法醫(yī)病理學(xué)-組織切片制作(編輯修改稿)
2025-02-05 14:43 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 多 。 2． 石蠟：是由礦物質(zhì)中提取 ， 質(zhì)地較疏松 ， 色白 。 根據(jù)蠟的溶點(diǎn)不同又可分為軟蠟及硬蠟 。 軟蠟： 50℃ 以下的石蠟 。 硬蠟：溶點(diǎn)在 50℃ 以上的石蠟 。兩種蠟可以混合在一起使用 。 石蠟熔點(diǎn)有 52℃ ～ 54℃ ，56℃ ～ 58℃ ， 58℃ ～ 60℃ ， 60℃ ～ 62℃ 。 七 、 切片 工具： 切片刀 、 磨刀機(jī) 、 切片機(jī) 、 水浴鍋 ， 干燥箱等；載薄片 、 手術(shù)刀 、 毛筆 、 彎鑷子 、 托盤 、 大平皿 （ 展片使用 ） 、 烤片盒 、 蛋白甘油等 。 （ 一 ） 切片機(jī)種類： 輪轉(zhuǎn)式切片機(jī) 、 滑行式切片機(jī) （ 滑動(dòng)式 ） 、 冰凍切片機(jī) 、 超薄切片機(jī)等 （ 電鏡用 ） 。 （ 二 ） 構(gòu)造： 由四個(gè)基本部分組成：刀臺(tái) 、 標(biāo)本臺(tái) 、 旋轉(zhuǎn)輪 、 控制切片厚度的微動(dòng)裝置 （ 標(biāo)有 l～ 25或 1～ 50的數(shù)字 ，每一數(shù)字代表一個(gè)微米 ） 。 根據(jù)需要調(diào)節(jié)厚度 ， 一般采用5μm～ 7μm。 蛋白甘油： 用雞蛋清 （ 不要雞蛋黃 ） 用玻璃棒充分?jǐn)嚢韬笥脭?shù)層紗布過(guò)濾后加等量的甘油攪均勻加數(shù)顆麝香草酚 。 （ 三 ） 切片制作 1． 將潔凈的載薄片涂薄層蛋白甘油放人烤片盒內(nèi)待用 。 2． 將切割修整好的蠟塊用普通刀片先將蠟塊的組織切面暴露出來(lái)修平 ， 固定在切片機(jī)上的標(biāo)本臺(tái)上并擰緊螺旋 。 3． 蠟塊先固定在標(biāo)本臺(tái)上切片刀固定于刀臺(tái)上 ， 擰緊固定刀的螺絲同時(shí)調(diào)整刀與蠟塊的切片距離使刀與蠟塊貼緊后再固定刀臺(tái)螺絲 ， 刀的角度為 25度角 。 4． 調(diào)節(jié)微動(dòng)裝置 ， 調(diào)至切片所需厚度 （ 一般為 5μm～ 7μm） 。 5． 修材 。 右手握旋轉(zhuǎn)輪搖把按順時(shí)針?lè)较蚓鶆虻負(fù)u動(dòng)直到組織塊切面完整暴露為止 。 （四）展片 水浴鍋上平皿內(nèi)水溫升至 45℃ 左右 ， 將已切好的連續(xù)薄片切分成數(shù)片 ， 放在水面 ， 輕漂 ， 水中展平 ， 未展平時(shí)可用小彎鑷子輕輕展開 ， 然后用涂有蛋白甘油的載片在水中選擇完整的切片進(jìn)行撈片 。 （ 五 ） 注意事項(xiàng) 1． 切片刀要鋒利 ， 否則切片有切痕或組織破碎 ， 甚至不能制成切片 。 2． 展切片時(shí)水溫要適當(dāng) ， 水溫低 ， 展不平切片 ， 切片有皺折 ， 影響效果；如果水溫過(guò)高 ， 切片入水后可發(fā)生溶化 。 實(shí)習(xí)四 法醫(yī)病理學(xué) 組織切片染色 目的要求： 掌握切片染色 、 封片等技術(shù)及操作過(guò)程 。 一 、 染色前準(zhǔn)備工作 1． 染色：準(zhǔn)備的工具：染色缸或者 12個(gè)盛各種不同濃度的酒精染色筐廣口瓶 ， 染色缸及脫蠟 、 透明用的各二個(gè)二甲苯染色缸 ， 蓋片 ， 帶磨口蓋樹膠瓶一個(gè) ， 鑷子 1把 。 2． 染色需要的試劑及染色液的配制： ① ％ ～ 1％ 鹽酸 —酒精： 用于細(xì)胞核染色分色 。 配制： 100ml的 70％ ～ 80％ 酒精中加人 1ml的濃鹽酸 。 ② 蘇木素 （ hematoxylin） 及伊紅 （ eosin） 蘇木素： 細(xì)胞核的染料 ， 氧化后的蘇木素具有染色能力的 。 蘇木素的配方：二種 ， 一是自然氧化的蘇木素；二是加入氧化劑加速氧化的 。 3．蘇木素的配方 ① 自然氧化（ Ehrlieh）蘇木素： 蘇木精 2g 銨明礬 3g 無(wú)水酒精 100ml 甘油 100ml 蒸餾水 100ml 將上述藥品配在一起后裝入玻璃瓶中，瓶口罩上數(shù)層紗布以防灰塵落入染液，暴露于陽(yáng)光中或空氣中自然氧化（成熟過(guò)程），約 6周 —8周以上，染液配制越久其染色能力越強(qiáng)，可以一次大量配制以備用。 ② 自然氧化 （ Delafield） 蘇木素： 蘇木素 4g 無(wú)水酒精 25ml 銨明礬飽和水溶液 400ml 銨明礬飽和水溶液配法： 10％ 銨明礬水溶液 ， 或 1份銨明礬加蒸餾水 11份 。 配制過(guò)程： 蘇木素溶入酒精后 ， 加入銨明礬液 ， 倒入玻璃瓶中敞開瓶口 ， 罩以數(shù)層紗布 ， 置光線充足處 3 ～ 5天后過(guò)濾 ， 再加入 甘油 100ml、 甲醇 100ml。 置光線充足處經(jīng) ～ 2個(gè)月后成熟 。 染液可保存多年 ， 染色時(shí)多采用蒸餾水稀釋的染色液 。 ③ 加氧化劑的蘇木素配制 Harris蘇木素： ① 液 蘇木精 l g 無(wú)水酒精 10 ml ② 液 鉀 （ 銨 ） 明礬 20 g 蒸餾水 200 ml ③ 氧化汞 g
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