血吸蟲病免疫診斷技術(shù)規(guī)范(編輯修改稿)
2025-03-01 12:34 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 C小杯 ? 4. 使用說明書 ? 器材： ? 1. 移液器 50μl 一支、吸頭、吸頭盒及移液器架等 ? 2. PVC小杯架、廢棄物杯 ? 3. 實驗記錄紙、記錄筆、記號筆 5） 要求： 1 待檢血清要新鮮，不能有溶血或混有紅細胞 3 實驗操作 1） 樣本編號 1～ n號，并從左到右按 1～ n號排列。 2） 取 PVC小杯架子， 裝上 PVC小杯（下墊白紙） 3） 編號： 橫向（行）（標在小杯架子上）從左到右編號： ?? 。做好相應(yīng) 實驗記錄。 4） 輕輕顛倒混勻染料標記液，確保沉淀完全被混懸。 5） 調(diào)節(jié)移液器 為 50μ l。根據(jù)樣品數(shù)每小杯加 50μ l染料標記液至 PVC小杯中。 加液完畢，檢查每孔是 否有漏加孔或加雙倍孔，并及時糾正。 6） 調(diào)節(jié)移液器為 20μ l。 分別加 20μ l待檢血清（加血清時要核對一下樣本編號防止加錯位），每個樣 本緩緩混勻（吸打 4次）， 混勻時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。整板樣本加完后， 檢查每孔是否有漏加孔或加 雙倍孔，并及時糾正。 7） 將整板放手上輕輕震蕩， 加血清一分鐘（含混勻時間）后加試紙條。 8） 取試紙條插入小杯中，待小杯內(nèi)反應(yīng)液 吸干后 觀察結(jié)果 （ 15分鐘） 。 9） 在光線充足但非強光下觀察，正面面向試紙條觀察 （陽性檢測帶一般 在對照帶下 ，插入杯底斜靠時一般在 PVC小杯上沿略上處，防 止誤判），觀察結(jié)束放回原處，記錄結(jié)果。 10） 實驗臺面清理： 未使用試劑、未使用吸頭、移液器（刻度復(fù)原至最高 檔）等放回原處；實驗廢物放入規(guī)定的收集器內(nèi)。 4 要求 1） 標記液混均要輕，倒置時沒有沉淀物后再顛倒 2次； 2）一個樣品一支吸頭；加血清時要集中注意力 切不可漏加或跳管或重疊； 3）取試紙條時， 用手捏住吸水墊（較長的一端），嚴禁觸摸檢測膜或倒捏 。 4）試紙條一定要 入杯底 。 5）試紙條面向自己排列整齊、一次放好， 在結(jié)果觀察前嚴禁觸碰試紙條和小杯架， 也不要做臺面清潔工作，防止試紙條頃倒； 6） 觀察結(jié)果時要注意光線、方向， 不要刻意判斷，防止將“固相二抗”的折光誤判陽性 。 5 結(jié)果判斷 ? 陽性反應(yīng)： 1）檢測帶和對照帶都出現(xiàn)紫藍色帶。 2） 檢測帶出現(xiàn)深紫藍色帶（反應(yīng)強），對照帶顯色減 弱甚至不顯色。 ? 陰性反應(yīng)：對照帶出現(xiàn)紫藍色帶而檢測帶無顯色帶。 ? 無效：檢測帶和對照帶都不出現(xiàn)顯色帶。 6 儲存條件及有效期 ? 試劑盒保存于 4 8℃ ，防止冷凍。 有效期 6個月。 五、酶聯(lián)免疫吸咐試驗（ ELISA）操作規(guī)程 1 基本原理 1) 抗原（日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原 SEA）以物理性地吸附于固相載體（聚苯乙烯或聚氯乙烯塑料板）表面（包被），并保持其 免疫 學(xué)活性； 2) 加待檢標本（有相應(yīng)的特異性抗體）（一抗），即與固相上抗原結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物。 3) 加酶標記的二抗形成 AgAb1Ab2*HRP三聯(lián)復(fù)合物（第二抗體通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物 辣根過氧化物酶（ HRP）－標記結(jié)合物），而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性； 4) 洗滌后加底物和顯色劑（ H2O2的鄰苯二胺（ OPD）或四甲基聯(lián)苯胺（ TMB）），酶結(jié)合物中的酶再催化底物和顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生顯色反應(yīng)。 5) 根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結(jié)果。 2 實驗操作準備 1) 穿戴好工作服、口罩和手套，做好基本實驗準備工作。 2) 實驗試劑和器材檢查和擺放。要求試劑批號與有效期檢查符合產(chǎn)品說明；器材符合相關(guān)質(zhì)量要求。 3) 檢查完畢后，按照實驗常規(guī)要求擺布好實驗試劑和器材。 4） 實驗試劑盒 (康百得 )： ? 1）預(yù)包被板 （ SEA預(yù)包被聚苯乙烯或聚氯乙烯塑料板） 48T/96T ? 2）酶結(jié)合物（ 1號液） （辣根過氧化物酶（ HRP）－標記結(jié)合物） 1支 ? 3）洗滌液（ 2號液） 1支 ? 4）底物（ 3號液） （四甲基聯(lián)苯胺（ TMB）） 1支 ? 5）顯色劑（ 4號液） （ H2O2 ） 1支 ? 6）樣本稀釋液（ 5號液） 1支 ? 7）終止液（ 6號液） （硫酸（ H2SO4）） 1支 ? 8）陽性對照品（凍干品） 1支 ? 9）臨界對照品（凍干品） 1支 ? 10）陰性對照品（凍干品）
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