【導(dǎo)讀】牛乳中抗生素殘留的檢測(cè)。黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）評(píng)語（一）。姓名學(xué)號(hào)專業(yè)班級(jí)總成績。答辯委員會(huì)成員簽字。本表一式三份，學(xué)生本人、指導(dǎo)教師、學(xué)部各一份。本實(shí)驗(yàn)采用國標(biāo)TTC法，紙片法和試劑盒法三種微生物方法對(duì)哈爾濱市大型超市。中不同品牌的13種牛奶進(jìn)行抗生素檢測(cè),并對(duì)三種微生物法進(jìn)行比較?？焖贆z測(cè)法比TTC法和微生物紙片法的靈敏度要高，國標(biāo)TTC法檢測(cè)結(jié)果不是很準(zhǔn)確；紙片法雖然較準(zhǔn)確但前序工作所耗時(shí)間特別長。

　　

【正文】 紫色 ＋ 花色奶 7 淡黃色 － 8 淡紫色 ＋ /－ 9 紫色 ＋ 10 淺紫色 ＋ 11 紫色 ＋ 12 黃色 － 13 紫色 ＋ 陽性對(duì)照 14 紫色 ＋ 15 深紫色 ＋ 陰性對(duì)照 16 黃色 － 17 淡黃色 － 注： +為陽性， 為陰性 ,+/為可疑。 快速檢測(cè)法測(cè)得的結(jié)果： 顯紫色的奶樣有奶樣 1 13，為陽性，有抗生素存在； 顯淡紫色奶樣有奶樣 8，為可疑奶樣，可能含有抗生素殘留； 顯黃色的奶樣有奶樣 12，為陰性，無抗生素殘留。 樣品 1 15為對(duì)照實(shí)驗(yàn)，均顯紫色，為陽性，青霉 素抑制微生物生長； 樣品 1 17為對(duì)照實(shí)驗(yàn)，均顯黃色，為陰性，說明無抗生素。 實(shí)驗(yàn)表明試劑盒沒有問題，對(duì)照實(shí)驗(yàn)成功，抗生素抑制微生物生長。 黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 17 紙片法 判斷方法 把含有青霉素的對(duì)照紙片也安放在瓊脂表面，各作 2個(gè)濾片，標(biāo)記不同的濾片位置。翻轉(zhuǎn)平皿，于 (64177。2)℃ ，直到對(duì)照濾片得到很好確定的抑菌圈，一般為 4 h。樣品紙片如有明顯的抑菌圈，直徑 14 mm，表示確診有抑菌物質(zhì)，為陽性，并結(jié)合青霉素 濾片的抑菌情況來確證是否為青霉素所致 (如 ≤14 mm則為陰性 )。 判定結(jié)果 測(cè)得結(jié)果見表 33 表 33 紙片法測(cè)得結(jié)果 品種 編號(hào) 抑菌圈（ mm） 判斷 純牛奶 1 0 － 2 15177。 － 3 0 － 4 0 － 5 0 － 6 0 － 花色奶 7 0 － 8 13177。 ＋ /－ 9 0 － 10 13177。 ＋ /－ 11 0 － 12 0 － 13 15177。 ＋ 陽性對(duì)照 14 15177。 ＋ 15 15177。 ＋ 陰性對(duì)照 16 0 － 17 0 － 注： +為陽性， 為陰性 ,+/為可 疑。 紙片法測(cè)得結(jié)果： 有抑菌圈的奶樣有奶樣 2和 13，大約 15mm的抑菌圈，為陽性，有抗生素存在； 奶樣 8和 10有大約 13mm左右 的小圈 ,為可疑對(duì)象； 其他奶樣均無抑菌圈存在，為陰性說明無抗生素存在。 對(duì)照奶樣 1 15中青霉素抑制了微生物生長所以有大約 15mm的抑菌圈存在； 對(duì)照奶樣 1 17無抗生素存在，沒有抑菌圈生成，說明對(duì)照實(shí)驗(yàn)成功。 黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 18 結(jié)果 統(tǒng)計(jì) 以上結(jié)果可以總結(jié)為下表 : 表 34 結(jié)果統(tǒng)計(jì)表 方法 陽性份數(shù) /份 陰性份數(shù) /份 可疑 /份 合計(jì) /份 陽性率 /% TTC法 1 8 4 13 試劑盒法 8 4 1 13 紙片法 2 9 2 13 合計(jì) 11 21 7 39 由上表可以看出，被檢 13份樣品經(jīng)國標(biāo) TTC法檢測(cè)出 1份陽性樣品。陽性率為%；紙片法檢測(cè)可檢出 2份，陽性率為 %；快速試劑盒法檢測(cè)可檢出 8份，陽性率為 %。三種方法檢測(cè)結(jié)果差異顯著。 方法比較 從檢測(cè)時(shí)間 紙片法需培養(yǎng) 4 h以上才可見清晰明顯的抑菌圈，為了得到更為密集的菌落，可延長培養(yǎng)時(shí)間至 ~8 h。而國標(biāo) TTC法需 3~ h的檢 測(cè)時(shí)間；試劑盒法的在 出具體檢測(cè)結(jié)果。 但 紙片法和 TTC法所需前處理時(shí)間較長，試劑盒法因試劑盒是現(xiàn)成的不需要太久的準(zhǔn)備工作。在檢測(cè)時(shí)間方面，采用試劑盒法較試管檢測(cè)的 TTC法和紙片法鑒定平皿要節(jié)省時(shí)間 [17]。 從靈敏度上 試劑盒法在抗生素檢測(cè)的廣普性上明顯優(yōu)于國標(biāo)方法，靈敏度高。 TTC法的檢測(cè)限值較高，無法適應(yīng)現(xiàn)階段乳制品抗生素的測(cè)定需要，且在實(shí)驗(yàn)中不斷的接種翻代使細(xì)菌抗藥性增加，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。 紙片法易出現(xiàn)假陽性，微生物的量及操作不規(guī)范等因素會(huì)引起結(jié)果的不準(zhǔn)確性。 應(yīng) 用場所 試劑盒法適合于實(shí)際應(yīng)用現(xiàn)場測(cè)定及快速檢測(cè) ,對(duì)于食品衛(wèi)生監(jiān)督部門來說是一種快速現(xiàn)場檢測(cè)抗生素殘留的有效手段，同時(shí)作為企業(yè)該方法亦可成為質(zhì)量控制的質(zhì)檢手段。而 TTC法和紙片法需要專門的實(shí)驗(yàn)室和檢驗(yàn)人員，檢測(cè)費(fèi)用較高，現(xiàn)場可操黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 19 作性較差等，且結(jié)果需要幾十小時(shí)才能完成。 TTC法及紙片法在我國應(yīng)用較多，活性試驗(yàn)在小規(guī)模工廠經(jīng)常使用。 判定結(jié)果的方便性 試劑盒法檢測(cè)方法簡單，判定非常清晰，肉眼判讀容易 (紫色和黃色 )及酶標(biāo)讀數(shù)，TTC法判斷較難 (粉色 )且不能儀器讀數(shù)。紙片法判斷較簡單，但易出現(xiàn)假陽性。 綜上所述 ，快速檢測(cè)方法檢測(cè)乳及乳制品中殘留抗生素最主要的特點(diǎn)是攜帶方便，操作簡單，省時(shí)省力，結(jié)果可靠，靈敏度高。同時(shí)提高了檢測(cè)的廣度 (既廣普性 )、準(zhǔn)確度和精確度。傳統(tǒng)微生物檢測(cè)法經(jīng)濟(jì)簡便，但國標(biāo) TTC法檢測(cè)限低于歐盟法典規(guī)定的 MRL殘留濃度，經(jīng)國標(biāo)法檢測(cè)合格的奶樣，抗生素含量仍舊超標(biāo)，對(duì)食品加工及消費(fèi)者食用安全有很大潛在的危害，所以在實(shí)際檢測(cè)過程中，可以選用特異性、靈敏度與檢測(cè)限達(dá)到 MRL規(guī)定的紙片法作為國標(biāo) TTC法的補(bǔ)充 [18]。 當(dāng)前，試劑盒法是最為理想的微生物檢測(cè)方法，但產(chǎn)品的價(jià)格對(duì)中等發(fā)達(dá)國家來講相 對(duì)較高。這些微生物檢測(cè)法方便、經(jīng)濟(jì)，不同程度的應(yīng)用于原料乳及乳制品中抗生素檢測(cè)，但由于乳本身因素和外部因素，常出現(xiàn)假陽性檢測(cè)結(jié)果，降低了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。 黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 20 結(jié) 論 本實(shí)驗(yàn)采用三種微生物法檢測(cè)牛奶中抗生素的結(jié)果如下： 1. TTC 法檢測(cè)陽性率為： % 2. 紙片法檢測(cè)陽性率為： % 3. 試劑盒法檢測(cè)陽性率為： % 快速檢測(cè)法比 TTC法和微生物紙片法的靈敏度要高， 國標(biāo) TTC法 檢測(cè)結(jié)果判斷不方便 ；紙片法雖然較準(zhǔn)確但前序工作所耗時(shí)間特別長。 用微生物抑制方法檢測(cè)牛奶中的抗生素殘留，具有靈敏、快速、 操作方便和易掌握的特點(diǎn)，該方法不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備，非常適合基層食品廠和檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)作為抗生素殘留的快速篩選方法。 黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 21 參考文獻(xiàn) [1] 馬雙青 .消毒奶中抗生素殘留的調(diào)查 [J].中國奶牛 ,2020(6):47,48. [2] 李愛師 .動(dòng)物性食品中獸藥殘留問題 [J].解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志 ,1997,15(3):232234. [3] 劉健華 ,陳杖榴．動(dòng)物性食品中抗菌藥殘留對(duì)人體腸道菌群的影響及其研究模型與方法 [Ｊ ].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 ,2020,24(2)3739. [4] 胡松華 .乳房炎治療后牛奶中的抗生素殘留 [J].中國獸醫(yī)雜志 ,1999,25(5):52,53 [5] 陳懷宇 ,黃周英 ,林育騰等 .牛乳中抗生素的殘留與危害現(xiàn)狀 [J].泉州師范學(xué)院學(xué)報(bào) ,2020，22(6):102 106. [6] 丁潔 .南京市牛乳中抗生素殘留的現(xiàn)狀分析 [J].中國食品衛(wèi)生 ,1999,14(3)： 30 32. [7] 陳邵鈴 .畜產(chǎn)品藥物殘留問題及檢測(cè)技術(shù)的展望 [J].中國禽業(yè)導(dǎo)刊 ,1999,16(2):4,5. [8] 闞鹿楓 .用細(xì)菌抑菌實(shí)驗(yàn)法快速檢測(cè)抗微生物藥物在動(dòng)物組織中的殘留 [J].中國獸 藥雜志 ,2020,34(4):57~59. [9] 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)．食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)鮮乳中抗生素殘留量檢驗(yàn)． GB/[S]． [10] 孟昭赫．食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法注釋（ 微生物學(xué)部分）［Ｍ］．北京：人民衛(wèi)生出版社 ,1996:873849. [11] 吳國娟．市售消毒純牛奶中抗菌藥物殘留的檢測(cè)［Ｊ］．北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2020,17(2):33_37. [12] LINDEMANN G ZUNDEL Test with Triphenyletrazolium Chloride (TTC) as a Method for Bacteriologic Testing of Human Milk[J].Kinderarzu Prax,1957。25(12):54 57. [13] of the improved Dutch tube diffusion test for detection of antimicrobial residues in Kenyan milk [J].The Journal of Food Technology in Africa,2020,(6):57. [14] 劉宏道 .中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)（食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法微生物部分 ,GIM789—94） [S].北京 ,中國標(biāo)準(zhǔn)出版社 ,1997. [15] 馬兆瑞 ,祝戰(zhàn)斌 ,卡爾 萊金特 .乳和乳制品中殘留抗生素的檢測(cè)方法 [J].中國乳品工業(yè) 2020， 31(4):37 40. [16] 黃怡君 ,姜也文 ,胡松華 ,等 . TTC 法檢測(cè)牛奶中的抗菌藥物 [J].中國乳業(yè) ,2020,31(5):57 59. [17] 陳福生，高志賢，王建華．食品安全檢 測(cè)與現(xiàn)代生物技術(shù)［Ｍ］．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2020:7579． [18] INETAK, BEANDETTH. Interactions of antimicrobials in milk and their detection by the disk diffusion method and DelovtestSP [J].Journal of AOAC international, 2020, 86(3).526533. 黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 22 致 謝 在這短暫的實(shí)驗(yàn)期間，我學(xué)到了很多東西：老師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，一絲 不茍的科研精神，淵博的知識(shí)，這一切將在我未來的人生和科學(xué)道路上產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。在此，向給予我不倦教誨和關(guān)懷的錢鐳老師表示忠心的感謝。 錢鐳老師的悉心教誨，使我在學(xué)術(shù)專業(yè)方面有了一定的提高，更為重要的是，老師在治學(xué)為人上的那份耐心執(zhí)著和熱誠，也深深地影響著我，并將鼓勵(lì)我在未來的路上不斷地探索、前進(jìn) ! 在試驗(yàn)的設(shè)計(jì)，實(shí)施和論文撰寫過程中錢鐳 老師給予了極大的幫助和指導(dǎo)。在試驗(yàn)過程中，還得到了雒江菡、張 筠 老師的熱心幫助，在此一并致以深深的謝意。 感謝所有給以我支持和幫助的朋友、同學(xué)們 ! 最后，感謝在百忙之中審閱本文的專 家、老師們 ! 謝謝大家 !黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 23