做好質(zhì)量檢驗與質(zhì)量體系保障。 原材料 檢驗標準 執(zhí)行藥材標準 藥材取樣標準： 企業(yè)自制標準。 藥材檢定方法：根據(jù)不同品種藥材按照《國家藥典》（ 2021版）、 GAP規(guī)范（試行）等相關(guān)規(guī)范的規(guī)定進行含量測定。其檢定通則如下： 取樣按“藥材取樣法”的規(guī)定進行 符合本版藥典規(guī)定的相應藥材標本作對照 (必要時 )――― 供檢定的藥材除形狀不同外，其他各項應 符合規(guī)定 ――― 顯微鑒別、理化鑒別。 藥材重金屬含量及農(nóng)藥殘留物標準： 重金屬總量：≤ ； 鉛（ Pb）≤ ； 鎘（ Cd）≤ ； 汞（ Hg）≤ ； 第 44 頁，共 116 頁 銅（ Cu）≤ ； 砷（ As）≤ ； 黃曲霉毒素 B1（ Aflatoxin）≤ 5ug/kg； 六六六（ BHC）≤ ； DDT≤ ； 五氯硝基苯（ OCNB）≤ ； 艾氏劑（ Aldrin）≤ ； 微生物限度：個 /克，個 /毫升。 依據(jù)產(chǎn)品種類不同分為合格品、優(yōu)等品等不同等級。 主要等級分類依據(jù)：出口國有關(guān)質(zhì)量標準行業(yè)標準 。 產(chǎn)品包裝 產(chǎn)品分類包裝 ：紙箱與配套取乙烯袋： 50kg/盒 ：聚酯桶 或?qū)Ｓ萌∫蚁┐? ：聚酯桶。 采用專用包裝袋，內(nèi)層包裝用聚乙烯薄膜袋，外包裝采用編制袋。包裝規(guī)格： 25 kg/桶