微生物檢測(cè)基礎(chǔ)知識(shí)(編輯修改稿)
2025-01-15 15:41 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 連續(xù)三天 ,又稱(chēng)為間歇滅菌 .主要用于實(shí)驗(yàn)室一些不耐高溫的培養(yǎng)基及其它液體材料 ? c巴氏消毒 主要用于葡萄酒 ,啤酒及牛奶的消毒 .這種方法可以殺死食品中常見(jiàn)的病原菌 ,及其他微生物的繁殖體 ,而有不損失食品中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) ? d煮沸消毒 ? 將液體材料加熱煮沸至近 100℃ ,維持 1020分鐘可以殺死所有的細(xì)菌繁殖體 ,但不可能殺死全部芽孢 .此法多用于實(shí)驗(yàn)室小件器械的臨時(shí)消毒 . 影響滅菌的因素 ? 對(duì)高溫的敏感性不同。多數(shù)微生物的營(yíng)養(yǎng)體和病毒在 50~65℃ ， 10分鐘就會(huì)被殺死；但各種孢子、特別是芽孢最能抗熱，其中抗熱性最強(qiáng)的是嗜熱脂肪芽孢桿菌，要在 121℃ ， 12分鐘才被殺死。對(duì)同種微生物來(lái)講，幼齡菌比老齡菌對(duì)熱更敏感。 ? 效果，數(shù)量越多，熱死時(shí)間越長(zhǎng)。 ? 。一般地講，蛋白質(zhì)、糖或脂肪存在，則提高抗熱性， pH在 7附近，抗熱性最強(qiáng)，偏向兩極，則抗熱能力下降，而不同的鹽類(lèi)可能對(duì)滅菌產(chǎn)生不同的影響；固體培養(yǎng)基要比液體培養(yǎng)基滅菌時(shí)間長(zhǎng)。 ? 用于防止 微生物 進(jìn)入人體組織或其它無(wú)菌范圍的操作技術(shù)稱(chēng)為無(wú)菌操作。如外科手術(shù)需防止 細(xì)菌 進(jìn)入傷口 . 在各種 生物 實(shí)驗(yàn)中 ,為了防止微生物的生長(zhǎng)和 繁殖 影響實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行 ,也要在無(wú)菌的環(huán)境 下進(jìn)行 . ? 無(wú)菌操作的要求是 : 1操作前將界面上的細(xì)菌和 病毒 等微生物殺滅 2操作過(guò)程中是界面與外界隔離 ,避免微生物的侵入 ? 1)實(shí)驗(yàn)前，無(wú)菌室應(yīng)打開(kāi)紫外線燈滅菌30分鐘以上 ,實(shí)驗(yàn)中應(yīng)穿工作衣帽 . ? 2)嚴(yán)格無(wú)菌操作，接種針、接種環(huán)在使用前后都必須火焰灼燒。 ? 3)實(shí)驗(yàn)前后用 75%（ v/v）酒精對(duì)手消毒。 ? 4)沾有病原微生物的器材，應(yīng)置于指定地點(diǎn)。廢棄物應(yīng)用 5%苯酚浸泡。 ? 革蘭氏染色法將細(xì)菌分為革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性 ,是由這兩類(lèi)細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和組成不同決定的 . ? G＋菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性障，當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖脫水而孔障縮小，透性降低 ,故保留結(jié)晶紫 碘復(fù)合物不易被洗脫而保留在細(xì)胞膜上。呈紫色 ? Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，其脂含量高 ,乙醇將脂溶解，細(xì)胞壁透性加大，結(jié)晶紫 碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，沙黃復(fù)染后呈紅色 ? 革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法是： 1）涂片固定。取 菌種培養(yǎng)物常規(guī)涂片 ,干燥 ,固定 . 2）草酸銨結(jié)晶紫染 1分鐘。 ? 3）自來(lái)水沖洗。 4）加碘液覆蓋涂面染 1分鐘。 5）水洗，用吸水紙吸去水分。 ? 6）加 95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色， 10秒后水洗，吸去水分。 7）滴加沙黃復(fù)染液復(fù)染 1分鐘后，自來(lái)水沖洗。干燥，鏡檢。 染色的結(jié)果，革蘭氏陽(yáng)性菌體都呈紫色，陰性菌體都呈紅色 ? 顯微鏡是檢驗(yàn)工作中常用的貴重和精密儀器 ， 對(duì)它的使用和保護(hù)必須十分重視 。 （ 1） 姿勢(shì)：使用顯微鏡時(shí)必須端坐 ， 凳和桌高度適宜 。 顯微鏡應(yīng)直立在桌上 ， 不可將鏡臂彎曲而使載物臺(tái)傾斜 ， 油液或菌液將流散而影響觀察和污染 。 用顯微鏡觀察標(biāo)本時(shí)要兩眼睜開(kāi) （ 如開(kāi)始不習(xí)慣 ， 可以一手掩目 ， 不可閉眼 ） （ 2） 光源：通常用日光燈或天然光線 ， 不用直射日光 ， 以免眼睛和鏡頭受損 。 若使用顯微鏡燈時(shí) ， 最好加以藍(lán)色濾光片 ，以除去黃光的影響 。 光線的強(qiáng)弱可通過(guò)聚光器的升降 、光圈的大小及反光鏡的平面或凹面來(lái)調(diào)節(jié) ， 光線的適當(dāng)運(yùn)用是項(xiàng)重要的基本功 。 3） 檢查： ① 低倍鏡：一般先用低倍鏡開(kāi)始觀察標(biāo)本 ， 先從側(cè)面注視鏡頭 ， 用粗調(diào)節(jié)將物鏡下旋到底或降到將接觸標(biāo)本時(shí) ， 再用左眼注視目鏡中 ， 旋轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)器 ， 至視野中出現(xiàn)物象時(shí) ， 最后用細(xì)調(diào)節(jié)器使形象清晰 。 ② 高倍境：低倍鏡調(diào)節(jié)清晰后 ， 換上高倍境 ， 稍加調(diào)節(jié) ， 即可進(jìn)行觀察 ， 要避免細(xì)菌懸液等污染鏡頭 。 ③ 油鏡：檢查細(xì)菌常用油鏡 。 使用油鏡時(shí)要升高聚光鏡 ， 放大光圈 ， 調(diào)節(jié)反光鏡 ， 使射入鏡筒之光線最強(qiáng) 。 于載玻片上滴加鏡油 （ 香柏油 ） 一滴 ， 使接物鏡下降和鏡油接觸 （ 將觸及載玻片 ） 。 注視目鏡 ， 轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器 ， 使物鏡上升少許 ， 見(jiàn)到標(biāo)本后 ， 左手轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)器 ， 使物象清晰；右手掌握移動(dòng)器 ， 檢查標(biāo)本 。 用油鏡觀察標(biāo)本時(shí) ， 切勿用粗調(diào)節(jié)器下
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