弧菌與彎曲菌屬的組織(編輯修改稿)
2025-02-12 14:11 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ? 標(biāo)本 ， 霍亂多價(jià)診斷血清 （ 效價(jià) 1： 64） ， 用暗視野鏡觀察 ， 3分鐘內(nèi) 運(yùn)動(dòng)被抑制 的即為陽性 ， ? 此法優(yōu)點(diǎn)是 快速而特異操作簡便 ， 但必須有數(shù)量較多的弧菌才檢出 。 ) 3） 涂片染色 ： 革蘭氏染色陰性 并成魚群狀排列的弧菌 。 ) 2．快速診斷： 1） 免疫熒光菌球法： 將標(biāo)本接種于含有霍亂弧菌 熒光抗體 的堿性蛋白胨水中 ， 經(jīng) 37℃ 4～ 6h， 如有霍亂弧菌 ， 在熒光顯微鏡下 可見發(fā)熒光的菌球 。 本法適用于做 大量標(biāo)本的初篩 。 2） SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)： 以霍亂弧菌 IgG型抗體 與SPA陽性葡萄球菌結(jié)合作為試劑，與米泔水樣便或增菌液作玻片凝集， 立即出現(xiàn)明顯凝集者（＋＋＋）為陽性。 ) 3．細(xì)菌分離培養(yǎng) 1） 直接分離培養(yǎng)： ? 分離用的培養(yǎng)基有強(qiáng)、弱 2種選擇培養(yǎng)基。 ? 弱選擇培養(yǎng)基 ：堿性瓊脂和堿性膽鹽瓊脂。 ? 強(qiáng)選擇培養(yǎng)基： 常用的有慶大霉素瓊脂、 4號(hào)瓊脂和TCBS瓊脂等。 ? 現(xiàn)多采用堿性蛋白胨水增菌，再用強(qiáng)選擇培養(yǎng)基進(jìn)行分離。 ) 4． 鑒定： 根據(jù)霍亂弧菌在各種選擇培養(yǎng)基上的特點(diǎn) ， 挑選可疑菌落進(jìn)行鑒定 。 鑒定以血清學(xué) （ 玻片凝集 ） 為主 ，結(jié)合形態(tài)學(xué) 、 生化反應(yīng)作出判斷 。 1） 玻片凝集試驗(yàn)： 從分離培養(yǎng)基上挑取可疑菌落于霍亂弧菌 多價(jià)診斷血清 作玻片凝集試驗(yàn) 。 診斷血清應(yīng)稀釋成 1:321:64的效價(jià)使用 ， 立即出現(xiàn)凝集者為陽性 ，同時(shí)設(shè)生理鹽水和陽性細(xì)菌株對(duì)照 。 ) 2） 形態(tài)學(xué)檢查： 取純培養(yǎng)物涂片革蘭氏染色 ， 觀察菌體形態(tài)及染色性 。 用懸滴法或半固體穿刺法 檢測動(dòng)力 。 3） 生化反應(yīng)： 霍亂弧菌氧化酶試驗(yàn) 、 靛基質(zhì)試驗(yàn) 、粘絲試驗(yàn)和霍亂紅試驗(yàn)均陽性 。 ①粘絲試驗(yàn)： 用于測定霍亂弧菌形成粘絲的特性。將 ％ 去氧膽酸鈉 水溶液 于霍亂弧菌混勻制成濃厚菌液， 1min內(nèi)懸液由混變清，并變得粘稠， 以接種環(huán)挑取時(shí)可以拉出絲 來 ?；魜y弧菌古典生物型和 El Tor生物型均呈陽性。 ) ) ② 霍亂紅試驗(yàn)： 出現(xiàn)薔薇色 ， 為霍亂紅試驗(yàn)陽性 。 由于霍亂弧菌和其他弧菌均有此種反應(yīng) ， 故無特異性 。 （ 霍亂弧菌含有色氨酸酶 ， 能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚 ， 霍亂弧菌液能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽 ， 因此當(dāng)霍亂弧菌培養(yǎng)在含有硝酸鹽成分的蛋白胨水中 ， 所產(chǎn)生的亞硝酸鹽可與吲哚結(jié)合成亞硝酸吲哚 ， 滴加濃硫酸即可出現(xiàn)薔薇色 ， 稱為霍亂紅試驗(yàn)陽性 ） ③ O/129敏感試驗(yàn)： 將 O/129（ 2， 4二氨基－ 6， 7－二異丙基喋啶）藥敏紙片（ 10－ 150μ g）貼在接種有待測菌的瓊脂平板上作紙片擴(kuò)散試驗(yàn)， 凡藥物紙片周圍出現(xiàn)抑菌環(huán)者為敏感 。 ) 4） 霍亂弧菌的分型鑒別試驗(yàn)： ① 血清分型： 用小川型和稻葉型 單價(jià)診斷血清 作玻片凝集 。 與小川型血清凝集而與稻葉型血清不凝集者為小川型 ， 反之為稻葉型 。 在兩個(gè)單價(jià)血清中均有明顯凝集者為彥島型 。 ②生物型別的鑒定： 目前，兩型主要依靠第 Ⅳ 組霍亂噬菌體裂解試驗(yàn)進(jìn)行鑒別，并輔以多粘菌素敏感試驗(yàn)、雞紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)、 V－ P試驗(yàn)和溶血試驗(yàn)。 ) ⒈ 第 Ⅳ 組霍亂噬菌體裂解試驗(yàn)： 第 Ⅳ 組霍亂噬菌體常規(guī)稀釋液 （ 106/ml） 一般僅裂 解古典型 ， 而不裂解 El Tor型 。 ⒉ 多粘菌素 B敏感試驗(yàn)： 取被檢菌 23h肉湯培養(yǎng)物點(diǎn)種到含藥營養(yǎng)瓊脂平板上（多粘菌素 B50U／ ml） ,37℃ 培養(yǎng) 24h， El Tor生物型生長，而古典型敏感。 ) ) ? ⒊ 雞紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)： 在玻片上滴加生理鹽水一滴 ， 取被檢菌 1824h培養(yǎng)物少許在鹽水中制成濃厚菌懸液 ， 然后加一滴 ％ 雞紅細(xì)胞懸液 ， 充分混勻 ， 1min內(nèi)出現(xiàn)凝集者為陽性 ，紅細(xì)胞呈均勻分散者為陰性。El Tor生物型為陽性，古典型為陰性 。 ) 鑒定要點(diǎn)： 確診 O1群霍亂弧菌必須具備的條件： 涂片為革蘭氏陰性弧菌或桿菌； TCBS等選擇培養(yǎng)基上
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