【文章內(nèi)容簡介】 法律運(yùn)用強(qiáng)制性手段和科學(xué)技術(shù)方法預(yù)防或阻斷動物疫病的發(fā)生以及從一個地區(qū)到另一個地區(qū)的傳播，通常指動物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)的動物檢驗(yàn)檢疫人員依法對動物、動物產(chǎn)品的傳染病、寄生蟲病進(jìn)行檢查定性和處理的行政執(zhí)法行為。通過動物檢疫，對可疑或已證實(shí)的疫病對象實(shí)行強(qiáng)制隔離，或作出適當(dāng)處理，目的是防止動物傳染病的傳播，保障畜牧業(yè)生產(chǎn)和人民健康。1動物檢驗(yàn)主要檢測內(nèi)容動物疫病（含人畜共患疫?。┯刹《尽⒓?xì)菌、真菌、寄生蟲、支原體、非常規(guī)病原（例阮病毒、立克次氏體）引起，在動物間或人與動物間傳播，造成較嚴(yán)重危害的各種傳染病。我國進(jìn)境動物疫病名錄97種：一類病15種，二類病82種；含水生動物疫病11種。OIE關(guān)注疫?。ㄊ謨?009）陸生動物疫病112種；水生動物疫?。?5種。動物、動物產(chǎn)品、飼料中的獸藥殘留、重金屬、微生物毒素、生物毒素等。獸藥包括禁用藥和限量用藥，具體檢測項目和控制標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)進(jìn)出口國家或地區(qū)的要求。瘋牛病傳播風(fēng)險因子：飼料中的牛羊成分；動物產(chǎn)品真?zhèn)舞b別：熟制肉類出口；珍貴皮草、珍貴中藥材、瀕危動物保護(hù)； 食物過敏源檢測：甲殼素、某些魚成份、轉(zhuǎn)基因成分：例轉(zhuǎn)基因魚等。2傳統(tǒng)常規(guī)動物檢疫技術(shù)流行病學(xué)檢疫時，對流行病的分析和確診有至關(guān)重要的作用，但是流行病學(xué)的調(diào)查總結(jié)過程中也存在工作量大且繁瑣，耗費(fèi)的人力多等問題。臨床檢疫方法具簡便易行，適合現(xiàn)場操作等優(yōu)點(diǎn)，但是臨床檢疫對發(fā)病初期尚未出現(xiàn)有病證意義的、特征癥狀的病例，或非典型病例，或癥狀相似病例，往往難于做出診斷。病理學(xué)檢疫技術(shù)既可驗(yàn)證臨床診斷結(jié)果的正確與否，又可為實(shí)驗(yàn)室診斷方法和內(nèi)容的選擇提供參考依據(jù)。在剖解檢疫時，有些病例往往缺乏特征性的病變，特別是急性死亡的病例、非典型病例和早期屠 宰病例，所以在剖解檢疫這些病例時應(yīng)選擇癥狀較典型、病程較長、未經(jīng)治療的自然死亡病例進(jìn)行剖檢。病原學(xué)檢疫時從病料中分離出病原微生物，雖是確診的重要依據(jù)，但健康動物也有帶菌現(xiàn)象，所以病原學(xué)的檢疫結(jié)果還需與流行病學(xué)及臨床診斷癥狀、病理變化聯(lián)合起來綜合分析。而且任何一種病原學(xué)方法都存在有漏檢的可能，所以即使沒有發(fā)現(xiàn)病原體，也不能完全否定該種傳染病的診斷。免疫學(xué)檢疫技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的檢測、操作簡單、快速等優(yōu)點(diǎn)，是目前最理想的殘留篩選性分析方法之一。但酶聯(lián)免疫分析前期工作復(fù)雜，檢測對象針對性太強(qiáng)，開發(fā)免疫檢測試劑盒所需費(fèi)用昂貴。3現(xiàn)代生物技術(shù)在動物檢疫中的應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)在動物檢疫中的應(yīng)用是基于分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展起來的分子生物學(xué)檢測技術(shù)。根據(jù)生物大分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與相互作用原理，從分子水平檢測某種特定生物大分子存在與否。分子生物學(xué)檢疫又稱基因檢疫，主要是針對不同病原微生物所具有的特異性核酸序列和結(jié)構(gòu)進(jìn)行測定。自1976年以來，基因檢疫方法取得了巨大進(jìn)展，建立了DNA限制性內(nèi)切酶圖譜分析、核酸電泳圖譜分析、寡核苷酸指紋圖核酸探針、聚合酶鏈反應(yīng)等。在動物檢疫方面，具有代表性的技術(shù)主要有3大類： 核酸擴(kuò)增技術(shù)：蛋白質(zhì)檢測技術(shù)：蛋白質(zhì)電泳與免疫印跡、重組抗原based、單克隆抗體based。新技術(shù)平臺：生物芯片、變性高效液相色譜、生物傳感器。核酸擴(kuò)增技術(shù)是對核酸進(jìn)行體外生成和放大的技術(shù)，只要起始的生物材料里存在微量的特定核酸（如某種病原體的核酸），通過擴(kuò)增反應(yīng)就能得到大量的可檢測到的特定核酸產(chǎn)物，從而可證明檢測對象的存在。主要包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR)，實(shí)時熒光PCR，LAMP, NASBA核酸擴(kuò)增產(chǎn)物分析技術(shù)測序、雜交、酶切等。PCR與實(shí)時熒光PCR是發(fā)展成熟且主要應(yīng)用的核酸擴(kuò)增技術(shù)。 PCR檢測PCR技術(shù)用于動物檢疫主要是檢測病原，做早期診斷和病原的鑒定。它不僅可以檢測活的病原體，而且還可檢出已滅活的病原體，只要病原體的核酸未降解。因此，當(dāng)由于各種原因無法進(jìn)行病原分離和鑒定時，該技術(shù)將發(fā)揮巨大的作用。常規(guī)PCR檢測過程包括：取樣、樣品前處理與核酸提取PCR反應(yīng)，PCR產(chǎn)物電泳檢測，PCR產(chǎn)物的確證分析（測序、酶切等）。 實(shí)時熒光PCR檢測實(shí)時熒光PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，每經(jīng)過一個擴(kuò)增循環(huán)，產(chǎn)生一個熒光信號，通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，利用熒光信號累積實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最終得到一條熒光擴(kuò)增曲線，也可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析。實(shí)時熒光PCR檢測是當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室及商業(yè)重點(diǎn)開發(fā)應(yīng)用的快速檢測方法。其優(yōu)點(diǎn)為：特異性好、靈敏度高、更快速；操作簡單、安全、自動化程度高、防污染；可實(shí)現(xiàn)定量檢測；設(shè)備、試劑成本較高；快速篩選檢測方法，仍需確證（常規(guī)PCR及序列分析）等。實(shí)時熒光PCR技術(shù)應(yīng)用范圍為重大動物疫病及各種傳染病病原快速檢測方法，疫情監(jiān)控重要的技術(shù)依托；供港澳活禽及產(chǎn)品禽流感，新城疫監(jiān)測；進(jìn)境動物產(chǎn)品口蹄疫，豬生殖與呼吸系統(tǒng)綜合癥檢測；動物及產(chǎn)品甲型流感H1N1監(jiān)測；飼料及動物產(chǎn)品中特定動物源成分檢測等。（LAMP)環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)（LAMP)是在鏈置換DNA聚合酶啟動下的鏈置換DNA合成循環(huán)。反應(yīng)起始階段形成DNA莖環(huán)結(jié)構(gòu)（LAMP循環(huán)的起始結(jié)構(gòu)），以莖環(huán)結(jié)構(gòu)為模板進(jìn)入擴(kuò)增循環(huán)階段。擴(kuò)增產(chǎn)物是不同長度的DNA混合物，分別具有不同個數(shù)莖環(huán)結(jié)構(gòu)，產(chǎn)物DNA序列為擴(kuò)增靶序列的交替反向重復(fù)序列，酶切后可得到單一產(chǎn)物。需針對靶基因的6個特異序列設(shè)計4條引物，還可加上2條環(huán)識別引物以提高速度和產(chǎn)量。LAMP優(yōu)點(diǎn)為簡便、成本低、更快速；設(shè)備和試劑成本低，時間短；高特異性、高靈敏度；識別6個區(qū)域的4條引物；敏感性比常規(guī)PCR高；高產(chǎn)量、易檢測；產(chǎn)量可達(dá)數(shù)十微克，可進(jìn)行熒光檢測（熒光核酸染料）或濁度（焦磷酸鎂沉淀）檢測。適合基層實(shí)驗(yàn)室甚至現(xiàn)場檢測。LAMP缺點(diǎn)：更易污染、不方便產(chǎn)物回收及鑒定、設(shè)計空間較受限、擴(kuò)增產(chǎn)度 500時不能進(jìn)行長鏈擴(kuò)增。 核酸檢測技術(shù)應(yīng)用現(xiàn)狀核酸檢測技術(shù)直接應(yīng)用于檢測各種動物病原、病原體分型，特定動物源成份、轉(zhuǎn)基因成份等，并已有一批總局明文批準(zhǔn)采用的檢測項目如：禽流感、甲型流感H1N口蹄疫、SARS、鏈球菌、藍(lán)耳病、轉(zhuǎn)基因、動物源成份等。近幾年發(fā)布（或立項）不少檢測標(biāo)準(zhǔn)（PCR/rPCR)，基本覆蓋主要進(jìn)境動物疫病項目。核酸檢測技術(shù)在直屬局實(shí)驗(yàn)室（中心）均已開展應(yīng)用或研發(fā)，設(shè)備和技術(shù)基礎(chǔ)良好。國內(nèi)外均有成熟的核酸檢測技術(shù)平臺和商業(yè)服務(wù)平臺（設(shè)備、試劑、技術(shù)服務(wù)）；常見病原體已有商品化核酸檢測試劑盒；基本上較重要的各種動物病原體均有已發(fā)表的PCR檢測方法，全系統(tǒng)普遍具備自行開發(fā)建立特定病原的核酸檢測方法的能力。 基因工程、單克隆抗體與蛋白質(zhì)檢測技術(shù)基因工程、單克隆抗體與蛋白質(zhì)檢測技術(shù)通過基因工程技術(shù)生產(chǎn)特異抗原（重組抗原）、單克隆抗體技術(shù)生產(chǎn)特異抗體等，該方法的建立基于重組抗原或單克隆抗體的各種血清學(xué)檢測方法：ELISA、膠體金試紙條、生物芯片等?；蚬こ?、單克隆抗體與蛋白質(zhì)檢測技術(shù)是系統(tǒng)內(nèi)研究開發(fā)檢測方法/檢測試劑盒的熱點(diǎn)方向之一。隨著科技進(jìn)步和學(xué)科的交融，分子生物學(xué)、材料科學(xué)、微電子、激光檢測、計算機(jī)數(shù)字信號處理等多學(xué)科技術(shù)相融合，實(shí)現(xiàn)快速、靈敏、高通量（同步檢測多種目標(biāo)，或同時檢測多個樣品）和自動化檢 測和數(shù)據(jù)處理。伴隨著“人類基因組計劃”而衍生的一項重大高新技術(shù)，通過微加工和微電子等技術(shù)在載體表面構(gòu)建微型生物化學(xué)分析系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了對基因、蛋白質(zhì)、細(xì)胞、組織以及其他生物組分的準(zhǔn)確、快速、高通量的檢測。1992年第一塊生物芯片誕生，在近幾年迅速崛起，全球約有數(shù)百家生物技術(shù)公司和數(shù)千家研究機(jī)構(gòu)從事生物芯片的研究和開發(fā)工作。生物芯片技術(shù)是分子生物學(xué)技術(shù)與芯片技術(shù)相結(jié)合產(chǎn)生的一項高新技術(shù)?；蛐酒苽浼皺z測流程，是利用原位合成法或?qū)⒁押铣珊玫囊幌盗泄押烁仕嵋灶A(yù)先設(shè)定的排列方式