【文章內(nèi)容簡介】 進(jìn)而判斷樣品中靶分子的數(shù)量。 基本原理： （生物集成模片、 DNA陣列、或寡核苷酸微芯片） 基因芯片技術(shù)： 目的：檢測外源性基因的侵入 目標(biāo)： 微生物 病毒 如： HIV（致艾滋病 AIDS） 寄生蟲、 不易體外培養(yǎng)的病原體（毒性大腸桿菌、麻風(fēng)分枝 桿菌） 實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的病原體（克立氏體） 四、基因診斷的 臨床應(yīng)用 : 在感染性疾病檢測中應(yīng)用 艾滋病與 HIV病毒 艾滋病由 HIV通過接觸、血液、血制品及母嬰傳播感染所致。 HIV特異地侵犯輔助性 T細(xì)胞（ CD4），引起人體細(xì)胞免疫嚴(yán)重缺陷，導(dǎo)致頑固的機(jī)會(huì)性感染，惡性腫瘤和神經(jīng)系統(tǒng)損傷。 HIV 感染后， 95%感染者 5個(gè)月可檢出抗體（也有 34年仍不能檢出抗體）。有必要進(jìn)行PCR技術(shù)檢測。 艾滋病與 HIV病毒 檢測技術(shù)： 巢式 PCR、 Southern、 DNA序列分析 引物的設(shè)計(jì) ：應(yīng)在保守區(qū)（基因： pol, env, gag, tat) 病毒特點(diǎn)： HIV病毒由兩條單鏈 RNA組成， / RNA， 主要基因結(jié)構(gòu)和組成形成與其他逆轉(zhuǎn)錄病毒相同，但較 之復(fù)雜，故稱復(fù)雜反轉(zhuǎn)錄病毒 HIV屬反轉(zhuǎn)錄病毒－－－即單鏈 RNA反轉(zhuǎn)錄成雙鏈 DNA， 進(jìn)入宿主細(xì)胞染色體。 非典型性肺炎（ SARS） 由一種新型冠狀病毒（ SARSCoV）引起，多種 途徑傳播，傳染性強(qiáng)、高致死率的急性疾病。 診斷依靠： 流行病學(xué)、臨床表現(xiàn)、放射診斷、 血清學(xué)（熒光免疫、 ELISA） PCR作為一種靈敏的早期病原學(xué)診斷必不可少 （關(guān)鍵是引物的合成） 在遺傳病檢測中的應(yīng)用 ? 產(chǎn)前診斷 檢測妊娠 8－ 12周的絨毛 DNA或羊水細(xì)胞 PCR診斷一系列遺傳疾病 ? 鐮刀狀細(xì)胞貧血的診斷 方法：－ RFLP診斷 MstⅡ 酶切識(shí)別序列： CCTNAGG 切割正常 β 鏈序列： CCTGAGG 不切割突變序列： CCTGTGG － ASO探針診斷 在腫瘤檢測中的應(yīng)用 原癌基因 生物正常細(xì)胞基因中編碼關(guān)鍵性調(diào)控蛋白的 癌基因 抑癌基因 一類抑制細(xì)胞增殖的基因，其失活可引起細(xì) 胞轉(zhuǎn)化。 兩類基因協(xié)同調(diào)控，使細(xì)胞生長處于平衡狀態(tài)。 癌基因激活變化及檢測： 基因擴(kuò)增：即染色體某區(qū)段基因拷貝數(shù)增加，或癌基 因的擴(kuò)增。 檢測方法： Southern 雜交 定量 PCR 基因的過量表達(dá)：包括基因擴(kuò)增基礎(chǔ)上的過量表達(dá)及非 DNA水平的過量表達(dá)。 檢測方法： Northern 雜交 RTPCR 點(diǎn)突變： 檢測方法為各種基于 PCR的方法。 抑癌基因的檢測： Southern PCR 大片段的缺失、和點(diǎn)突變 *兩個(gè)等位抑癌基因突變才能引起腫瘤，需檢 出兩個(gè)等位抑癌基因。 方法： RFLP結(jié)合 PCR，進(jìn)行缺失檢測 點(diǎn)突變主要采用 PCR 腫瘤標(biāo)志物： 指特征性存在于惡性腫瘤或由惡性腫瘤細(xì) 胞異常產(chǎn)生的物質(zhì)或宿主對(duì)腫瘤反應(yīng)而產(chǎn) 生的物質(zhì)。 （ 1）酶類腫瘤標(biāo)志物 （ 2）激素類標(biāo)志物 （ 3）胚胎抗原 （ 4）特殊蛋白標(biāo)志物 （ 5）糖蛋白類抗原 （ 6）血中癌基因蛋白 （ 7）唾液酸和唾液酸酰基轉(zhuǎn)移酶 （ 8）多胺 免疫組化篩選提高檢出率 法醫(yī)學(xué)鑒定 針對(duì)人類 DNA 遺傳差異進(jìn)行的個(gè)體識(shí)別和親子鑒定。 常用技術(shù) : DNA指紋分析（ VNTR） 短串聯(lián)重復(fù)序列（ STR）遺傳特征分析 PCR擴(kuò)增片段長度多態(tài)性（ AmPFLP) PCRmtDNA技術(shù) 根據(jù) 可變串聯(lián)重復(fù)序列 （小衛(wèi)星 DNA）多態(tài)性 高度的個(gè)體特異性 DNA指紋（圖譜）分析： ⑴、選擇核心序列作探針，選在核心序列上無切割 位點(diǎn)的限制性內(nèi)切酶，酶解樣品， Southern blot得到 DNA指紋圖譜 。 針對(duì)可變串聯(lián)重復(fù)序列（ VNTR） （ VNTR是判斷個(gè)體的遺傳標(biāo)志） ⑵、針對(duì) VNTR側(cè)翼保守區(qū) 序列設(shè)計(jì)探針，用 PCR 對(duì)該區(qū)擴(kuò)增，電泳得到個(gè)體之間長度不同的條 帶圖譜。（ VNTR片段較長 PCR不易擴(kuò)增）。 第二節(jié) 基因治療（ gene therapuy) 概念： 將外源正常基因?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因缺陷和異?；蛞鸬募膊。_(dá)到治療目的。 導(dǎo)入的基因可以與缺陷基因?qū)?yīng)、在體內(nèi)表達(dá)具有特異功能的同源基因、也可以是與缺陷基因無關(guān)的治療基因。 概念的擴(kuò)展： 凡是采用分子生物學(xué)方法原理，將某種遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移 到患者細(xì)胞內(nèi)，使其在體內(nèi)發(fā)揮作用，達(dá)到治療目的 的方法，都可稱為基因治療。 基因治療策略 : 總原則： －－直接補(bǔ)替缺陷基因 －－抑制非正?；虍a(chǎn)物表達(dá) －－間接調(diào)節(jié)機(jī)體本身免疫系統(tǒng)的抗病能力。 －－利用外源基因?qū)Σ∽兗?xì)胞造成特異性殺傷 基因矯正－－將致病基因的堿基進(jìn)行糾正，而正常部分予以保留。 基因置換－－用正常基因通過體內(nèi)基因同源重組，原位置換病變細(xì) 胞內(nèi)的致病基因，使細(xì)胞內(nèi)的 DNA完全恢復(fù)正常 基因增補(bǔ)－－將目的基因?qū)氩∽兗?xì)胞或其它細(xì)胞，不去除異常 基因，而是通過目的基因的非定點(diǎn)整合，使其表達(dá) 產(chǎn)物補(bǔ)償缺陷基因的功能或使原有功能得以加強(qiáng)。 基因失活－－利用反義技術(shù)特異封閉基因表達(dá)，抑制有害基因 的表達(dá)。 免疫調(diào)節(jié)－－將抗體、抗原或細(xì)胞因子的基因?qū)氩∪梭w內(nèi)， 改變病人免疫狀態(tài)，達(dá)到預(yù)防和治療的目的。 基因治療的策略：