20xx年醫(yī)學(xué)專題—第2章浸礦用細菌(編輯修改稿)
2024-11-16 00:28 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ,第四十三頁，共八十頁。,2.2.2.3 氧化亞鐵微螺菌(L.f菌),氧化亞鐵微螺菌( Leptospirillum ferrooxidans簡稱L.f) 1974 年 ,Balashova 等人從 Armenia 銅礦分離出L.f菌株 ,發(fā)現(xiàn)它只能氧化(yǎnghu224。)溶液中的亞鐵離子 ,對元素硫及硫化礦物無氧化(yǎnghu224。)作用。,圖 L.f 菌 的SEM 照片(zh224。opi224。n) ,第四十四頁，共八十頁。,2.2.3中等(zhōngděng)嗜熱細菌,主要為硫桿菌屬 Sulfobacillus 的 TH株系 ,在50 ℃左右依賴黃鐵礦、黃銅礦生長.絕大多數(shù)需要酵母提取液或某種有機物為營養(yǎng)物. 1992年Golovacheva.R.S.等分離出微螺菌屬的一種中等嗜熱菌L.thermoferrooxidans，其適應(yīng)(sh236。y236。ng)溫度范圍為45～50176。C，最佳pH為1.65～1.9，如圖5所示 ，該菌螺旋狀，有鞭毛，嗜氧，只能氧化水溶液與礦物中，屬硫桿菌屬，不能氧化亞鐵，可氧化還原態(tài)硫。,圖. 等嗜熱菌L.thermoferrooxidans 的SEM照片(zh224。opi224。n),第四十五頁，共八十頁。,2.2.4 高溫(gāowēn)菌(Thermocidophiles),嗜酸嗜高溫古細菌（Thermocidophili archaebacteria）是微生物進化的一個獨支系，共四個種屬能氧化硫化物，即：硫化葉菌(Sulfololus),氨基酸變性菌(Acidanus),金屬球菌(Metallosphaera)和硫化小球菌(Sulfurococcus)都極端(j237。duān)嗜高溫、嗜酸，球狀無鞭毛，不游動，直徑為1μm，多分布在含硫溫泉中。近年來，云南熱溫泉水中發(fā)現(xiàn)了一種高溫菌，在65溫度下浸出黃銅礦，其速率為氧化亞鐵硫桿菌的6倍，其形貌如圖6所示，是一種嚴格無機化能自養(yǎng)型嗜熱嗜酸菌,圖. 云南熱溫泉水中的高溫(gāowēn)菌（40000 ）,第四十六頁，共八十頁。,2.3 細菌的采集(cǎij237。)、培養(yǎng)與馴化,2.3.1 浸礦細菌的采集 目前 ,生物浸出中最重要的浸礦細菌是以轉(zhuǎn)化還原態(tài)硫、亞鐵為標志的兩種類型的短桿菌屬 。它們具有專性好氧 ,嗜酸性 ,以氨、硫酸鹽、磷酸鹽、鉀、鈣、鎂等無機物為養(yǎng)料 ,生長所需的碳和氧從空氣中攝取等特性 ,是浸礦中必要的酸性介質(zhì)和強氧化劑。這兩種類型的細菌相對集中地存在于金屬(jīnshǔ)硫化礦、氧化礦以及煤礦的酸性礦坑水和土壤中 ,采集這類細菌的最佳采樣點是銅礦、鈾礦、金礦等有酸性礦坑水的地方。,第四十七頁，共八十頁。,a.采集(cǎij237。)地點,浸礦細菌可分布于土壤、水體及空氣中，但較為集中的地方是金屬硫化礦及煤礦的酸性礦坑(ku224。ngkēng)水。所以采集這類菌的最佳取樣點是煤礦、銅礦、鈾礦等有酸性礦坑水的地方。如，礦坑水的pH值為1.5～3.5并呈棕色（說明有Fe3+存在），則很可能存在氧化鐵硫桿菌。,第四十八頁，共八十頁。,b.采集(cǎij237。)方法,取50~250mL細口瓶、洗凈并配好膠塞，用牛皮紙包扎好瓶口，置于120℃烘箱滅菌20min，冷卻(lěngqu232。)后可作為細菌取樣瓶，帶取樣瓶到上述礦山取酸性坑水。,第四十九頁，共八十頁。,2.3.2 浸礦細菌(x236。jūn)的培養(yǎng),(一） 培養(yǎng)步驟 1)配好的培養(yǎng)基用蒸汽滅菌15min后，在無菌操作下分裝于數(shù)個已洗凈(xǐ j236。nɡ)并滅菌的100mL三角瓶中。 2)每瓶裝培養(yǎng)基20mL，用洗凈(xǐ j236。nɡ)干燥吸液管分別取1～5mL礦水樣加到三角瓶中，塞好棉塞置于20～35℃恒溫下，靜置培養(yǎng)（或振動培養(yǎng)）7～10天。 3)細菌生長繁殖使三角瓶中培養(yǎng)基的顏色由淺綠變?yōu)榧t棕色，最后在瓶底出現(xiàn)高鐵沉淀。,第五十頁，共八十頁。,4)選擇變化最快，顏色最深的三角瓶，在瓶中取1mL培養(yǎng)液，接種到裝有新培養(yǎng)基的三角瓶中，同樣培養(yǎng)。培養(yǎng)液將比頭一次更快的變紅棕色。 5)按同樣辦法反復(fù)轉(zhuǎn)移(zhuǎny237。)培養(yǎng)10次以上。每轉(zhuǎn)移(zhuǎny237。)一次只需1～2滴，接種量逐漸減少而所培養(yǎng)的細菌卻越來越活躍，只需培養(yǎng)3～5天就可把培養(yǎng)基中的Fe2+氧化為Fe3+。,第五十一頁，共八十頁。,（二）培養(yǎng)目標,在轉(zhuǎn)移培養(yǎng)中，借助培養(yǎng)基的高酸度，可殺死淘汰掉一些不嗜酸的雜菌，同時由于(y243。uy)培養(yǎng)基中的高濃度亞鐵離子，只有氧化亞鐵的細菌才能生長繁殖，其他菌則被殺死淘汰掉，而氧化鐵硫桿菌則得到充分繁殖，活性越來越大。,第五十二頁，共八十頁。,（三）浸礦細菌(x236。jūn)的培養(yǎng)基,液體培養(yǎng)基 由水和溶在水中的各種無機鹽組成的，液體培養(yǎng)基用于粗略地分離培養(yǎng)某種微生物。 固體培養(yǎng)基 是在液體培養(yǎng)基中加入1.5%瓊脂（洋菜）或一定量硅膠(ɡuī jiāo)制成的。 方法：在加熱條件下配成一定濃度的消毒瓊脂溶液后，再加入無菌過濾的FeSO4等無機鹽母液，用H2SO4調(diào)節(jié)好酸度，冷卻至常溫即制成固體培養(yǎng)基。 進行微生物的純種分離則要用固體培養(yǎng)基。,第五十三頁，共八十頁。,常用(ch225。nɡ y242。nɡ)培養(yǎng)基,1) 9K培養(yǎng)基:適用于培養(yǎng)氧化鐵的喜中溫細菌(x236。jūn) ,其中 ρ((NH4)2SO4) = 3 g/L,ρ(KCl) = 0.1g/L, ρ(K2HPO4) = 0.5g/L,ρ(Mg
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