基因工程與體外表達(dá)(編輯修改稿)
2025-10-08 20:46 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 β半乳糖苷酶基因（ Lac Z）等。 （ 3）具有多個(gè)限制性?xún)?nèi)切酶的單一切點(diǎn)，便 于外源基因的插入。 13 14 (二 )λ 噬菌體 野生型 λ噬菌體經(jīng)過(guò)改造，已衍生出 100多種克隆載體。 λ噬菌體載體分為插入型和替換型 (置換型 )兩類(lèi)。 目前應(yīng)用較廣的是 EMBL系列、 λgt系列和Charon系列等。 15 λgt10和 λgt11載體適用于建立 cDNA文庫(kù)。這兩個(gè)載體都屬插入型載體，能克隆 7kb以下的外源 DNA。 λ gt11為表達(dá)型載體。 16 (三 ) M13噬菌體 (M13 phage) 一種大腸桿菌雄性特異絲狀噬菌體 。 感染細(xì)菌后 ， 經(jīng)過(guò)復(fù)制轉(zhuǎn)變?yōu)殡p鏈的復(fù)制型 （ RF） 。 復(fù)制型M13可用作克隆載體 。 17 18 (四 )黏性質(zhì)粒 （ cosmid） 是由 λ噬菌體的黏性末端 （ cos區(qū) ） 與質(zhì)粒重新構(gòu)建的載體 ， 為雙鏈 、 環(huán)狀 DNA。 其克隆容量可達(dá) 40～ 50 kb。 19 (五 ) 病毒載體 逆轉(zhuǎn)錄病毒 、 腺病毒 、 腺相關(guān)病毒 、EB病毒等作為基因轉(zhuǎn)移的載體 。 多數(shù)病毒載體均已質(zhì)?；?， 病毒載體質(zhì)粒主要由病毒啟動(dòng)子 、 包裝元件 、 選擇性遺傳標(biāo)記 ，以及 pBR322的復(fù)制子組成 。 20 二 、 表達(dá)載體 (一 ) 原核表達(dá)載體 表達(dá)載體中含有復(fù)制起始位點(diǎn)、抗性基因 、克隆位點(diǎn) 、啟動(dòng)子 、核糖體結(jié)合位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)。 21 multiple cloning site 22 (二 ) 真核表達(dá)載體 含有原核復(fù)制起始位點(diǎn)、抗生素抗性基因 . 還含有真核表達(dá)元件 ,包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、克隆位點(diǎn)、 轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)和 poly (A) 加尾信號(hào) . 23 第三節(jié) 基因克隆的基本過(guò)程 基因克隆主要步驟： ①制備目的基因和選擇相關(guān)載體 ②目的基因和有關(guān)載體進(jìn)行連接 ③重組的 DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞 ④ DNA重組體的篩選和
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