dna重組的操作(編輯修改稿)
2025-01-26 01:55 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 c) DNA接頭 (adapter)連接法 adapter:一頭平末端、另一頭粘性末端（某種酶切位點(diǎn)序列）。 adapter的作用 :用 T4DNA連接酶連到 DNA分子的兩端，直接成為人工粘性末端。 5‘pGATCCCGGOH3’ GGCCp5’ BamHI adapter 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 缺點(diǎn)： 接頭與接頭會(huì)彼此以粘性末端接在一起，影響與 DNA片段的連接。 防止自我連接： ?先用 堿性磷酸酶 （ CIP）處理接頭 ?以后再用 T4多核苷酸激酶 加上磷酸。 DNA接頭 (adapter)連接法 生命科學(xué)學(xué)院 平頭末端連接 （ 1） 直接連接 （ 2） 人工加尾形成 “粘性末端 ” a)同聚加尾法 b)銜接物連接 c) DNA接頭連接法 小結(jié) PCR? 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) 重組 DNA分子的構(gòu)建 （ 1）在引物的 5’端設(shè)計(jì)酶切位點(diǎn) GCAGAATTC 互補(bǔ)序列 3’端 15~20bp與模板互補(bǔ)； 5’端 6~10bp是某個(gè)內(nèi)切酶的識(shí)別序列 （ 5’端多余的 3~5bp屬 保護(hù)堿基 ） 引物 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 引物 1 GCAGAATTC 互補(bǔ)序列 模板 EcoRI位點(diǎn) 5’ 3’ GCAGAATTC 互補(bǔ)序列 5’ 3’ 3’ 模板 GCAGAATTC 互補(bǔ)序列 PCR產(chǎn)物 5’ 3’ 3’ 復(fù)性 延伸 模板 模板 3’ 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 GCTAGCCGG 互補(bǔ)序列 模板
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