11dna重組的基本技術(shù)(編輯修改稿)
2025-03-17 17:22 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 起限制外來(lái) DNA、保護(hù)自身DNA的作用一、 “分子手術(shù)刀 ”—— 限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）：主要來(lái)自于原核生物，如：大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)可分離出 EcoRI限制酶：識(shí)別特定的核苷酸序列并水解特定的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。大多數(shù)限制酶能夠識(shí)別的序列均為 6個(gè)核苷酸（個(gè)別 8）(1)限制酶識(shí)別序列的特點(diǎn)? 限制酶所識(shí)別的序列，無(wú)論是 6個(gè)堿基還是 4個(gè)堿基，都可以找到一條中心軸線，以中軸線雙側(cè)的 DNA上堿基呈反向?qū)ΨQ，重復(fù)排列。? ? 如： GAA TTC CCC GGG? CTT AAG GGG CCC(2)切點(diǎn)：AATTGCCTTAAG※ 與 DNA酶有什么區(qū)別？磷酸二酯鍵●實(shí)質(zhì)：DNA酶：不特異性識(shí)別序列水解 DNA●水解產(chǎn)物：DNA酶：限制酶： DNA片段基本單位 —— 脫氧核苷酸能識(shí)別和切割雙鏈 DNA分子特異序列的核酸水解酶限制酶：重播：切割 DNA分子產(chǎn)生兩種類型的末端：黏性末端和平末端(1)黏性末端黏性末端 被限制酶切開(kāi)的被限制酶切開(kāi)的 DNA兩條兩條 單鏈的切口單鏈的切口 ，帶有幾個(gè)，帶有幾個(gè) 伸伸出的核苷酸出的核苷酸 ，他們之間正好，他們之間正好 互補(bǔ)配對(duì)互補(bǔ)配對(duì) ，這樣的切口叫，這樣的切口叫 黏黏性末端性末端 ?！ ?DNA被限制酶切斷后有兩個(gè)反向互補(bǔ)的 “ 黏性末端 ” 。被同一種限制切斷的幾個(gè) DNA具有相同的黏性末端，能夠通過(guò)互補(bǔ)進(jìn)行配對(duì)。(2)平末端在識(shí)別順序的對(duì)稱軸上，對(duì)雙鏈 DNA同時(shí)切割。： EcoRI限制酶能識(shí)別 GAATTC序列，并在 G和 A之間切開(kāi)限制酶限制酶? 要想獲得某個(gè)特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個(gè)要想獲得某個(gè)特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個(gè)切口？可產(chǎn)生幾個(gè)黏性末端？切口？可產(chǎn)生幾個(gè)黏性末端？要切兩個(gè)切口，產(chǎn)生四個(gè)黏性末端。要切兩個(gè)切口，產(chǎn)生四個(gè)黏性末端。? 如果把兩種來(lái)源不同的如果把兩種來(lái)源不同的 DNA用同一種限制酶來(lái)切割，用同一種限制酶來(lái)切割，會(huì)怎樣呢？會(huì)怎樣呢？ 會(huì)產(chǎn)生會(huì)產(chǎn)生 相同的黏性末端相同的黏性末端 ，然后讓兩者的黏性末端，然后讓兩者的黏性末端黏合黏合 起來(lái)，就可以起來(lái)，就可以 重組的重組的 DNA分子分子 了。了。思考※ 限制酶的命名●第一個(gè)字母（大寫、斜體） 該酶的微生物屬名●第二、三個(gè)字母（小寫、斜體） 代表微生物種名●第四個(gè)字母（斜體） 代表寄主菌的株或型●用羅馬數(shù)碼 I、 II、 III等區(qū)分同一株具 有不同特異性的酶例 流感嗜血桿菌中三個(gè)酶的命名：Haemophilus influenzae d 屬名 種名 株系 H in d I II III Hind I Hind II Hind III ※ 限制酶的 分類 根據(jù)限制酶的識(shí)別切割特性、催化條件及是否具有修飾酶活性可分為： I型 II型 III型屬于復(fù)合功能酶，兼有修飾和切割
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