【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 率。阿司匹林可以在血小板環(huán)氧合酶1(COX1)上不可逆轉(zhuǎn)的添加乙?；?，這樣可以抑制它的活性從而延長(zhǎng)血小板的壽命。阿司匹林也抑制COX2——炎癥刺激產(chǎn)生的環(huán)氧合酶的同分異構(gòu)體，但抑制程度比COX1小。低劑量阿司匹林可抑制95%的血小板COX1活性。這個(gè)結(jié)果在生成TxA2時(shí)降低。阿司匹林耐藥性雖然已經(jīng)清楚了阿司匹林對(duì)于COX1的抑制機(jī)制，但目前的報(bào)告顯示，并非所有的患者對(duì)于低劑量阿司匹林的治療反應(yīng)程度都相同。對(duì)ASA反應(yīng)的缺失使人們歷史性的提及了阿司匹林耐藥性，而且其能隨著診斷方式的不同而發(fā)生變化。變化范圍較廣的原因是阿司匹林耐藥性很精確，范圍包含服用阿司匹林發(fā)生缺血的患者（臨床耐藥），也有未出現(xiàn)TxA2水平降低、血小板活化或凝集的患者（生化耐藥）。阿司匹林耐藥性的根本原因——可能說阿司匹林無應(yīng)答更好一些——可能有幾個(gè)，包括遺傳變異、壓力誘導(dǎo)血小板流通增強(qiáng)、血小板活化其他路徑、血栓素生成其他途徑（例如通過單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞的COX2）阿司匹林可吸收性等等。最近的研究顯示，使用血液基礎(chǔ)血小板凝集方式和尿液11dhTxB2測(cè)定冠心病以及相關(guān)的患者時(shí)，其膽固醇、甘油三酯和C反應(yīng)蛋白水平對(duì)阿司匹林的反應(yīng)會(huì)降低。與無癥狀的患者相比，冠心病患者服用阿司匹林后顯示出顯著較高的尿液11dhTxB2 水平。忽視無應(yīng)答的原因，患者對(duì)于阿司匹林反應(yīng)的可變性逐漸清晰。實(shí)驗(yàn)方式由于患者對(duì)ASA的反應(yīng)有差異，因此我們需要一種可靠的方式分析個(gè)體對(duì)阿司匹林的特異反應(yīng)，幫助臨床醫(yī)生確定是否需要改變治療措施?，F(xiàn)有的測(cè)定阿司匹林藥效的兩個(gè)基本方式：血小板聚集法和尿液11dhTxB2 測(cè)定法。血小板聚集法有很多形式，雖然這些檢測(cè)相對(duì)較快，但它們對(duì)變量很靈敏，而這些變量又往往與阿司匹林藥效無關(guān)，如溫韋伯氏因子水平、因子VIII以及紅細(xì)胞比容管，事實(shí)是血小板的活化僅需調(diào)節(jié)溫度即可。最近一項(xiàng)研究比較了這兩個(gè)方式，結(jié)果顯示它們之間一致性很低的原因就在于此。另外，其他的血小板聚集方式需要特殊的設(shè)備，限制了醫(yī)師在一個(gè)檢測(cè)程序中運(yùn)行大量樣本的能力。由于此原因或者其他列舉的原因，直接測(cè)定TxA2的代謝物對(duì)于確定個(gè)體對(duì)阿司匹林的反應(yīng)更為適宜。11脫氫血栓烷B2阿司匹林除了作為一種普遍使用的止痛藥，也因其對(duì)TxA2合成的抑制作用以及最小的成本和防止缺血方面的臨床效用，成為廣泛使用的抗血小板處方藥物。直接測(cè)定患者對(duì)阿司匹林的反應(yīng)是指測(cè)定TxA2的循環(huán)水平。不幸的是，TxA2在血液中的壽命很短，這樣分析TxA2就非常困難，但是它會(huì)在酶的作用下分解成很多代謝物包括11dhTxB2和11去氫2,3dinor血栓素B2(11dh2,3DTxB2)。這些代謝物被腎臟吸收，排泄在尿液里。11dhTxB2在尿液中非常穩(wěn)定，是TxB2在尿液中最豐富的代謝物，它循環(huán)時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，為45分鐘。為了確定尿液11dhTxB2作為血栓素測(cè)定的適用性，對(duì)TxB2代謝進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)中，與測(cè)定血液TxA2相比，尿液11dhTxB2水平為體內(nèi)血栓素代謝提供了更加精確的指示。前一種方式會(huì)在血液收集過程中面臨技術(shù)困難，所以尿液11dhTxB2數(shù)量以及它的分解形式——11dh2,3DTxB2可作為測(cè)定TxA2生成的最佳途徑，并可對(duì)體內(nèi)血小板活化做出精確的檢測(cè)。最近一項(xiàng)重要的研究中，采用兩種不同血小板凝集方式獲得尿液11dhTxB2，用來比較阿司匹林的治療方案，該研究將測(cè)試結(jié)果與動(dòng)脈硬化風(fēng)險(xiǎn)因子結(jié)合考慮。研究中，處于冠心病增高風(fēng)險(xiǎn)的無癥狀患者每天攝取81mgASA，持續(xù)兩周。同時(shí)，研究人員獲得其尿液樣本，確定其11dhTxB2水平。同時(shí)也進(jìn)行血液樣本收集，采用血小板凝集方式分析。根據(jù)除阿司匹林反應(yīng)之外其他動(dòng)脈硬化風(fēng)險(xiǎn)因子的出現(xiàn)或消失來評(píng)價(jià)患者。分析比較的結(jié)果顯示，只有未應(yīng)答個(gè)體的尿液11dhTxB2水平與心血管風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性較大，血小板凝集平臺(tái)不能顯示這種關(guān)系。11dhTxB2 ELISA 試劑盒與戰(zhàn)略伙伴Cayman Chemical Co.(Ann Arbor, MI)和 Creative Clinical Concepts(Denver)合作，Corgenix Medical Co.(Broomfield, CO)已經(jīng)開發(fā)出一種稱為AspirinWorks Test Kit的 ELISA試劑盒用于檢測(cè)尿液中的11dhTxB2。這是一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)性化驗(yàn)，微量滴定板孔包被著羊抗鼠IgE抗體(圖1)。 Medical Co.(Broomfield, CO)及其合作伙伴開發(fā)的AspirinWorks ELISA試劑盒反應(yīng)原理。標(biāo)準(zhǔn)物和樣本添加至包被了羊抗鼠IgG抗體的孔內(nèi)，再添加11dhTxB2指示劑和11dhTxB2單克隆抗體，2小時(shí)孵育后，清洗孔并添加底物，30分鐘添加終止液，使用酶標(biāo)儀讀數(shù)。光密度與樣本或標(biāo)準(zhǔn)物內(nèi)的11dhTxB2數(shù)量成反比。檢測(cè)開始時(shí)向孔內(nèi)放入標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，添加11dhTxB2指示劑。指示劑是11dhTxB2 與堿性磷酸酶共軛物，然后添加鼠單克隆11dhTxB2 抗體開始反應(yīng)。在兩小時(shí)孵育期間，11dhTxB2 和11dhTxB2 指示劑會(huì)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合到鼠抗11dhTxB2 抗體上，之后抗體被包被的羊抗鼠IgE抗體捕捉至孔上，清洗微量滴定板孔除去未結(jié)合的酶。接下來檢測(cè)人員添加p硝基苯磷酸(pNPP)底物，孵育30分鐘，(EDTA)結(jié)束顏色反應(yīng)，然后此板在標(biāo)準(zhǔn)微量滴定板讀數(shù)器405nm進(jìn)行讀數(shù)。對(duì)于含有較高水平的11dhTxB2樣本，會(huì)有較少的11dhTxB2 指示劑結(jié)合至單克隆抗體，結(jié)果產(chǎn)生較低的光密度(OD)。樣本中的11dhTxB2 較少時(shí)，會(huì)有較多的指示劑結(jié)合至抗體，產(chǎn)生較高的OD讀數(shù)。11dhTxB2 的真正濃度是通過對(duì)比臨床樣本OD值和包裝隨帶的定標(biāo)液建立的參考曲線獲得的。試劑盒均值的數(shù)值表達(dá)方式為每毫升樣本皮克11dhTxB2。測(cè)試尿液標(biāo)本，很多人感覺非常麻煩，需要收集24小時(shí)尿液標(biāo)本，用測(cè)得的數(shù)值乘以每天的尿液總量，得出24小時(shí)尿液中總的11dhTxB2含量。否則，喝水多少都會(huì)影響尿液總量，造成結(jié)果偏差，這也是我們對(duì)尿液測(cè)定不趕興趣的主要原因。其實(shí)，在歐洲這個(gè)問題幾年之前就得到了