11dna重組的基本技術(編輯修改稿)
2025-03-17 17:22 本頁面
【文章內容簡介】 起限制外來 DNA、保護自身DNA的作用一、 “分子手術刀 ”—— 限制性核酸內切酶（限制酶）：主要來自于原核生物，如：大腸桿菌細胞內可分離出 EcoRI限制酶：識別特定的核苷酸序列并水解特定的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。大多數限制酶能夠識別的序列均為 6個核苷酸（個別 8）(1)限制酶識別序列的特點? 限制酶所識別的序列，無論是 6個堿基還是 4個堿基，都可以找到一條中心軸線，以中軸線雙側的 DNA上堿基呈反向對稱，重復排列。? ? 如： GAA TTC CCC GGG? CTT AAG GGG CCC(2)切點：AATTGCCTTAAG※ 與 DNA酶有什么區(qū)別？磷酸二酯鍵●實質：DNA酶：不特異性識別序列水解 DNA●水解產物：DNA酶：限制酶： DNA片段基本單位 —— 脫氧核苷酸能識別和切割雙鏈 DNA分子特異序列的核酸水解酶限制酶：重播：切割 DNA分子產生兩種類型的末端：黏性末端和平末端(1)黏性末端黏性末端 被限制酶切開的被限制酶切開的 DNA兩條兩條 單鏈的切口單鏈的切口 ，帶有幾個，帶有幾個 伸伸出的核苷酸出的核苷酸 ，他們之間正好，他們之間正好 互補配對互補配對 ，這樣的切口叫，這樣的切口叫 黏黏性末端性末端 ?！ ?DNA被限制酶切斷后有兩個反向互補的 “ 黏性末端 ” 。被同一種限制切斷的幾個 DNA具有相同的黏性末端，能夠通過互補進行配對。(2)平末端在識別順序的對稱軸上，對雙鏈 DNA同時切割。： EcoRI限制酶能識別 GAATTC序列，并在 G和 A之間切開限制酶限制酶? 要想獲得某個特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個要想獲得某個特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產生幾個黏性末端？切口？可產生幾個黏性末端？要切兩個切口，產生四個黏性末端。要切兩個切口，產生四個黏性末端。? 如果把兩種來源不同的如果把兩種來源不同的 DNA用同一種限制酶來切割，用同一種限制酶來切割，會怎樣呢？會怎樣呢？ 會產生會產生 相同的黏性末端相同的黏性末端 ，然后讓兩者的黏性末端，然后讓兩者的黏性末端黏合黏合 起來，就可以起來，就可以 重組的重組的 DNA分子分子 了。了。思考※ 限制酶的命名●第一個字母（大寫、斜體） 該酶的微生物屬名●第二、三個字母（小寫、斜體） 代表微生物種名●第四個字母（斜體） 代表寄主菌的株或型●用羅馬數碼 I、 II、 III等區(qū)分同一株具 有不同特異性的酶例 流感嗜血桿菌中三個酶的命名：Haemophilus influenzae d 屬名 種名 株系 H in d I II III Hind I Hind II Hind III ※ 限制酶的 分類 根據限制酶的識別切割特性、催化條件及是否具有修飾酶活性可分為： I型 II型 III型屬于復合功能酶，兼有修飾和切割
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