免疫定性項目性能驗證(編輯修改稿)
2025-02-09 11:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 檢測樣本 ↓ 將所有檢測結(jié)果匯總填表 ↓ 計算評價性能指標 2. 精密度驗證 1） 批內(nèi)精密度 :同一份樣本在同一批次內(nèi)平行重復(fù)檢測 10次 .然后計算均值 ,SD和 CV. 2） 批間精密度 :同一份樣本連續(xù)檢測 10天 ,每天平行檢測雙孔 .然后計算均值 ,SD和 CV. Note: 用 S/CO比值進行統(tǒng)計計算 . 最好選擇臨界值 ,或弱陽性樣本 . 判斷標準 :批內(nèi) CV小于 15%,批間 CV小于 25%. 批內(nèi)重復(fù)性的驗證 ? 高、中、低三個濃度的樣本，在一批檢測內(nèi)，重復(fù)檢測 20次（孔），計算所得 S/CO值的均值和 SD，計算批內(nèi) CV%。 ? 判斷結(jié)論：應(yīng) ≤試劑說明書所標明的批內(nèi)變異。 ELISA的批內(nèi)變異 CV%應(yīng) ≤10%。 批間重復(fù)性 的驗證 ? 高、中、低三個濃度的樣本，在 10天以上時間內(nèi)單次（孔或管）重復(fù)進行 20批檢測，計算所得 S/CO值的均值和 SD，計算批間 CV%。 ? 判斷結(jié)論：應(yīng) ≤試劑說明書所標明的批間變異。 ELISA的批間變異 CV%應(yīng) ≤15%。 3. 敏感性 1）驗證方法 : 取 1020份已知真陽性的樣本，用常規(guī)檢測方法檢測，計算檢測陽性的樣本占樣本總數(shù)的比例。 2）樣本來源 : ? 臨床診斷的陽性病人血清； ? 廠家提供的陽性對照； ? 決定性參考方法檢測陽性的樣本； 以上陽性樣本來源緊張時，可以進行稀釋（如 2： 3， 3： 4這樣稀釋） 4. 特異性 1） 驗證方法 ： 選取 20份正常健康人血清（一般取自健康體檢者），計算其檢測陰性結(jié)果所占百分率 。 2） 樣本來源 :體檢樣本 ,體檢者確認符合要求后即可 . NOTE:部分項目在健康體檢人群中陽性率也很高 ,此類項目特異性驗證很難執(zhí)行 ,建議引用廠家說明書 . 比如麻疹病毒 IgG,CPIgG,MPIgG等一系列病毒抗體 檢者既往是否有過感染史 ,而 IgG抗體在體內(nèi)存留時間長 .因此很難收集到真正意義上的陰性樣本 . 特異性驗證（干擾） ? 特定病原體以外感染性疾病患者的樣本。 ? 含有干擾性物質(zhì)的樣本：類風(fēng)濕因子（ RF）陽性、含異嗜性抗體、溶血、脂血、高膽紅素樣本。 ? 結(jié)果判斷：非特定病原體感染患者樣本均應(yīng)為陰性。含一定濃度干擾物質(zhì)的樣本檢測應(yīng)為陰性。 5. CUTOFF重復(fù)性 和測定下限驗證 ? CUTOFF重復(fù)性驗證：樣本濃度應(yīng) 接近 臨界值 。 不宜用陰性或強陽性樣本 。 ? 批內(nèi)和批間變異驗證：高、中和低三個濃度（與試劑盒說明書中所述相適應(yīng)） 臨界點 的定義 ? 同樣一份樣本，在多次重復(fù)實驗中各有50%的幾率獲得陽性或陰性的結(jié)果時該分析物的濃度 。 CLSI EP12A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance。 Approved Guideline 臨界點（ CUTOFF)與試劑盒判斷值（ CUTOFF值）的區(qū)別 ? 這里的 臨界點 指的是一個處于試劑檢測臨界點的 樣本濃度 ，其一旦確定，是不變的。 ? 試劑盒 CUTOFF值 指的是一個 判斷 某一次測定結(jié)果的由 陰性和陽性 對照信號值按一定公式計算出來的 信號值 ，每次測定都會有所差異。 (1) CUTOFF重復(fù)性驗證 ? CUTOFF的重復(fù)性（同時包含測定下限 的驗證） ? 批內(nèi)變異的驗證 ? 批間變異的驗證 驗證步驟 ? 制備足夠 40次重復(fù)檢測的 3份樣本： 分別為處于臨界濃度、高于臨界濃度 20%和低于臨界濃度 20%的樣 本 。 ? 重復(fù)檢測樣 本 40次，確定每一份樣 本 結(jié)果為陽性和陰性的百分比。
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