免疫細胞化學技術培訓講義(ppt53)-石油化工-資料下載頁
2025-08-06 15:15本頁面
【導讀】免疫細胞化學技術。第一節(jié)免疫細胞化學原理?？乖鳛橐活惤Y構復雜的大分子能刺激機體。產生對其特異的抗體并與抗體發(fā)生反應。把組織細胞中的特異分。者標記抗原抗體復合物)使特。性,從而間接地顯示抗原,達。到在細胞或細胞器水平定位。組織抗原抗體標記物。物質所具有的這種特性稱為抗原性。酶、受體、抗體、細胞外基質。激素、細胞結構蛋白、病原體等。Fab片段具有抗體活性，決定某種抗體。免疫動物后從動物血清制備得。單克隆抗體—是指由單個產生特異抗體的。Ｂ淋巴細胞分化增殖形成的。免疫熒光技術將熒光素作為標記物。物在熒光顯微鏡下可見，從而顯示?？贵w聯接成酶標抗體。最后加入底物，從而達。二抗又將PAP復合物與第一抗體連接在一起?；瘜W反應使抗原抗體反應可見。利用兩種物質高度親和力而互相結合定位特異分子。度親和力又能與抗體、蛋白質及各種標
【正文】 法有 : 直接法、間接法 間接法中有 : 二抗、三抗或復合物 標記系統(tǒng)有 : 熒光素、酶、親和素 膠體金 觀察方法有 : 熒光顯微鏡、普通光鏡、電鏡 三、基本實驗過程 (海量營銷管理培訓資料下載 ) 切片 ,丙酮固定，石蠟切片 脫蠟 復水 1%H2O2 /甲醇 阻斷 內源性過氧化物酶 正常羊血清 (二抗的正常血清 )1:20室溫 封閉 適當稀釋 一抗 (兔抗體 )孵育 適當稀釋 二抗 (羊抗體 )孵育 適當稀釋兔 PAP復合物 孵育 %DAB+%H2O2 顯色 ，充分水洗終止反應 蘇木素襯染 ,封片 光鏡觀察 棕褐色陽性 反應沉淀物 過氧化物酶－抗過氧化物酶復合物法（ PAP法） (海量營銷管理培訓資料下載 ) 80nm左右厚度超薄切片置于鎳網上 110%H2O2蝕刻 1%BSA室溫封閉 適當稀釋一抗孵育室溫 1%BSA室溫封閉 適當稀釋的 1020nm金標 A 含 2%戊二醛 /3%多聚甲醛固定 鈾、鉛染色 電鏡觀察高電子密度的金顆粒 電鏡包埋后膠體金細胞化學反應 (海量營銷管理培訓資料下載 ) (一 )樣品固定：抗原和結構的保存 (二 )抗體、標記物以及方法選擇： 單抗、多抗 種屬關系 (三 )通透處理：蛋白酶、表面活性劑 (四 )對照設定：陰性、陽性、自身對照 (五 )非特異反應的鑒別和抑制：封閉、稀釋 阻斷 四、一些關鍵問題 第六章 重點 一、免疫細胞化學反應原理 把組織細胞中的特異分子作為抗原 , 用在顯微鏡下的可見標記物 (或標記抗原抗體復合物 )標記特異抗體 ,使特異的免疫化學反應具有可見性 從而間接地顯示抗原 ,達到在細胞或細胞器水平定位特異分子的目的 二、簡述免疫細胞化學的直接法和間接法 直接法 ：組織抗原直接與標記的特異抗體反應 間接法 ： 抗原與未標記的特異抗體（一抗）反應 一抗再作為抗原與標記的第二抗體反應 三、何謂標記物，包括哪幾種？ 標記物：使抗體或抗原抗體復合物在各種顯微 鏡下可見的物質 包括： 免疫熒光技術 免疫酶技術 3 免疫親和技術 膠體金技術 (海量營銷管理培訓資料下載 ) 四、簡述四、簡述 APAAP 法的原理法的原理 （（ A lkaline p hosphotase －－ A nti a lkaline p hosphotase ）） 堿性磷酸酶堿性磷酸酶 抗堿性磷酸酶復合物法抗堿性磷酸酶復合物法 APAAP 法的原理是法的原理是 以堿性磷酸酶為標記物以堿性磷酸酶為標記物 , 通過與通過與其底物的細胞化學反應使抗原抗體反應可見其底物的細胞化學反應使抗原抗體反應可見 五、 簡述 PAP法 （ PeroxidaseAntiperoxidase,PAP） 過氧化物酶 抗過氧化物酶復合物法 一抗與組織抗原特異結合 二抗又將 PAP復合物與一抗連接在一起 然后加入 HRP的天然底物 H2 O2 和捕捉底物 DAB 光鏡 棕黃色反應產物 (組織抗原的定位 ) 電鏡 與鋨酸反應，呈 高電子密度鋨黑 （超微結構 定位抗原）
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