高二生物多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段(編輯修改稿)
2024-12-18 17:20 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 的是 ( ) A． DNA聚合酶不能從頭開始合成 DNA， 只能從5′ 端延伸 DNA鏈 B． DNA復(fù)制不需要引物 C． 引物與 DNA母鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)進(jìn)行結(jié)合 D． PCR擴(kuò)增的對(duì)象是氨基酸序列 【嘗試解答】 __C__ 例 1 【 解析 】 由于 DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA， 只能從 3′ 端延伸 DNA鏈 ， 故 DNA復(fù)制需要引物 ， 而且它與 DNA母鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合 。 PCR擴(kuò)增的對(duì)象是 DNA， 而不是氨基酸 。 【 探規(guī)尋律 】 (1)引物是一小段 DNA或 RNA， 它能與 DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì) 。 包括引物 Ⅰ 和引物 Ⅱ 兩種 。 用于 PCR的引物長(zhǎng)度通常為20～ 30個(gè)核苷酸 。 (2)細(xì)胞內(nèi) DNA復(fù)制與 PCR技術(shù)的原理和過(guò)程容易發(fā)生混淆，特別應(yīng)注意區(qū)分 PCR反應(yīng)需要可變的溫度，而體內(nèi) DNA復(fù)制需要穩(wěn)定的溫度。 跟蹤訓(xùn)練 (2020年海淀區(qū)高二檢測(cè) )關(guān)于 DNA片段 PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)的描述中不正確的是 ( ) A． 加入的 Taq DNA聚合酶耐高溫 B． 不同大小 DNA在電場(chǎng)中遷移速率不同 C． 此過(guò)程需要 DNA連接酶 D．?dāng)U增區(qū)域由兩種引物來(lái)決定 解析： 選 C。 PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)是在較高溫度下進(jìn)行的 ，故需要耐高溫的 Taq DNA聚合酶 ， 但不需要 DNA連接酶 ， A項(xiàng)正確 ， C項(xiàng)錯(cuò)誤 。 因?yàn)椴煌笮〉腄NA帶有不同數(shù)量的電荷 ， 所以在電場(chǎng)中遷移速率不同 ， B項(xiàng)正確 。 PCR擴(kuò)增需要兩種引物 ， 分別與 DNA的兩條模板鏈互補(bǔ) ， 則 D項(xiàng)正確 。 PCR反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程 1． 反應(yīng)體系的配方 10倍濃縮的擴(kuò)增緩沖液 5 μL 20 mmol/L的 4種脫氧核苷酸的等量混合液 1 μL 20 μmol/L的引物 Ⅰ μL 20 μmol/L的引物 Ⅱ μL H2O 28～ 33 μL 1～ 5 U/μL 的 TaqDNA聚合酶 1～ 2U 模板 DNA 5～ 10 μL 注： ① 總體積 50 μL， ② 模板 DNA的用量在 1 pg～ 1 mg之間 (1)PCR儀： PCR自動(dòng)化程度較高，參照下表設(shè)計(jì)程序即可。 循環(huán)數(shù) 變性 復(fù)性 延伸 預(yù)變性 94 ℃ ， 5 min － － 30次 94 ℃ ， 30 s 55 ℃ ， 30 s 72 ℃ ， 1 min 最后一次 94 ℃ ， 1 min 55 ℃ ， 30 s 72 ℃ ， 1 min 若無(wú) PCR儀 ， 可用恒溫水浴鍋代替 ， 三個(gè)恒溫水浴鍋的溫度分別為 94 ℃ 、 55 ℃ 和 72 ℃ ， 然后按照上表要求 ， 在三個(gè)水浴鍋中來(lái)回轉(zhuǎn)移 PCR反應(yīng)的微量離心管 。 (2)微量離心管：一種薄壁塑料管 ， 總?cè)莘e為 mL。 (3)微
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