有關(guān)物質(zhì)檢查常見(jiàn)問(wèn)題的探討(編輯修改稿)
2025-03-22 13:01 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 5） ， 由 4種成分組成 ， 需配制 3種緩沖液； ? 后改為 （73： 27） ， 用磷酸調(diào)節(jié) pH值為 ， 僅由 2種成分組成 流動(dòng)相的選擇 分離能力的考察 粗產(chǎn)品 溶液或配制各種雜質(zhì)混合物 （起始原料，中間體，副產(chǎn)物） 強(qiáng)制降解 ? （ 酸 、 堿 、 光 、 熱 、 氧化 ） 二、 HPLC方法的建立與驗(yàn)證 ? 強(qiáng)制降解的考察方法誤區(qū)： ? （酸、堿、光、熱、氧化） 破壞 條件過(guò)于強(qiáng)烈 （控制在主成分降低 10%~20%為宜） 中和方法 目的不明確，結(jié)論不正確 分離能力的考察 二、 HPLC方法的建立與驗(yàn)證 ? 不規(guī)定柱溫 ? （不需加溫且對(duì)溫度不敏感） 25℃ 或 30 ℃ （不需加溫但對(duì)溫度敏感，需保持恒溫） 35 ℃ ～ 70 ℃ ? （ 需加溫且對(duì)溫度敏感 ， 需保持恒溫 ） ? 作為耐用性試驗(yàn)之一 ? 且可與溶液穩(wěn)定性同時(shí)進(jìn)行 柱溫的確定 溶液的配制 ? 需要注意的幾點(diǎn)： ? 需否避光？ ? 可否超聲、加熱、多久？過(guò)濾？濾材？ 濃度與線性范圍和檢測(cè)限是否匹配？ ? 棄 20ml初濾液 ？ 用 xx膜過(guò)濾 ？ ? 用聚四氟酰胺小瓶 ？ ? 機(jī)械振搖 xx分鐘等等 ？ 二、 HPLC方法的建立與驗(yàn)證 ? 常用 10μl ～ 100μl ? 過(guò)低誤差大，影響重現(xiàn)性 ? 太多過(guò)載，影響峰形與分離 配合溶液濃度保證檢測(cè)靈敏度 進(jìn)樣體積的確定 色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn) ? 指標(biāo)的應(yīng)用 ? 分離度的保證 ? 靈敏度的測(cè)試 精密度的要求 Company Logo 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求 重 復(fù) 性 理 論 板 數(shù) 分離度 保留 時(shí)間 拖尾因子 常用指標(biāo) 分離度指標(biāo)性物質(zhì)的選擇 ? 難分離物質(zhì)對(duì) ? 最常出現(xiàn)的雜質(zhì) ? 單獨(dú)規(guī)定限度的特定雜質(zhì) 結(jié)構(gòu)性質(zhì)相近且 不干擾測(cè)定的物質(zhì) 二、 HPLC方法的建立與驗(yàn)證 ? 準(zhǔn)確定量分析時(shí)通常兩峰間 R≥ ? 峰高峰谷比 分離度的要求 拖尾因子（ T）的要求與應(yīng)用 ? 為保證分離效果和測(cè)量精度用于評(píng)價(jià) 色譜峰對(duì)稱性 ? 的指標(biāo) T=? 式中 為 5％峰高處的峰寬； ? d1 為 5％峰高出峰頂點(diǎn)至峰前沿 ? 之間的距離 ? 除另有規(guī)定外，峰高法定量時(shí) ? T 應(yīng)在 ～ 之間。 ? 峰面積法測(cè)定時(shí)，若拖尾嚴(yán)重，將 ? 影響峰面積的準(zhǔn)確測(cè)量。 峰前峰后有 ? 緊鄰雜質(zhì)峰 時(shí)，對(duì)拖尾因子作出規(guī)定。 重復(fù)性（ RSD）的要求 ? 用于評(píng)價(jià)連續(xù)進(jìn)樣后，色譜系統(tǒng)響應(yīng)值的重復(fù)性能。采用 外標(biāo)法 時(shí)，通常取各品種項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣 5 次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 %；采用 內(nèi)標(biāo)法 時(shí)，通常配制相當(dāng)于 80%、100%和 120%的對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成 3 種不同濃度的溶液，分別至少進(jìn)樣 2 次，計(jì)算平均校正因子。其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 % ? 在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中如果沒(méi)有明確規(guī)定，就是 ≤ % Company Logo 特定 雜質(zhì) 峰定位的方法 雜質(zhì)對(duì) 照品 混合 對(duì) 照品 臨時(shí) 降解 相 對(duì) 保留 時(shí)間 +參 考 圖 峰定位 方法的驗(yàn)證 ? 驗(yàn)證 定量 限度 ? 準(zhǔn)確度 + ? 精密度 + ? 重復(fù)性 + ? 中間精密度 （ + ） ? 專屬性 + + ? 檢測(cè)限 （ + ） + ? 定量限 + 線性范圍 + 耐用性 + + Company Logo 雜質(zhì)含量的計(jì)算 對(duì) 照品 外 標(biāo) 法 主成分自 身 對(duì) 照法 加校正因 子的自身 對(duì) 照法 面 積歸一化法 對(duì)照品外標(biāo)法 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 50% 定位 方便 定量準(zhǔn)確 要求嚴(yán) 費(fèi)用 高 70% ?有條件時(shí)首選的方法 主成分自身對(duì)照法 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 50% 不需 定位 費(fèi)用低 定量 粗 70% ?沒(méi)條件時(shí)首選的方法 加校正因子的主成分自身對(duì)照法 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 50% 定位 方便 定量較 準(zhǔn)確 需測(cè)定
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