20xx年醫(yī)學(xué)專題—特異性微小rna-19a抑制劑對胃癌細(xì)胞增殖影響系列(編輯修改稿)
2024-11-12 01:21 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 室可進(jìn)行本實驗,第十二頁，共二十五頁。,五、研究(y225。njiū)方案設(shè)計,第十三頁，共二十五頁。,材料(c225。ili224。o),胃癌細(xì)胞SGC7901和MGC803（購于上海生化所細(xì)胞庫） DMEM培養(yǎng)液（4176。C保存） 胎牛血清 RNA提取Trizol法試劑 轉(zhuǎn)染Lipofectamine 2000試劑 實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)試劑盒 通用逆轉(zhuǎn)錄引物 針對微小RNA19a而設(shè)計(sh232。j236。)PCR擴增的引物 微小RNA抑制劑：抑制微小RNA19a活性的2’甲氧修飾的RNA寡核苷酸,第十四頁，共二十五頁。,第十五頁，共二十五頁。,方法(fāngfǎ),細(xì)胞培養(yǎng) 胃癌(w232。i 225。i)SGC7901和MGC803細(xì)胞在37度、含5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。DMEM培養(yǎng)液中含有10%小牛血清。選擇對數(shù)生長期細(xì)胞用于實驗。 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 轉(zhuǎn)染前1d , 選擇生長狀態(tài)良好的細(xì)胞胃癌細(xì)胞，以3105cells/well的密度接種6孔板，待細(xì)胞密度達(dá)到50%70%后，用lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑按轉(zhuǎn)染試劑盒說明書轉(zhuǎn)染，培養(yǎng)4小時后新鮮培養(yǎng)液。 細(xì)胞總RNA提取及實時定量RTPCR檢測微小RNA的表達(dá)水平 用Trizol試劑提取細(xì)胞內(nèi)總RNA并測定RNA濃度，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再按說明書進(jìn)行實時定量PCR，以U6作為小RNA含量的參照。PCR反應(yīng)條件為：先95度15min熱啟動，然后按94度15s、60度30s、72度30s
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