遺傳工程ppt課件(2)(編輯修改稿)
2024-10-08 20:25 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ，有獨(dú)立的復(fù)制起始位點(diǎn) ② 有限制酶切位點(diǎn)，允許外源基因插入且插入 后隨載體 DNA分子一同進(jìn)行復(fù)制或擴(kuò)增 ③ 有選擇標(biāo)記，便于選擇含重組 DNA分子的寄主 細(xì)胞 ④ 分子量小，多拷貝，易于操作 ⑤ 具有安全性等 （ 1）細(xì)菌質(zhì)粒：廣泛應(yīng)用于基因工程 圖 126 質(zhì)粒 PUC18的結(jié)構(gòu)及多克隆位點(diǎn) Ti質(zhì)粒及其衍生載體 Ti質(zhì)粒包括五個區(qū)域， 1. LB與 RB之間的TDNA，這段序列整合到植物基因組中； 2. 質(zhì)粒轉(zhuǎn)移區(qū) (PT)； 3. 冠癭堿代謝區(qū)； 4. 復(fù)制原點(diǎn)； 5. 毒性區(qū)。 → TDNA區(qū)域內(nèi)的所有基因與轉(zhuǎn)移無關(guān) ， 所以將致瘤基因全部缺失即卸甲(disarmed)后 ， 將細(xì)菌抗生素的抗性基因或其它序列插入到這個區(qū)域 ， 形成的 TDNA仍可將 RB至 LB內(nèi)的序列轉(zhuǎn)移并整合到植物基因組 。 → Vir區(qū)的毒性基因是 TDNA轉(zhuǎn)移所必需的 ， 毒性基因可以順式及反式兩種方式控制 TDNA轉(zhuǎn)移 。 Ti質(zhì)粒是約 150200kb的環(huán)狀 DNA分子 ，很難直接使用 ， 故需對其加以改造 ， 構(gòu)建出 Ti質(zhì)粒的衍生載體系統(tǒng) ， 廣泛用作植物基因工程中的載體： （ 1） 雙元載體 (binary vectors） 如 pBin19載體 ， 具有原核生物的卡那霉素抗性基因 (AphⅠ) 作為細(xì)菌選擇標(biāo)記 ，真核生物的卡那霉素抗性基因 (nosNptⅡ) 作為植物的選擇標(biāo)記 ， pUC19的多克隆位點(diǎn)及 α 互補(bǔ)顯色標(biāo)記 （ 2） 共整合載體 (integrated vectors) （ 2） ?噬菌體載體 ?噬菌體； ?噬菌體DNA； ?噬菌體DNA中間 基因簇； 將連接物體外包裝后感染細(xì)菌，制備基因庫 （用于基因庫構(gòu)建） 246135（ 3）克隆大片段 DNA的載體 粘粒載體 克隆外源 片段的長 度在 15~ 45kb之間 細(xì)菌人工染色體 (BAC) 上述的幾種載體都不能攜帶大于 50kb的外源 DNA片段， 而很多真核生 物基因長度在 50kb以上。 細(xì) 菌人工染色體 載體就是為 克隆更大的外 源 DNA片段而設(shè) 計構(gòu)建的 圖 129 細(xì)菌人工染色體載體 pBAC 108L 及其多克隆位點(diǎn)。 可插入達(dá) 300kb 左右的 DNA片段 酵母 人工染色體 （ YAC） YAC載體可以插入 大片段的 DNA （ 12Mb），成為 人類基因組計劃（ HGP）的一種重要 工具 三、基因分離方法 一個基因就是編碼一條多肽鏈的一個 DNA片段，包括啟動子、終止子及內(nèi)含子。 利用 DNA重組技術(shù)，可從一個含有 10萬個基因的大基因組中，準(zhǔn)確地
公司管理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1