【正文】 3 學(xué)院 農(nóng)學(xué)院 專(zhuān)業(yè)班級(jí) 指導(dǎo)教師姓名 指導(dǎo)教師職稱(chēng) 教授 材料目錄： 任務(wù)書(shū) （ 1 ） 份 開(kāi)題報(bào)告 （含 文獻(xiàn)綜述） （ 1 ）份 指導(dǎo)教師評(píng)閱書(shū) （ 1 ）份 答辯記錄表 （ 1 ）份 論文正文 （ 1 ）份 其它材料 河北農(nóng)業(yè) 大學(xué) 本科畢業(yè)論文任務(wù)書(shū) 學(xué) 院： 農(nóng)學(xué)院 教師姓名： 劉桂茹 職 稱(chēng)： 教授 年 月 日 專(zhuān)業(yè)名稱(chēng) 農(nóng)學(xué)院，農(nóng)學(xué)專(zhuān)業(yè) 論文 題目 小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建 DH群體 題目 來(lái)源 通過(guò)前人在實(shí)驗(yàn)室利用花藥培養(yǎng)的研究成果 目的意義： 單倍體植物在作物育種、遺傳分析、基因克隆等領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用，創(chuàng)建單倍體植物的方法有很多種，而用花藥培養(yǎng)技術(shù)是創(chuàng)建小麥單 倍體行之有效的方法。 預(yù)期結(jié)果： （ 1） 能通過(guò)小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建 DH群體 可能存在的問(wèn)題： （ 1） 由于培養(yǎng)環(huán)境和基因型差異，花培過(guò)程中白化現(xiàn)象可能?chē)?yán)重。 完成畢業(yè)論文的撰寫(xiě)。 文獻(xiàn)綜述： 花藥培養(yǎng)技術(shù) 王冬旭 指導(dǎo)老師：劉桂茹 （河北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院農(nóng)學(xué) 0902班 保定 071000） 小麥?zhǔn)鞘澜绶秶鷱V泛種植的主要糧食作物之一，全球 35%40%的人口以它為主食，具有分布廣、面積大、總產(chǎn)高、貿(mào)易額多、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高等特點(diǎn)，在世界食品安全、戰(zhàn)略貯備和農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易中占有極其重要的地位 [1] 小麥不僅經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，而且營(yíng)養(yǎng)豐富，小麥籽粒中含有人類(lèi)所必需的大量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其中碳水化合物含量占 60％ 80％，蛋白質(zhì)含量占 8％ 15％，脂肪含量占 ％％，礦物質(zhì)含量占 ％ ％，以及各種維生素等。 圍繞如何提高小麥的產(chǎn)量，世界很多國(guó)家在小麥品質(zhì)育種技術(shù)研究方面取得了很大成就，培育并推廣了許多農(nóng)藝性狀好的優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的小麥品種，其中花藥培養(yǎng)育種技術(shù)在培育新品種中有不錯(cuò)的成效。在小麥穗分化過(guò)程中 , 不同穗位小花發(fā)育不同步 , 所以幼穗的最適接種期彈性較大 , 但已抽穗的幼穗一般不宜再用做花藥培養(yǎng) , 以免影響愈傷誘導(dǎo)率?；ㄋ幍拈L(zhǎng)度及體積對(duì)其形成愈傷組織的能力也有影響。宣樸等 [18] 研究了轉(zhuǎn)愈初期短期低溫處理對(duì)小麥愈傷組織綠苗分化率的影響。培養(yǎng)基中的有機(jī)成分對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)同樣具有重要作用。所用脫分化培養(yǎng)基為 C17培 養(yǎng)基，約 20天后陸續(xù)長(zhǎng)出愈傷組織。在培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 2～ 3天苗見(jiàn)長(zhǎng)后移入春化培養(yǎng)箱，溫度 8℃，進(jìn)行春化培養(yǎng) 35天。 3月 4月：確定方案 。立題依據(jù)充分。 總 分 100 注：本表為答辯小組成員評(píng)分用表，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參照《河北農(nóng)業(yè)大學(xué)畢業(yè)論文質(zhì)量評(píng)定參考標(biāo)準(zhǔn)》 河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 屆本科畢業(yè)論文答辯記錄表 所在學(xué)院： 專(zhuān) 業(yè)班級(jí)： 時(shí)間： 年 月 日 學(xué) 生 姓 名 學(xué) 號(hào) 指導(dǎo)教師姓名 職 稱(chēng) 畢業(yè)論文題目： 答 辯 小 組 成 員 姓 名 職 稱(chēng) 成 績(jī) 姓 名 職 稱(chēng) 成 績(jī) 答辯小組評(píng)語(yǔ)： 答辯小組組長(zhǎng)：（簽字） 年 月 日 答 辯 成 績(jī)： 注：本表與學(xué)生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）一同在學(xué)院存檔（必須用鋼筆書(shū)寫(xiě)） 小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建 DH 群體 農(nóng)學(xué)專(zhuān)業(yè) 0902 班：王冬旭 指導(dǎo)老師： 劉桂茹 摘要： 本文對(duì)親本性狀差異較大、來(lái)源不同的 5個(gè)小麥組合的 F1代植株進(jìn)行花藥培養(yǎng)，創(chuàng)建 DH群體，該群體在遺傳學(xué)、形態(tài)發(fā)生學(xué)和分子生物學(xué)等基礎(chǔ)研究提供了豐富的背景和遺傳穩(wěn)定的材料 , 而且對(duì)于單倍體的育種實(shí)踐也有重要意義。 方法 小麥單 倍體的創(chuàng)建 接種花藥，培養(yǎng)愈傷組織 4月 29日～ 5月 2日取花粉處于單核靠邊期的 5個(gè)組合小麥的植株幼穗，在無(wú)菌操作室內(nèi)，用 %的升汞對(duì)幼穗進(jìn)行表面消毒 8分鐘，蒸餾水洗去殘留升汞。 壯苗培養(yǎng)和移栽 根系發(fā)達(dá)的小麥苗同轉(zhuǎn)生根培養(yǎng)基方法相同再轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基 中。另外，在分化綠苗的愈傷組織中，愈傷組織分化出的白、綠嵌合苗， 這一部分愈傷組織計(jì)算到分化綠苗的愈傷組織數(shù)里。 3 討論 試驗(yàn)共獲得 893株綠苗 ， 12（ 238）組合綠苗最多， 324株， 12（ 233）組合綠苗最少， 69株 ,平均出愈率 %，綠苗分化率和綠苗誘導(dǎo)率平均為 %和%，與宋運(yùn)賢等 [9]研究相比，出愈率、綠苗誘導(dǎo)率分別提高 %、 %，與葉興國(guó)等 [10]研究相比，綠苗分化率提高 %。本試驗(yàn)單倍體植株的平均自然加倍率為 %，受材料和環(huán)境因素個(gè)別材料自然加倍率低。 單倍體植株的加倍問(wèn)題，仍然是花培中需要繼續(xù)探討和有待進(jìn)一步解決的問(wèn)題。不同組合花藥愈傷組織幼苗分化率差異明顯。幼苗移栽時(shí) , 需提前 3～ 5天打開(kāi)培養(yǎng)瓶的蓋子 , 置于室溫下煉苗 , 移栽時(shí)需洗去培養(yǎng)基，覆蓋塑料膜保溫、保濕 [7]。分化培養(yǎng)基用 C17+KT +NAA ，30g/L蔗糖。小麥?zhǔn)俏覈?guó)主要糧食作物之一，花藥培養(yǎng)技術(shù)對(duì)小麥育種具有突出優(yōu)點(diǎn)，純合速度快，后代穩(wěn)定性好，從而縮短育種年限，提高選擇的準(zhǔn)確性及可靠性 [2]。 理論基礎(chǔ)與科研能力 16 具有堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)理論和系統(tǒng)的專(zhuān)門(mén)知識(shí)，具有較強(qiáng) 的 獨(dú)立從事科研工作的能力，研究方法和技術(shù)體系得當(dāng)。 論文對(duì)小麥花藥培養(yǎng) DH 群體的研究，論文選題針對(duì)性強(qiáng)，依據(jù)充分，具有一定的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。 小麥單倍體加倍 把移栽的單倍體幼苗置于溫棚中進(jìn)行自然加倍； 統(tǒng)計(jì)方法 主要指標(biāo)計(jì)算方法如下： 花粉愈傷組織誘導(dǎo)率（簡(jiǎn)稱(chēng)出愈率）（ %） =花粉愈傷組織總數(shù) /接種花藥總數(shù) 100； 綠（或白）苗分化率（ %） =分化綠（或白）苗數(shù) /花粉愈傷組織數(shù) 100； 綠苗誘導(dǎo)率（ %） =分化綠苗數(shù) /接種花藥數(shù) 100。 生根培養(yǎng) 花粉綠苗長(zhǎng)到 4～ 5cm高時(shí)，在超凈工作臺(tái)上將其轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培 養(yǎng)， 7～ 15天后促進(jìn)根系發(fā)達(dá)。小麥分蘗和次生根大量發(fā)生最適宜的溫度為 14 ℃，這個(gè)溫度有利于小麥單倍體試管苗的分蘗和次生根的生長(zhǎng) , 并能及時(shí)從土壤里吸收營(yíng)養(yǎng) ,同時(shí)由于移栽溫度低也控制了各種病害的浸染。 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響 在花藥培養(yǎng)過(guò)程 中 , 大部分小孢子退化 , 只有少部分小孢子發(fā)生分裂形成多核花粉粒 , 并進(jìn)一步產(chǎn)生愈傷組織而撐破花藥壁 , 這也是產(chǎn)生單倍體植株 ( 或胚狀體 ) 的前提。王培等 [13] 利用 C17 的浸潤(rùn)培養(yǎng)基進(jìn)行花藥培養(yǎng) , 發(fā)現(xiàn)花藥愈傷組織誘導(dǎo)率從固體培養(yǎng)基的 13. 94% 提高到 29. 95% , 愈傷組織的綠苗分化率也明顯提高。申書(shū)興等 [10] 研究認(rèn)為小孢子培養(yǎng)開(kāi)始時(shí) , 熱激處理 ( 33 ℃ , 24 h) 后 25 ℃ 下培養(yǎng)能促進(jìn)四倍體大白菜小孢子進(jìn)行對(duì)稱(chēng)分裂 , 有利于愈傷組織的產(chǎn)生及獲得大量胚狀體。 植物幼穗發(fā)育時(shí)期與誘導(dǎo)率 花藥培養(yǎng)中 愈傷組織的誘導(dǎo)受多種生理