哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)(編輯修改稿)
2024-09-11 21:47 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 體進(jìn)入位點(diǎn)等。基于啟動(dòng)子／增強(qiáng)子是表達(dá)載體中最重要的元件，我們這里僅對(duì)它做簡(jiǎn)要介紹。 目前常用的強(qiáng)啟動(dòng)子包括人巨細(xì)胞病毒早期啟動(dòng)子(CMVIE)、人延伸因子 1亞基啟動(dòng)子和 Rous肉瘤長(zhǎng)末端重復(fù)序列； Invitrogen公司開發(fā)的pcDNA、 pEF和 pRL三種系列載體即分別是以這三種啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)目的基因的表達(dá)。 常用的增強(qiáng)子有 Rous肉癯病毒基因長(zhǎng)末端重復(fù)序列和人巨細(xì)胞病毒增強(qiáng)子。 構(gòu)建雜合的啟動(dòng)子是獲得新啟動(dòng)子的一個(gè)重要途徑。 2 宿主細(xì)胞 哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)外源蛋白最初是將抗體基因重新導(dǎo)人淋巴細(xì)胞中由病毒 (如 SV40)或 lgG的啟動(dòng)子增強(qiáng)子引導(dǎo)。產(chǎn)生的抗體具有相應(yīng)的結(jié)合能力和數(shù)應(yīng)功能，但表達(dá)量很低。 常用的非淋巴細(xì)胞類有中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢 (CHO)細(xì)胞、小倉(cāng)鼠腎 (BHK)細(xì)胞、 COS細(xì)胞、小鼠 NSO胸腺瘤細(xì)胞和小鼠骨髓瘤 SP2/0細(xì)胞等。不同宿主細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白其穩(wěn)定性和蛋白糖基化類型不同，需根據(jù)要表達(dá)的目的蛋白選擇最佳的宿主細(xì)胞。 COS細(xì)胞是進(jìn)行外源基因瞬時(shí)表達(dá)時(shí)用途最廣的宿主，其重組載件易于組建，便于使用，而且對(duì)插入DNA的量或者采用基因組 DNA 序列的情況都沒有什么限制，便于通過(guò)檢測(cè)表達(dá)情況來(lái)確證 cDNA的陽(yáng)性克隆，也利于快速分析引入克隆化 cDNA序列中的突變。 CHO細(xì)胞則利于外源基目的穩(wěn)定整合，易于大規(guī)模培養(yǎng)，能在無(wú)血清和蛋白的條件下生 比，是用于真核生物基因表達(dá)軟為成功的宿主細(xì)胞。已用于多種復(fù)雜的重組蛋白的生產(chǎn)，但其產(chǎn)量較低，一般僅占細(xì)胞蛋白的 %，而用細(xì)菌表達(dá)可獲得占總蛋白 50%的蛋白表達(dá)水平 . 3 表達(dá)系統(tǒng) 根據(jù)目的蛋白表達(dá)的時(shí)空差異，可將表達(dá)系統(tǒng)分為瞬時(shí)、穩(wěn)定和誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)。 瞬時(shí)表
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