【導(dǎo)讀】牛乳中抗生素殘留的檢測。黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計）評語（一）。姓名學(xué)號專業(yè)班級總成績。答辯委員會成員簽字。本表一式三份，學(xué)生本人、指導(dǎo)教師、學(xué)部各一份。本實驗采用國標(biāo)TTC法，紙片法和試劑盒法三種微生物方法對哈爾濱市大型超市。中不同品牌的13種牛奶進(jìn)行抗生素檢測,并對三種微生物法進(jìn)行比較?？焖贆z測法比TTC法和微生物紙片法的靈敏度要高，國標(biāo)TTC法檢測結(jié)果不是很準(zhǔn)確；紙片法雖然較準(zhǔn)確但前序工作所耗時間特別長。

　　

【正文】 紫色 ＋ 花色奶 7 淡黃色 － 8 淡紫色 ＋ /－ 9 紫色 ＋ 10 淺紫色 ＋ 11 紫色 ＋ 12 黃色 － 13 紫色 ＋ 陽性對照 14 紫色 ＋ 15 深紫色 ＋ 陰性對照 16 黃色 － 17 淡黃色 － 注： +為陽性， 為陰性 ,+/為可疑。 快速檢測法測得的結(jié)果： 顯紫色的奶樣有奶樣 1 13，為陽性，有抗生素存在； 顯淡紫色奶樣有奶樣 8，為可疑奶樣，可能含有抗生素殘留； 顯黃色的奶樣有奶樣 12，為陰性，無抗生素殘留。 樣品 1 15為對照實驗，均顯紫色，為陽性，青霉 素抑制微生物生長； 樣品 1 17為對照實驗，均顯黃色，為陰性，說明無抗生素。 實驗表明試劑盒沒有問題，對照實驗成功，抗生素抑制微生物生長。 黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計） 17 紙片法 判斷方法 把含有青霉素的對照紙片也安放在瓊脂表面，各作 2個濾片，標(biāo)記不同的濾片位置。翻轉(zhuǎn)平皿，于 (64177。2)℃ ，直到對照濾片得到很好確定的抑菌圈，一般為 4 h。樣品紙片如有明顯的抑菌圈，直徑 14 mm，表示確診有抑菌物質(zhì)，為陽性，并結(jié)合青霉素 濾片的抑菌情況來確證是否為青霉素所致 (如 ≤14 mm則為陰性 )。 判定結(jié)果 測得結(jié)果見表 33 表 33 紙片法測得結(jié)果 品種 編號 抑菌圈（ mm） 判斷 純牛奶 1 0 － 2 15177。 － 3 0 － 4 0 － 5 0 － 6 0 － 花色奶 7 0 － 8 13177。 ＋ /－ 9 0 － 10 13177。 ＋ /－ 11 0 － 12 0 － 13 15177。 ＋ 陽性對照 14 15177。 ＋ 15 15177。 ＋ 陰性對照 16 0 － 17 0 － 注： +為陽性， 為陰性 ,+/為可 疑。 紙片法測得結(jié)果： 有抑菌圈的奶樣有奶樣 2和 13，大約 15mm的抑菌圈，為陽性，有抗生素存在； 奶樣 8和 10有大約 13mm左右 的小圈 ,為可疑對象； 其他奶樣均無抑菌圈存在，為陰性說明無抗生素存在。 對照奶樣 1 15中青霉素抑制了微生物生長所以有大約 15mm的抑菌圈存在； 對照奶樣 1 17無抗生素存在，沒有抑菌圈生成，說明對照實驗成功。 黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計） 18 結(jié)果 統(tǒng)計 以上結(jié)果可以總結(jié)為下表 : 表 34 結(jié)果統(tǒng)計表 方法 陽性份數(shù) /份 陰性份數(shù) /份 可疑 /份 合計 /份 陽性率 /% TTC法 1 8 4 13 試劑盒法 8 4 1 13 紙片法 2 9 2 13 合計 11 21 7 39 由上表可以看出，被檢 13份樣品經(jīng)國標(biāo) TTC法檢測出 1份陽性樣品。陽性率為%；紙片法檢測可檢出 2份，陽性率為 %；快速試劑盒法檢測可檢出 8份，陽性率為 %。三種方法檢測結(jié)果差異顯著。 方法比較 從檢測時間 紙片法需培養(yǎng) 4 h以上才可見清晰明顯的抑菌圈，為了得到更為密集的菌落，可延長培養(yǎng)時間至 ~8 h。而國標(biāo) TTC法需 3~ h的檢 測時間；試劑盒法的在 出具體檢測結(jié)果。 但 紙片法和 TTC法所需前處理時間較長，試劑盒法因試劑盒是現(xiàn)成的不需要太久的準(zhǔn)備工作。在檢測時間方面，采用試劑盒法較試管檢測的 TTC法和紙片法鑒定平皿要節(jié)省時間 [17]。 從靈敏度上 試劑盒法在抗生素檢測的廣普性上明顯優(yōu)于國標(biāo)方法，靈敏度高。 TTC法的檢測限值較高，無法適應(yīng)現(xiàn)階段乳制品抗生素的測定需要，且在實驗中不斷的接種翻代使細(xì)菌抗藥性增加，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。 紙片法易出現(xiàn)假陽性，微生物的量及操作不規(guī)范等因素會引起結(jié)果的不準(zhǔn)確性。 應(yīng) 用場所 試劑盒法適合于實際應(yīng)用現(xiàn)場測定及快速檢測 ,對于食品衛(wèi)生監(jiān)督部門來說是一種快速現(xiàn)場檢測抗生素殘留的有效手段，同時作為企業(yè)該方法亦可成為質(zhì)量控制的質(zhì)檢手段。而 TTC法和紙片法需要專門的實驗室和檢驗人員，檢測費用較高，現(xiàn)場可操黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計） 19 作性較差等，且結(jié)果需要幾十小時才能完成。 TTC法及紙片法在我國應(yīng)用較多，活性試驗在小規(guī)模工廠經(jīng)常使用。 判定結(jié)果的方便性 試劑盒法檢測方法簡單，判定非常清晰，肉眼判讀容易 (紫色和黃色 )及酶標(biāo)讀數(shù)，TTC法判斷較難 (粉色 )且不能儀器讀數(shù)。紙片法判斷較簡單，但易出現(xiàn)假陽性。 綜上所述 ，快速檢測方法檢測乳及乳制品中殘留抗生素最主要的特點是攜帶方便，操作簡單，省時省力，結(jié)果可靠，靈敏度高。同時提高了檢測的廣度 (既廣普性 )、準(zhǔn)確度和精確度。傳統(tǒng)微生物檢測法經(jīng)濟(jì)簡便，但國標(biāo) TTC法檢測限低于歐盟法典規(guī)定的 MRL殘留濃度，經(jīng)國標(biāo)法檢測合格的奶樣，抗生素含量仍舊超標(biāo)，對食品加工及消費者食用安全有很大潛在的危害，所以在實際檢測過程中，可以選用特異性、靈敏度與檢測限達(dá)到 MRL規(guī)定的紙片法作為國標(biāo) TTC法的補(bǔ)充 [18]。 當(dāng)前，試劑盒法是最為理想的微生物檢測方法，但產(chǎn)品的價格對中等發(fā)達(dá)國家來講相 對較高。這些微生物檢測法方便、經(jīng)濟(jì)，不同程度的應(yīng)用于原料乳及乳制品中抗生素檢測，但由于乳本身因素和外部因素，常出現(xiàn)假陽性檢測結(jié)果，降低了檢測的準(zhǔn)確性。 黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計） 20 結(jié) 論 本實驗采用三種微生物法檢測牛奶中抗生素的結(jié)果如下： 1. TTC 法檢測陽性率為： % 2. 紙片法檢測陽性率為： % 3. 試劑盒法檢測陽性率為： % 快速檢測法比 TTC法和微生物紙片法的靈敏度要高， 國標(biāo) TTC法 檢測結(jié)果判斷不方便 ；紙片法雖然較準(zhǔn)確但前序工作所耗時間特別長。 用微生物抑制方法檢測牛奶中的抗生素殘留，具有靈敏、快速、 操作方便和易掌握的特點，該方法不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備，非常適合基層食品廠和檢驗檢測機(jī)構(gòu)作為抗生素殘留的快速篩選方法。 黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計） 21 參考文獻(xiàn) [1] 馬雙青 .消毒奶中抗生素殘留的調(diào)查 [J].中國奶牛 ,2020(6):47,48. [2] 李愛師 .動物性食品中獸藥殘留問題 [J].解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志 ,1997,15(3):232234. [3] 劉健華 ,陳杖榴．動物性食品中抗菌藥殘留對人體腸道菌群的影響及其研究模型與方法 [Ｊ ].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 ,2020,24(2)3739. [4] 胡松華 .乳房炎治療后牛奶中的抗生素殘留 [J].中國獸醫(yī)雜志 ,1999,25(5):52,53 [5] 陳懷宇 ,黃周英 ,林育騰等 .牛乳中抗生素的殘留與危害現(xiàn)狀 [J].泉州師范學(xué)院學(xué)報 ,2020，22(6):102 106. [6] 丁潔 .南京市牛乳中抗生素殘留的現(xiàn)狀分析 [J].中國食品衛(wèi)生 ,1999,14(3)： 30 32. [7] 陳邵鈴 .畜產(chǎn)品藥物殘留問題及檢測技術(shù)的展望 [J].中國禽業(yè)導(dǎo)刊 ,1999,16(2):4,5. [8] 闞鹿楓 .用細(xì)菌抑菌實驗法快速檢測抗微生物藥物在動物組織中的殘留 [J].中國獸 藥雜志 ,2020,34(4):57~59. [9] 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)．食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗鮮乳中抗生素殘留量檢驗． GB/[S]． [10] 孟昭赫．食品衛(wèi)生檢驗方法注釋（ 微生物學(xué)部分）［Ｍ］．北京：人民衛(wèi)生出版社 ,1996:873849. 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Interactions of antimicrobials in milk and their detection by the disk diffusion method and DelovtestSP [J].Journal of AOAC international, 2020, 86(3).526533. 黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計） 22 致 謝 在這短暫的實驗期間，我學(xué)到了很多東西：老師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，一絲 不茍的科研精神，淵博的知識，這一切將在我未來的人生和科學(xué)道路上產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。在此，向給予我不倦教誨和關(guān)懷的錢鐳老師表示忠心的感謝。 錢鐳老師的悉心教誨，使我在學(xué)術(shù)專業(yè)方面有了一定的提高，更為重要的是，老師在治學(xué)為人上的那份耐心執(zhí)著和熱誠，也深深地影響著我，并將鼓勵我在未來的路上不斷地探索、前進(jìn) ! 在試驗的設(shè)計，實施和論文撰寫過程中錢鐳 老師給予了極大的幫助和指導(dǎo)。在試驗過程中，還得到了雒江菡、張 筠 老師的熱心幫助，在此一并致以深深的謝意。 感謝所有給以我支持和幫助的朋友、同學(xué)們 ! 最后，感謝在百忙之中審閱本文的專 家、老師們 ! 謝謝大家 !黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計） 23