【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 時(shí)需用抗生素；(2）動(dòng)物細(xì)胞較微生物大得多，無(wú)細(xì)胞壁，機(jī)械強(qiáng)度低，適應(yīng)環(huán)境能力差；(3）培養(yǎng)過(guò)程需氧量少，且不耐受強(qiáng)力通風(fēng)與攪拌；(4）在機(jī)體中，細(xì)胞相互粘連以集群形式存在，培養(yǎng)過(guò)程具有群體效應(yīng)、錨地依賴(lài)性、接觸抑制性及功能全能性；（5）培養(yǎng)過(guò)程產(chǎn)物分布于細(xì)胞內(nèi)外，反應(yīng)過(guò)程成本較高，但產(chǎn)品價(jià)格昂貴；（6）大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)，不可套用微生物反應(yīng)的經(jīng)驗(yàn)；（7）原代培養(yǎng)細(xì)胞一般繁殖50代即退化死亡。48．深凍植物細(xì)胞復(fù)蘇后測(cè)其生命活力與存活率的三種方法：（1）再培養(yǎng)法：將復(fù)蘇后細(xì)胞立即接種于新鮮培養(yǎng) 基上再培養(yǎng)，同時(shí)測(cè)定細(xì)胞增殖量，愈傷組織形成情況及人化為新植株能力；（2）二醋酸光素染色法：%熒光素染料溶液與一滴化凍后細(xì)胞懸浮液混合，活細(xì)胞染色，死細(xì)胞不著色，用普通顯微鏡觀察計(jì)數(shù)得細(xì)胞總數(shù)，用紫外光顯微鏡觀計(jì)數(shù)得活細(xì)胞數(shù)，據(jù)此可計(jì)算出凍存細(xì)胞存活率；（3）TTC法：根據(jù)活細(xì)胞內(nèi)脫氫酶可將氯化三苯四氮唑還原為for mazam,后者溶于乙醇而不溶于水，故前者與凍細(xì)胞保溫反應(yīng)用乙醇抽提，再用分光光度法測(cè)定吸收度，用以判斷細(xì)胞存活率及生活力。49．動(dòng)物細(xì)胞固定化培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：（1）細(xì)胞可維持在較自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)小體積培養(yǎng)液中生長(zhǎng)；（2）細(xì)胞損傷程度低；（3）易于更換培養(yǎng)液；4）細(xì)胞和培養(yǎng)液易于分離；5）培養(yǎng)液中產(chǎn)物濃度高，簡(jiǎn)化了產(chǎn)品分離純化操作。50．中空纖維培養(yǎng)器優(yōu)點(diǎn)：（1）細(xì)胞生長(zhǎng)密度高；（2）營(yíng)養(yǎng)牧質(zhì)可有效分布，代謝產(chǎn)物可及時(shí)排除；（3）細(xì)胞培養(yǎng)可達(dá)數(shù)日，易于實(shí)現(xiàn)連續(xù)培養(yǎng)；（4）細(xì)胞分泌蛋白質(zhì)濃度高；（5）反應(yīng)器體積小并可用于培養(yǎng)多種細(xì)胞。液，混合均勻，再冷卻凝固成型和破碎即成固定化酶；(2)微囊化包埋法是將醇定位于具有豐透性膜的微小囊內(nèi)的技術(shù)，其基本制備方法有界面沉降法及界面聚合法兩類(lèi)。：(1)攪拌罐型反應(yīng)器；(2)固定床型反應(yīng)器；(3)流化床型反應(yīng)器；(4)膜型反應(yīng)器；(5)鼓泡塔型反應(yīng)器； 59．固定化酶的形狀：（1）顆粒狀固定化酶；（2）纖維應(yīng)液，置于沸水中，加熱使酶失知；（2）立即加入適宜的酶變性劑，使酶變性失活；3）加入酸或堿溶液，使反應(yīng)液的pH值迅速遠(yuǎn)離酶催化應(yīng)的最適pH值；（4）將取出的反應(yīng)液立即置于冰，或冰鹽溶液中，使反應(yīng)0液的溫度迅速低至10C以下。63．酶與一般催化劑相比，所具有的優(yōu)點(diǎn)：（1）催化效率高；（2）專(zhuān)一性強(qiáng)；（3）反應(yīng)條件溫和；（4）酶的活體酶的合成，釋放增強(qiáng)，促進(jìn)過(guò)氧化物酶合增強(qiáng)；（3）可促使白血病細(xì)胞分化及抑制白血病細(xì)胞生長(zhǎng)。74．集落刺激因子的臨床應(yīng)用：（1）治療血細(xì)胞減少癥；（2）治療再生障礙性貧血、骨髓發(fā)育不良和自體骨髓移植后的恢復(fù)；（3）治療癌癥；（4）治療AIDS。75．細(xì)胞因子受體的信息傳遞途徑：（1）通過(guò)受體本身的酷氨酸激傳遞遞信息；（2）通過(guò)息。76．用于制備細(xì)胞因子的培養(yǎng)細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)十分嚴(yán)格，對(duì)這些細(xì)胞的要求包括：（1）細(xì)胞來(lái)源要清楚；（2）細(xì)胞建株的鑒定資料要記錄清楚；（3）了解細(xì)胞系的生長(zhǎng)特性和在培養(yǎng)條件下的細(xì)胞的穩(wěn)定性；（4）培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)所用的血清不含細(xì)菌、病菌、真菌和支原體。77．干擾素的基本特性：（1）種屬特異性；（2）作用廣譜性和選擇性；（3）相對(duì)無(wú)害性；（4）特殊穩(wěn)定性。78．真核基因在原核細(xì)胞中獲得表達(dá)必須具備的三個(gè)條件：（1）要有原核細(xì)胞的啟動(dòng)子；（2）要有能與原核細(xì)胞16SrRNA3’端相配合的順序；（3）表達(dá)的干擾素多肽要不被細(xì)胞酶類(lèi)所迅速降解。79．IL2的生物學(xué)作用：（1）促T細(xì)胞增殖；（2）對(duì)自然殺傷細(xì)胞（NK）的作用；（3）誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生和增殖；（4）誘導(dǎo)淋巴因子活化淋巴細(xì)胞產(chǎn)生；（5）促B細(xì)胞增殖分化作用；（6）IL2與其他白介素協(xié)同作用。80．集落刺激因子的功能：（1）刺激造血細(xì)胞增殖；（2）維持細(xì)胞存活；（3）分化定型；（4）刺激終末細(xì)胞的功能活性。81．三種檢測(cè)重組基因工程CSF的方法（1）生物學(xué)檢測(cè)法；（2）分子生物學(xué)檢測(cè)法；（3）免疫學(xué)檢測(cè)法。82．TNF抗腫瘤作用的可能機(jī)制：（1）細(xì)胞的直接細(xì)胞毒及細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用；（2）腫瘤內(nèi)血管陰塞引起腫瘤缺血性壞死；（3）TNF的免疫調(diào)節(jié)作用可能在其抗瘤效應(yīng)中起一定的作用。：806235356 83．細(xì)胞因子共有特性：（1）多源性；（2）多效性；（3）高效性；（4）快速反應(yīng)性；（5）理化性質(zhì)：①化學(xué)本質(zhì)為大分子多肽或蛋白；②多為單鏈分子；③多具有“分泌型激素”的特性；④基因多由數(shù)個(gè)外顯子和內(nèi)含子組成；⑤基因均為單拷自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)貝；⑥分子量均小于80KD。84．細(xì)胞因子的受體，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和功能分類(lèi)：抗細(xì)菌、抗真菌作用；（8）熱原質(zhì)作用；（9）參與骨質(zhì)重吸收。種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因與調(diào)節(jié)基因廣泛地存在于脊椎動(dòng)物以上的細(xì)胞內(nèi)，在一般2激活的細(xì)胞表面抗原標(biāo)志，也說(shuō)明LAK殺傷腫瘤細(xì)胞效應(yīng)是白介素—2激恬（1）細(xì)胞因子受體的新家族；（2）腫瘤壞死因子受體家族；（3）免疫球蛋白超級(jí)家族受體； 85．基因工程細(xì)胞因子制備的基本步驟：1）制備含特異性細(xì)胞因子基因的cDNA文庫(kù)；（2）從cDNA文庫(kù)中篩選目cDNA克??；（3）構(gòu)建表達(dá)性載體，制備高級(jí)表達(dá)性工程菌（細(xì)胞）。86．干擾素的生物功能本質(zhì)：（1）抗細(xì)胞內(nèi)侵害；①抑制病毒繁殖；②抑制胞內(nèi)的其它微生物繁殖；（2）抗細(xì)胞分裂活性；（3）調(diào)節(jié)免疫功能活性；①調(diào)節(jié)免疫監(jiān)視功能；②調(diào)節(jié)免疫自穩(wěn)功能； 87．基因工程干擾素的制備方法：（1）干擾素工程菌的組建；①分離提取干擾素基因；②制備人工重組質(zhì)粒；③轉(zhuǎn)化宿主菌；（2）基因工程干擾素的制備；（3）基因工程干擾素的質(zhì)量控制； 88．集落刺激因子的檢測(cè)方法：（1）生物活性檢測(cè)法；①骨髓細(xì)胞集落形成法；②依賴(lài)細(xì)胞株；（2）分子生物學(xué)檢測(cè)法；斑點(diǎn)雜交法；（3）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)；雙抗體夾心ELISA法。89．CSFs制檢的一般步驟：（1）制備工程菌（或細(xì)胞）；2）工程菌（或細(xì)菌）的培養(yǎng)；（3）分離純化；①工程菌的破碎，沉淀；②離心；③層析：離子交換層析、親和層析；④超濾濃縮，分子篩層析；（4）除菌過(guò)濾，分裝，凍干；（5）半成品檢定，主要包括下列檢定項(xiàng)目：①蛋白含量測(cè)定②活性測(cè)定③比活性測(cè)定；④分子量測(cè)定；⑤純度測(cè)定；⑥核酸含量測(cè)定；⑦鼠lgG含量測(cè)定；⑧等電測(cè)定；⑨無(wú)菌試驗(yàn)；⑩熱原質(zhì)等檢定項(xiàng)目；（6）成品檢定：①外觀檢查；②活性測(cè)定；③水分測(cè)定；④無(wú)菌試驗(yàn)；⑤安全毒性試驗(yàn)；⑥熱原質(zhì)試驗(yàn)；⑦肽圖測(cè)定等檢測(cè)等檢測(cè)項(xiàng)目；（7）分包裝；（8）貯存。90．紅細(xì)胞生成素的測(cè)定方法：（1）生物體內(nèi)測(cè)定法；（2）生物體外測(cè)定法；（3）放射免疫測(cè)定法。91．腫瘤壞死因子生物學(xué)活性：（1）抗腫瘤活性；①TNF直接抗腫瘤細(xì)胞的作用；②TNF在體內(nèi)的抗腫瘤作用；（2）抗炎癥活性；（3）促凝血活性；（4）對(duì)脂肪細(xì)胞合成脂蛋白脂酶（LPL）和LPL活性的抑制作用；（5）促進(jìn)細(xì)胞因子分泌；（6）免疫調(diào)節(jié)作用（7）抗病毒、92．IL13的作用：（1）強(qiáng)生理狀態(tài)下，細(xì)胞的干擾素烈報(bào)制外周血單核細(xì)胞分基因呈靜止?fàn)顟B(tài)，只有在特泌ILIL1β、TNFα、定誘生劑的作用下，細(xì)胞的IL8和groβ；（2）能抑干擾素基因才活動(dòng)，轉(zhuǎn)錄合制細(xì)胞培養(yǎng)分化的巨噬細(xì)成相應(yīng)的mRNA，進(jìn)而轉(zhuǎn)譯胞產(chǎn)生HIV，并能抑制體外出具有種屬特異性的干擾HIV復(fù)制；（3）較小程度直素蛋白； ③干擾素本身并接作用于大顆粒淋巴細(xì)胞不能直接滅活病毒，干擾素（LGL）合成IENy，并與作用于細(xì)胞后，使后者又產(chǎn)適量和亞適量的IL2的協(xié)生多種其它蛋白質(zhì)(抗病毒同作用；（4）它能影響B(tài)蛋白)，從而阻斷病毒的繁淋巴細(xì)胞，增強(qiáng)其增殖并能殖； ④干擾素必須具有廣表達(dá)CD23表面抗原；（5）譜的抗病毒活性，如果某一有抗炎作用（敗血性休克和種抗病毒物質(zhì)僅對(duì)特定的風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎）并刺激體液病毒有作用，就不能稱(chēng)為干免疫應(yīng)答；（6）增強(qiáng)由IL2擾素。誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞因子激活96．人淋巴細(xì)胞幾—2的制的殺傷細(xì)胞活性。備產(chǎn)物檢定方法：93．基因工程重組細(xì)胞因子(1)活性檢定：采用CTLL的制備質(zhì)控：(1)詳細(xì)記錄細(xì)胞株的3H摻人法進(jìn)行活表達(dá)載體和宿主細(xì)胞，包括性測(cè)定，比活性必須在克隆基因的來(lái)源和鑒定，以106IU／mg以上；及表達(dá)載體的構(gòu)建、遺傳學(xué)(2)純度檢定：①SDS—和結(jié)構(gòu)等，此外還要介紹載PAGE檢測(cè)，用銀染色，在體引入宿主細(xì)胞的方法，和15KD處呈單一條帶，后掃載體在宿主細(xì)胞中的狀況； 描測(cè)得幾—2條帶占95％(2)應(yīng)有詳細(xì)的插入基因和以上；表達(dá)載體側(cè)翼調(diào)控區(qū)核苷 ②HPLC檢測(cè)，反相柱(C酸序列的資料；(3)在生產(chǎn)CC18等)或正相分子篩柱中啟動(dòng)和控制有關(guān)基因的測(cè)得IL—2主峰占95％以表達(dá)方法要有詳細(xì)記錄；(4)上；產(chǎn)品純化方法要有明確詳(3)氨芐青霉素測(cè)定：因?yàn)楸M記載，如采用單抗法和層大腸桿菌發(fā)酵的基因工程析法，要采取適當(dāng)措施，保產(chǎn)品均采用氨芐青霉素抗證這些單抗或其它潛在污性菌株生產(chǎn)，所以必須檢定染物不損害終產(chǎn)品的質(zhì)量氨芐青霉素殘余量； 和安全性。(4)殘余DNA檢測(cè)：采用同94．細(xì)胞因子的分子生物學(xué)位素探針?lè)ǎ縿堄郉NA測(cè)定法：量不得超過(guò)100pg；目前采用的分子生物學(xué)技 還有生物制品要求的常規(guī)術(shù)有RNA印跡法、核酸酶保實(shí)驗(yàn)檢定，如熱原質(zhì)測(cè)定、護(hù)分析、原位雜交和多聚酶制劑水分測(cè)定、安全試驗(yàn)、鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。均為通過(guò)檢測(cè)相急性毒性實(shí)驗(yàn)、無(wú)菌試驗(yàn)等應(yīng)的mRNA量、推算出幾量均必須合格。的方法。多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)97．LAK細(xì)胞的殺腫瘤細(xì)胞(PCR)是目前檢測(cè)幾最敏感作用：LAK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)的方法，尤其適用于極微量胞分如下三個(gè)階段： 的標(biāo)本，或僅有極少數(shù)細(xì)胞(1)識(shí)別階段：LAK細(xì)胞對(duì)才能表達(dá)幾基因，或幾基因正常細(xì)胞無(wú)損傷作用，而對(duì)以低水平表達(dá)的標(biāo)本，目前腫瘤細(xì)胞結(jié)合進(jìn)而殺傷，而已可作半定量分析，且對(duì)多種腫瘤細(xì)胞結(jié)合而95．干擾素的定義及含義： 殺傷，說(shuō)明多種腫瘤的細(xì)胞(1)干擾素的定義：干擾素表面存在著共同抗原決定是一類(lèi)在同種細(xì)胞上具有簇，可被LAK細(xì)胞所識(shí)別；廣譜抗病毒活性的蛋白質(zhì)，正常細(xì)胞表面可能不存在其活性的發(fā)揮又受細(xì)胞基腫瘤抗原決定簇，就不能被因組的調(diào)節(jié)和控制，涉及LAK細(xì)胞所殺傷；關(guān)于LAKRNA和蛋白質(zhì)的合成； 細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞結(jié)合分子(2)目前認(rèn)為，干擾素是一特性研究發(fā)現(xiàn)了“淋巴因子種類(lèi)似多肽激素的細(xì)胞功活化細(xì)胞相關(guān)抗原”(LAA)，能的調(diào)節(jié)物質(zhì)，是一種細(xì)胞而用LAA制備了單克隆抗素，這一定義的含義如下：體(KBA MoAb)可以抑制LAK①干擾素必須是一種蛋白細(xì)胞殺傷活性，提示了LAK質(zhì)，它對(duì)蛋白酶類(lèi)是敏感細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的物質(zhì)的，而對(duì)DNA酶或RNA酶卻基礎(chǔ)，從分子水平認(rèn)識(shí)LAA有抵抗；天然干擾素是一種抗原為兩條鏈的糖蛋白組糖蛋白，采用DNA重組技術(shù)成的二聚體，LAA只存在受由大腸桿菌表達(dá)的人干擾白介素—2激活后的細(xì)胞素多肽不帶糖分子； ②這表面，說(shuō)明LAA是白介素—的結(jié)果；(2)殺傷階段：LAK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞主要是通過(guò)細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷；LAK細(xì)胞內(nèi)含有溶細(xì)胞顆粒(C．C)，該顆粒中含有一種穿孔蛋白質(zhì)，所謂穿孔因子(Peffoin)；LAK細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞結(jié)合時(shí)，LAK細(xì)胞發(fā)生極化，首先高爾基體向與腫瘤細(xì)胞接觸點(diǎn)方向移動(dòng)，通過(guò)微管將顆粒分泌到兩種細(xì)胞接觸面上，在Ca2+激活下，LAK細(xì)胞也釋放一種腫瘤壞死因子樣毒素，對(duì)腫瘤細(xì)胞作用慢，不需Ca2+，又稱(chēng)之為不依賴(lài)鈣離子的殺傷作用，常常使腫瘤細(xì)胞DNA變性和細(xì)胞核裂解，從而抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)；(3)裂解階段：瘤細(xì)胞受到攻擊后，經(jīng)上述兩階段后，完成裂解，抑制腫瘤生長(zhǎng)。98．集落刺激因子的功能：各種CSF的活性是以半固體培養(yǎng)基中CSF刺激造血細(xì)胞形成集落的能力來(lái)衡量的。其功能可分為四個(gè)方面：(1)刺激造血細(xì)胞增殖。集落形成細(xì)胞的分裂需要CSF持續(xù)存在，如從培養(yǎng)基中撤掉CSF，則細(xì)胞分裂停止，CSF的濃度決定細(xì)胞周期長(zhǎng)短和產(chǎn)生子代細(xì)胞的總數(shù)目；(2)CSF既維系祖細(xì)胞的存活，也延長(zhǎng)成熟細(xì)胞的壽命；(3)分化定型；(4)刺激終末細(xì)胞的功能活性。目前已知CSF能影響細(xì)胞作用、膜抗原的表達(dá)、吞噬作用、過(guò)氧化物的產(chǎn)生、殺傷微生物及腫瘤細(xì)胞，并產(chǎn)生許多重要的生物活性物質(zhì)，如前列腺素E、腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素—丫干擾素、血纖溶酶原活化因子等。99．C—CSF和GM—CSF的異同點(diǎn)：由于G—CSF和GM—CSF在許多相關(guān)的臨床病例中可能有用，所以它們之間生物學(xué)特性差異，對(duì)某些疾病發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識(shí)有一定的意義；(1)C—CSF特異性刺激中性白細(xì)胞，而GM—CSF則是所有粒細(xì)胞的總刺激因子，例如若要通過(guò)提高嗜酸性效應(yīng)細(xì)胞水平來(lái)治療寄生蟲(chóng)感染，則GM—CSF作用比G—CSF為好；(2)GM—CSF是單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的強(qiáng)激活劑，則G—CSF則不是，這種激活包括誘導(dǎo)產(chǎn)生諸如腫瘤壞死因子和IL—1類(lèi)的其他自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)細(xì)胞因子，如需提高單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活性，可選用CM—CSF，而不是C—CSF； 的主要部位，也是參與炎癥的主要組織，內(nèi)皮細(xì)胞本身也是產(chǎn)生細(xì)胞因子的重要（另附：工藝流程圖）(3)CM—CSF是中性白細(xì)胞移動(dòng)的強(qiáng)抑制劑，然而G—CSF則增強(qiáng)中性白細(xì)胞的移 動(dòng)，例如當(dāng)局部損傷時(shí)，GM—CSF可在局部產(chǎn)生，起弱的化學(xué)引誘劑作用，抑制炎癥細(xì)胞離開(kāi)炎癥部位，而G—CSF則可增強(qiáng)炎癥狀細(xì)胞向炎癥部位移動(dòng)，這可能是兩種造血生長(zhǎng)因子共同提高宿主防御力的一種途徑，在細(xì)菌性膿毒癥時(shí)，接觸內(nèi)毒素可刺激單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生G—CSF，然后G—CSF刺激T細(xì)胞產(chǎn)生GM—CSF和IL—3，以增加骨髓內(nèi)的骨髓細(xì)胞生成和進(jìn)一步增強(qiáng)白細(xì)胞應(yīng)答。100．CSFs三種檢測(cè)方法的特點(diǎn)：(1)生物活性檢測(cè)法，特點(diǎn)是靈敏、方便，但因造血前體細(xì)胞、依賴(lài)株細(xì)胞一般都受幾種因子的影響，因此，該法不能明確因子的特性； 質(zhì)產(chǎn)物合成；(3)免疫學(xué)檢測(cè)法，特點(diǎn)是特異、靈敏，更高，缺點(diǎn)是不能證明有功能性蛋白缺點(diǎn)是不能證明被檢CSF是否為具有(2)分子生物學(xué)檢測(cè)法，特點(diǎn)是敏感性完整生物活性結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)而非變性蛋白質(zhì)，因此檢測(cè)時(shí)最好將自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)名詞概念生物工程：應(yīng)用生物科學(xué)的理論、方法、按照人們?cè)O(shè)計(jì)的藍(lán)圖，改良加工生物或用生物及其制備物作為加工原料，以提供所需生物制品為人類(lèi)社會(huì)服務(wù)的綜合性科學(xué)技術(shù)。5植物細(xì)胞大規(guī)