【導(dǎo)讀】單倍體植物在作物育種、遺傳分析、基因克隆等領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用，小麥?zhǔn)俏覈饕Z食作物之一，花藥培養(yǎng)技術(shù)對(duì)小麥育種。DH群體為永久性群體,不僅可獲。體中每個(gè)個(gè)體在遺傳上都是純合的,非常適于連續(xù)性資料積累。過選擇綜合性狀優(yōu)良的品系還可培育出小麥新品種。養(yǎng)技術(shù)創(chuàng)建小麥DH群體。題組現(xiàn)已搜集了大量的種質(zhì)資源，并進(jìn)行了基礎(chǔ)研究。實(shí)驗(yàn)室具備良好的實(shí)驗(yàn)室條件和試驗(yàn)所需的儀器設(shè)備條件如低溫培養(yǎng)箱，恒溫培養(yǎng)箱等實(shí)驗(yàn)儀器，能確保本試驗(yàn)有序進(jìn)行。2020年2月-3月：選題，查閱文獻(xiàn)資料;2020年5月：收集實(shí)驗(yàn)資料，在河北農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室接種花藥；果明確，進(jìn)度安排合理，同意按計(jì)劃執(zhí)行。現(xiàn)把2020-2020學(xué)年，第二學(xué)期的畢業(yè)論文安排下達(dá)給你，由于大國效應(yīng)，中國小麥的產(chǎn)量直接影響著世界小。目前的生產(chǎn)量尚不能滿足消費(fèi)的需求。純合的二倍體植株,這樣縮短育種時(shí)間,提高選擇的準(zhǔn)確性及可靠性。

　　

【正文】 h/ d，光照強(qiáng)度 10000LX。 壯苗培養(yǎng)和移栽 根系發(fā)達(dá)的小麥苗同轉(zhuǎn)生根培養(yǎng)基方法相同再轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基 中。壯苗培養(yǎng)基用1/2MS+KT +NAA +， 80mg/L蔗糖，培養(yǎng)溫度在 25℃，光照長度 14h/ d，光照強(qiáng)度 10000LX。在培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 2～ 3天苗見長后移入春化培養(yǎng)箱，溫度 8℃，進(jìn)行春化培養(yǎng) 35天。 10月下旬移栽到田間。幼苗移栽時(shí) , 需提前 3～ 5天打開培養(yǎng)瓶的蓋子 , 置于室溫下煉苗 , 移栽時(shí)需洗去培養(yǎng)基，覆蓋塑料膜保溫、保濕 [7]。 白化苗培養(yǎng) 在 C17培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，附加 ，以培養(yǎng)基中不添加活性炭的為 對(duì)照，觀察白化苗變化。 小麥單倍體加倍 把移栽的單倍體幼苗置于溫棚中進(jìn)行自然加倍； 統(tǒng)計(jì)方法 主要指標(biāo)計(jì)算方法如下： 花粉愈傷組織誘導(dǎo)率（簡稱出愈率）（ %） =花粉愈傷組織總數(shù) /接種花藥總數(shù) 100； 綠（或白）苗分化率（ %） =分化綠（或白）苗數(shù) /花粉愈傷組織數(shù) 100； 綠苗誘導(dǎo)率（ %） =分化綠苗數(shù) /接種花藥數(shù) 100。 這里出愈率代表花粉脫分化能力，分化率代表愈傷組織的分化能力，綠苗誘導(dǎo)率代表花粉綠苗的產(chǎn)量 [8]。另外，在分化綠苗的愈傷組織中，愈傷組織分化出的白、綠嵌合苗， 這一部分愈傷組織計(jì)算到分化綠苗的愈傷組織數(shù)里。 小麥花藥出愈率 試驗(yàn)共接種 38313枚花藥，培養(yǎng)出愈傷組織 5462塊，平均出愈率 %， 5個(gè)組合出愈情況見表 1。其中以 12（ 620）組合出愈率最高為 %， 12（ 238）組合最低為 %。 表 1 5個(gè)組合小麥花藥出愈率 Table 1 5 binations of Wheat Anther Callus Induction 組合名稱 Group name 接種花藥數(shù) Number of inoculated anthers 愈傷組織塊數(shù)Numbers of callus 出愈率Increasing the rate of 12（ 233） 5436 817 % 12（ 238） 15282 2020 % 12（ 620） 6923 1089 % 12（ 664） 5198 705 % 12（ 667） 5474 846 % 小麥花藥愈傷組織幼苗分化率和幼苗誘導(dǎo)率 表 2 5個(gè)組合小麥花藥培養(yǎng)綠苗分化率和綠苗誘導(dǎo)率 Table 2 5 binations of green plantlet differentiation rate of wheat anther culture and Plantlet induction frequency 組合名稱 Group name 分化綠苗數(shù) Green seedling differentiation 綠苗分化率 Green plantlet differentiation rate 綠苗誘導(dǎo)率 Green plantlet induction rate 12（ 233） 69 % % 12（ 238） 324 % % 12（ 620） 272 % % 12（ 664） 92 % % 12（ 667） 136 % % 試驗(yàn)共獲得 893株綠苗，綠苗分化率和綠苗誘導(dǎo)率平均為 %和 %，（表 2），以 12（ 620）組合花藥愈傷組織幼苗分化率和綠苗誘導(dǎo)率最高，分別為 %和 %，12（ 233）組合最低，分別為 %和 %。不同組合花藥愈傷組織幼苗分化率差異明顯。 小麥 DH獲得量及加倍率 表 3 5個(gè)組合小麥 DH獲得量及加倍率 Table 3 5 binations of wheat DH and the double rate 組合名稱 Group name 分化綠苗數(shù) Green seedling differentiation DH數(shù) Number of DH 加倍率 The double rate 12（ 233） 69 28 % 12（ 238） 324 169 % 12（ 620） 272 86 % 12（ 664） 92 25 % 12（ 667） 136 35 % 試驗(yàn)共獲得 DH量為 343株， 5個(gè)組合的平均加倍率為 %，其中以 12（ 238）加倍率最高為 %， 12（ 667）最低為 %。 活性碳對(duì)小麥花藥培養(yǎng)白化苗的影響 在 C17培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上附加 ，共培養(yǎng)白化苗 75株，以培養(yǎng)基中不添加活性炭的為對(duì)照，培養(yǎng) 25天后，添加活性炭的有 3株轉(zhuǎn)為綠苗，轉(zhuǎn)化綠苗率為 4%。不添加活性炭的無白苗轉(zhuǎn)綠。 3 討論 試驗(yàn)共獲得 893株綠苗 ， 12（ 238）組合綠苗最多， 324株， 12（ 233）組合綠苗最少， 69株 ,平均出愈率 %，綠苗分化率和綠苗誘導(dǎo)率平均為 %和%，與宋運(yùn)賢等 [9]研究相比，出愈率、綠苗誘導(dǎo)率分別提高 %、 %，與葉興國等 [10]研究相比，綠苗分化率提高 %。 葉興國等研究認(rèn)為，一些小麥基因型花藥具有較高的愈傷組織誘導(dǎo)率。本研究結(jié)果也顯示， 12（ 620）無論是出愈率、綠苗分化率和綠苗誘導(dǎo)率均較高，分別為 %、 %和 %，是花藥培養(yǎng)的優(yōu)良組合，而 12（ 233）組合出愈率比較高，但幼苗分化率低，不是花藥培養(yǎng)優(yōu)良的組合。 李景琦等認(rèn)為，小麥花粉植株的白化現(xiàn)象是不逆的 [11]，本實(shí)驗(yàn)通過在培養(yǎng)基中添加活性炭，改善培養(yǎng)條件，使部分白化苗轉(zhuǎn)為綠苗，因此，白化苗不可逆值得商榷，添加活性炭的適宜時(shí)期和適宜的添加量及作用機(jī)理等有待進(jìn)一步探討。 單倍體植株的加倍問題，仍然是花培中需要繼續(xù)探討和有待進(jìn)一步解決的問題。采用秋水仙素加倍固然高一些，但是操作過程導(dǎo)致死苗傷苗現(xiàn)象難以避免。所以在花粉培養(yǎng)中單倍體植株的自然加倍，仍然是很多組培工作者尚在采用的方法。 然而 自然加倍率只有 40%~50%[12]，其中肯定有相當(dāng)數(shù)量的優(yōu)良單倍體植株不能得到利用。本試驗(yàn)單倍體植株的平均自然加倍率為 %，受材料和環(huán)境因素個(gè)別材料自然加倍率低。 參考文獻(xiàn)： [1]葛臺(tái)明，余毓君，小麥花藥培養(yǎng)的基因型和培養(yǎng)基效應(yīng)研究，華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 1996年 10月第 15卷第 5期 [2] 王茂良 , 馮慧 .花藥離體培養(yǎng)研究進(jìn)展 . 北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào) . 2020 年 10 月第 25卷 第 3 期 [3] 徐云碧，朱立煌 . 分子數(shù)量遺傳學(xué) [M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社， 1994. [4] 康明輝，海燕 . 利用花藥培養(yǎng)構(gòu)建小麥 DH 群體 [J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2020（ 12）： 55 56. [5] 胡冬梅，影響小麥花藥愈傷組織誘導(dǎo)和植株再生的因素，青海農(nóng)林科技， 2020年第 4期 [6]張超美，張?jiān)佘娋?，張杏枝，李梅，提高小麥花藥培養(yǎng)花粉植株誘導(dǎo)率的途徑，湖北農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)， 1995年 04期 [7] 景蕊蓮，昌小平，賈繼贈(zèng)，胡榮海，用花藥培養(yǎng)創(chuàng)建小麥加倍單倍體作圖群體，生物技術(shù) 9（ 3）： 48， 1999 [8] 歐陽俊聞 , 周淑明 ,賈雙娥 .小麥花藥培養(yǎng)對(duì)培養(yǎng)溫度的反應(yīng) ,遺傳， 5(5): 1416 1983 [9] 宋運(yùn)賢，周素英，杜雪玲，花姝潔，魏平民，陳耀鋒 .小麥花藥培養(yǎng)效率的影響因素研究 .西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào) .2020年 5月 第 40卷 第 5期 [10] 葉興國 , 徐惠君 ,杜麗璞 , 趙樂蓮 .提高小麥花培育種效率的研討 .中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物育種栽培研究所 .作物雜志 1996（ 4） [11] 李景琦，王成社，鄒淑芳，小麥花藥培養(yǎng)中白化苗的發(fā)生和調(diào)控措施，西安聯(lián)合大學(xué)學(xué)報(bào)， 2020年第 5卷第2期 [12] 吳彩鳳，鄧景陽，小麥單倍體植株幼穗離體培養(yǎng)自然加倍成功，農(nóng)業(yè)科技通訊