dna的重組與轉(zhuǎn)座培訓(xùn)課程(編輯修改稿)
2025-01-26 02:13 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 V)，它與雙鏈斷口結(jié)合，解開 DNA并導(dǎo)入裂口，其傾向性位點稱為 chi(參見重組熱點 )。RecBCD酶產(chǎn)生 RecA可以作用的底物 RceA (1)具有蛋白酶活性 。 (2) 在單鏈 DNA和 ATP存在的條件下 RecA能啟動DNA單鏈和與之互補(bǔ)的雙鏈分子進(jìn)行堿基配對。 RceG 具有解旋酶活性，可解離 Hollidy連接 RuvAB系統(tǒng) 具有解離 Hollidy連接的活性 RuvA 可識別 Holliday連接的結(jié)構(gòu) RuvB 是一種 ATPase，它可發(fā)動遷移反應(yīng) RuvC 具有內(nèi)切酶活性，可特異識別 Hollidy分枝，它在體外可切這個連接體，解離重組中間體 2 特異位點重組 概念：指發(fā)生在一個特定的短 DNA序列內(nèi)由特異的酶和輔助因子識別和作用的重組。 λ 噬菌體 DNA進(jìn)入大腸桿菌后存在溶源 (CⅠ 占優(yōu)勢 )和裂解 (Cro占優(yōu)勢 )兩條途經(jīng)，二者都要求早期基因的表達(dá)。 噬菌體的附著位點 :att P 細(xì)菌的附著位點 ： att B λ噬菌體整合酶： Int λ噬菌體編碼蛋白： Xis 細(xì)菌的宿主整合因子： IHF ◎ λ噬菌體 DNA的整合與切除 ◎細(xì)菌的特異位點重組 鼠傷寒沙門氏菌 H1鞭毛蛋白和 H2鞭毛蛋白抗原表達(dá)的互變，稱為鞭毛相轉(zhuǎn)變，這種轉(zhuǎn)變是由 H片段倒位 決定的，此倒位是由于特異重組位點 hix發(fā)生重組后引起的。 特異重組位點 hix發(fā)生重組后，引起 H片段倒位，使 H2鞭毛蛋白不表達(dá)， H1表達(dá)。 ◎基本概念 轉(zhuǎn)座子 （ transposon):是在基因組中可移動的一段ＤＮＡ序列。 轉(zhuǎn)座：轉(zhuǎn)座子 由基因組的一個位置轉(zhuǎn)移到另一個位置的過程叫轉(zhuǎn)座。 轉(zhuǎn)座過程有 5大特點：轉(zhuǎn)移、不獨立、與轉(zhuǎn)座基因共存、隨機(jī) 、 引起基因產(chǎn)物改變。 3 轉(zhuǎn)座子重組 (異常重組 ) ◎轉(zhuǎn)座子的分類 插入序列 IS 復(fù)合轉(zhuǎn)座子 1 同源重組 2 特異位點重組 3 異常重組 插入序列 (IS) IS是基因組中可移動遺傳因子家族中的成員之一，它可以整合到宿主非同源位點上，若IS插入到某基因內(nèi)，通常這個基因就會失活。 圖 2318 質(zhì)粒上有 IS， 那么經(jīng)變性和復(fù)性后 ， 在電鏡下可以觀察到莖環(huán)結(jié)構(gòu)的存在 (引自 Griffithset al1999) IS因子特點 只含有與轉(zhuǎn)座有關(guān)的酶基因，不含抗藥性及其它基因，兩端有 1525bp反向重復(fù)序列 (IR)。 類插入序列 （ ISlike elements） 是指 IS 10R， IR50R和 IS 903，它們的 結(jié)構(gòu) 和 IS 相似，但不獨立存在。而是作為復(fù) 合 轉(zhuǎn)座子 兩臂的組件。 表 IS的結(jié)構(gòu)和功能 DR(bp) IR(bp) 中心區(qū)域(bp) 靶的選擇 拷貝數(shù) 插入序列 : IS 1 9 23 768 隨機(jī) 5～ 8 IS2 5 41 1327 熱點 5 (在 F因子上為一 ) IS4 11~13 18 1428 AAN20TTT 1或 2 IS5 4 16 1195 熱點 ？ 類插入序列 : IS10R 9 22 1329 NGCTNAGCN IS50R 9 9 1531 熱點
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