dna重組的操作(編輯修改稿)
2025-01-26 01:55 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 c) DNA接頭 (adapter)連接法 adapter:一頭平末端、另一頭粘性末端（某種酶切位點序列）。 adapter的作用 :用 T4DNA連接酶連到 DNA分子的兩端，直接成為人工粘性末端。 5‘pGATCCCGGOH3’ GGCCp5’ BamHI adapter 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 缺點： 接頭與接頭會彼此以粘性末端接在一起，影響與 DNA片段的連接。 防止自我連接： ?先用 堿性磷酸酶 （ CIP）處理接頭 ?以后再用 T4多核苷酸激酶 加上磷酸。 DNA接頭 (adapter)連接法 生命科學(xué)學(xué)院 平頭末端連接 （ 1） 直接連接 （ 2） 人工加尾形成 “粘性末端 ” a)同聚加尾法 b)銜接物連接 c) DNA接頭連接法 小結(jié) PCR? 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) 重組 DNA分子的構(gòu)建 （ 1）在引物的 5’端設(shè)計酶切位點 GCAGAATTC 互補序列 3’端 15~20bp與模板互補； 5’端 6~10bp是某個內(nèi)切酶的識別序列 （ 5’端多余的 3~5bp屬 保護堿基 ） 引物 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 引物 1 GCAGAATTC 互補序列 模板 EcoRI位點 5’ 3’ GCAGAATTC 互補序列 5’ 3’ 3’ 模板 GCAGAATTC 互補序列 PCR產(chǎn)物 5’ 3’ 3’ 復(fù)性 延伸 模板 模板 3’ 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 GCTAGCCGG 互補序列 模板
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1