大腸桿菌耐喹諾酮類機制分子生物學基礎(chǔ)的初步研究(編輯修改稿)
2025-03-09 02:19 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 PCR產(chǎn)物純化試劑盒，按產(chǎn)品說明純化 gyrA產(chǎn)物，純化產(chǎn)物后以外引物為引物，用末端標記測序試劑盒在自動測序儀上進行測序。 11 結(jié)果 （ 1） GyrAPCR擴增結(jié)果 Gyr第一次 PCR擴增產(chǎn)物為 668 Vpb片段；第二次為 307 bp片段（圖 1） 12 13 結(jié)果（ 2） GyrA PCRSSCP結(jié)果（圖 2） 標準株及臨床分離敏感株 gyrA PCRSSCP結(jié)果兩條 DNA單鏈處于同一位置 。 4株耐藥菌株其結(jié)果與臨床敏感株及標準株 DNA單鏈結(jié)果不同 ，說明有堿基變異存在 。 14 15 結(jié)果（ 3） DNA測序結(jié)果及推定氨基酸序列 （ 1） A株在 gyrA基因堿基序列的第259位有 G→A 突變 ， 致 Asp87→Asn 。第 267位有 T→C 突變 ， 為無意突變 。B株在 247， 259， 300， 332， 552位分別有 C→T ， G→A ， T→C ， T→C ，C→A 突變 ， 其中 247位致 S e r 83→Leu ， 259位致 Asp87→Asn ，552位致 His184→Asn （ 圖 3） 其余為無意突變 。 16 圖 5 17 18 討論（ 1） DNA回旋酶 （ DNA gyrase） 是細菌特有的一種拓撲異構(gòu)酶 ， 它能夠利用 ATP水解的能量將共價閉合環(huán)狀 DNA轉(zhuǎn)變?yōu)樨摮菪?DNA， 對 DNA的復(fù)制 、 轉(zhuǎn)錄 、重組和修復(fù)過程有著重要作用 （ 3） 。 該酶由 A、 B兩個亞單位組成 。 A亞單位參與酶反應(yīng)中 DNA鏈的斷裂和重接 ， B亞單位參與酶反應(yīng)中能量的轉(zhuǎn)換和 ATP的水解 。 19 討論（ 1）續(xù) 喹諾酮類藥物作用的靶位是細菌的 DNA回旋酶 ， 阻止 DNA的超螺旋型轉(zhuǎn)化產(chǎn)生殺菌作用 。 DNA回旋酶 A單位 （
教學課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1