級碩士高級免疫學實驗技術-概述(編輯修改稿)
2024-09-12 02:49 本頁面
【文章內容簡介】 (Protein A)親和層析獲得的 IgG型抗體； ?免疫放射測定的標記用抗體必須達到雙級純才可應用 (親和層析純 +SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳純 )。 純度要求 ?單克隆抗體在制備過程中經過嚴格的篩選，因此應根據不同的應用目的選擇不同單克隆抗體亞類，如標明供 ELISA檢測用的單克隆抗體，可能不適合Western Blot檢測。 ?作為初學者尤其應該注意各類單克隆抗體標明的應用范圍，而多克隆抗體一般情況下均有較寬的適用范圍。 適用范圍 一抗和二抗 ? 一級抗體：抗原特異性的抗體 ? 二級抗體：抗抗體（針對一抗的 Fc段，具有種屬特異性） Ag Ag ? 沉淀反應 ? 凝集反應 ? 免疫標記技術 抗原抗體反應的特點 特異性 的﹡ 交叉反應 可逆 的引力：氫鍵、疏水鍵、靜電引力、范德華力斥力： 階段抗原抗體特異性結合階段可見反應階段 分子比例 與抗原抗體結合是否呈現(xiàn)可見的反應現(xiàn)象密切相關 抗體過剩區(qū) 抗原過剩區(qū)等價區(qū)抗原與抗體的結合是 特異性 的﹡ 交叉反應抗原抗體結合是 可逆 的引力：氫鍵、疏水鍵、靜電引力、范德華力斥力：電子云產生的排斥力抗原抗體反應可分為兩個 階段抗原抗體特異性結合階段可見反應階段抗原抗體的 分子比例 與抗原抗體結合是否呈現(xiàn)可見的反應現(xiàn)象密切相關 抗體過剩區(qū) 抗原過剩區(qū)等價區(qū)抗原與抗體的結合是 特異性 的﹡ 交叉反應抗原抗體結合是 可逆 的引力：氫鍵、疏水鍵、靜電引力、范德華力斥力：電子云產生的排斥力抗原抗體反應可分為兩個 階段抗原抗體特異性結合階段可見反應階段抗原抗體的 分子比例 與抗原抗體結合是否呈現(xiàn)可見的反應現(xiàn)象密切相關 抗體過剩區(qū) 抗原過剩區(qū)等價區(qū)沉 淀反 應（ Precipitation)血清、蛋白質、細胞裂解液或組織浸液等可溶 性抗原與相應抗體在電解質存在的條件下結合出現(xiàn)沉淀物，這一類反應稱為沉淀反應。大多沉淀 反應是用半固體瓊脂凝膠為介質，進行瓊脂擴散故也稱免疫擴散。凝集反應(Agglutination)細菌、紅細胞等顆粒性抗原或吸附于顆粒上的可溶性抗原（或抗體）中加入相應抗體（或抗原），在電解質存在的條件下形成凝集物的現(xiàn)象，稱為凝集反應 。免疫標記技術用熒光素、同位素或酶等示蹤物質標記抗體（或抗原）進行抗原 抗體反應。標記物質與抗體（或抗原）的化學連接未改變抗體（或抗原）的免疫學特性，同時標記物的性質依然存在，因而極大的提高了反應的靈敏度，可以對微量物質進行定性、定量或定位檢測?？乖贵w反應 淋巴細胞的檢測技術 ? 淋巴細胞的分離 ? 淋巴細胞的功能測定技術 淋巴細胞的分離一、 外周血單個核細胞的分離淋巴細胞分離液密度梯度離心法二、 淋巴細胞亞群的分離及鑒定 淋巴細胞分離液密度梯度離心法分離液（聚蔗糖與泛影葡胺）比重為 92單個核細胞比重為 ．將離心管置水平式離心機內，在 18～20 ℃ 下，以 2022 r/min離心 30 min， 離心后，管內分層如下圖所示 ．將離心管置水平式離心機內，在 ～℃ 下，以 離心 ， 離心后，管內分層如下圖所示E花環(huán)分離法（純化 （純化 T細胞）細胞）T細胞表面的細胞表面的 CD2分子－綿羊紅細胞受體（分子－綿羊紅細胞受體（ E受體）受體）免疫磁珠分離術1. 直接法：抗細胞表面分子抗體 +磁性微球免疫磁珠細胞懸液強磁場與免疫磁珠結合的細胞2. 間接法：第二抗體磁性微粒 第一抗體 細胞磁場磁場 特定細胞特定細胞流式細胞術（Flow Cytmer，F(xiàn)M）將免疫熒光技術應用于流式細 將免疫熒光技術
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