第四、五講細菌典型生理生化鑒定技術(shù)(編輯修改稿)
2024-09-11 20:38 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 類蛋白水解酶），能將明膠先水解為多肽，又進一步將多肽水解為氨基酸，明膠失去凝膠性質(zhì)，使培養(yǎng)基由固態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)。試驗方法 挑取培養(yǎng) 18~24h的待試菌，以較大量穿刺接種于明膠高層約 2/3深度。于 20~22℃ 培養(yǎng)7~14天。明膠高層亦可培養(yǎng)于 36177。1℃ 。另取一支未接種的培養(yǎng)基一同培養(yǎng)作對照，每天取出兩支試管，放入冰箱放置 20~30min后，再觀察結(jié)果。結(jié)果觀察與記錄? 明膠液化，為陽性， +。? 明膠凝固，為陰性， 。四、 有機酸鹽和銨鹽的利用試驗220。檸檬酸鹽利用試驗220。丙二酸鹽利用試驗（一） 枸櫞酸鹽利用試驗原理： 某些細菌能利用檸檬酸鹽作為唯一碳源，分解枸櫞 (檸檬 )酸鹽生成碳酸鹽；同時分解培養(yǎng)基的銨鹽生成氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使指示劑溴麝香草酚藍由淡綠轉(zhuǎn)為深藍色，為陽性。試驗方法 挑取待檢菌，在西蒙檸檬酸鹽培養(yǎng)基斜面上密集劃線接種，在 36177。1 ℃ 培養(yǎng) 1~4天，每天觀察結(jié)果。結(jié)果觀察與記錄? 斜面有菌苔生長，培養(yǎng)基斜面變?yōu)樗{色或深藍色，為陽性，記 +；? 無菌苔生長，培養(yǎng)基斜面仍為綠色者，為陰性，記 檸檬酸鹽試驗原理及斜面照片 陽性 +（二） 丙二酸鹽利用試驗 : 某些細菌可以利用培養(yǎng)基中的丙二酸鹽作為唯一碳源 ,丙二酸鹽被分解成碳酸鈉 ,使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性 ,培養(yǎng)基由草綠色變成藍色，為陽性，以此鑒別細菌。試驗方法 取待檢菌新鮮純培養(yǎng)物，接種于丙二酸鈉培養(yǎng)基上，于 36177。1 ℃ 培養(yǎng)48h，觀察結(jié)果。結(jié)果觀察與記錄? 培養(yǎng)基由草綠色變成藍色 ,為陽性 ,記 +。? 培養(yǎng)基無顏色變化 ,為陰性 ,記 五、 呼吸酶類試驗F氧化酶試驗F過氧化氫酶試驗F硝酸鹽還原試驗F氰化鉀試驗（一） 氧化酶試驗 : 氧化酶使細胞色素 C氧化后，氧化型細胞色素 C再使鹽酸二甲基對苯二胺氧化，使生成玫瑰紅色到暗紫色的醌類化合物 ,再和 α萘酚結(jié)合 ,生成吲哚酚藍 ,呈藍色反應(yīng)，為陽性。試劑? 1% α萘酚 乙醇液? 1%鹽酸二甲基對苯二胺試驗方法? 用滴管直接滴加 1% 鹽酸二甲基對苯二胺試劑 1~2滴在培養(yǎng)物上 ,再加入 1% α 萘酚 乙醇液 1~2滴 , 在 30秒內(nèi)判定試驗結(jié)果。結(jié)果觀察與記錄? 在 30秒內(nèi)呈藍色反應(yīng) ,為陽性 ,記 +? 不變色或為紅色者 ,為陰性 ,記 成藍色為 + 不變色或為紅色為 （二） 過氧化氫酶試驗原理： 某些細菌可分泌過氧化氫酶，加入過氧化氫后，可將過氧化氫分解生成水和氧氣，產(chǎn)生氣泡，即為陽性反應(yīng)。試驗方法? 挑取固體培養(yǎng)基上的新鮮菌落一環(huán)，置于潔凈玻片上（或試管），滴加 3% 過氧化氫液數(shù)滴，或在瓊脂斜面培養(yǎng)物上直接滴加過氧化氫液，立即觀察結(jié)果。結(jié)果觀察與記錄? 產(chǎn)生氣泡者，為陽性，記 +? 不產(chǎn)生氣泡者，為陰性，記 （三）硝酸鹽還原試驗原理：某些細菌具有還原硝酸鹽的能力，可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，在酸性條件下，亞硝酸鹽可生成亞硝酸，亞硝酸與對氨基苯磺酸作用，生成重氮苯磺酸，重氮苯磺酸再與 α萘胺作用，生成紅色的化合物，呈紅色反應(yīng)，為陽性反應(yīng)。試劑? A、對氨基苯磺酸試劑? B、 α萘胺試劑試驗方法? 取待檢菌新鮮純培養(yǎng)物，在硝酸鹽培養(yǎng)基上接種，在 36177。1 ℃ 培養(yǎng) 1~4天，每天取2mL培養(yǎng)液 ,加入 A、 B試劑的等量混合物各二滴混勻，立即觀察結(jié)果。結(jié)果觀察與記錄?呈現(xiàn)紅色，為陽性，記 +?若無紅色出現(xiàn)，為陰性，記 （四） 氰化鉀試驗： 氰化鉀是細菌呼吸酶系統(tǒng)的抑制劑 ,可與呼吸酶作用使酶失去活性 ,抑制細菌的生長 ,但有的細菌在一定濃度的氰化鉀存在時仍能生長 ,以此鑒別細菌 .試驗方法? 取培養(yǎng) 20～ 24h的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液或菌落 1環(huán)，接種至對照培養(yǎng)基及氰化鉀培養(yǎng)基內(nèi)，立即以橡膠塞塞緊， 36177。1 ℃ 培養(yǎng) 24～ 48h，觀察結(jié)果。結(jié)果觀察與記錄? 對照管有菌生長，試驗管有菌生長為陽性，記 +。? 對照管有菌生長，試驗管無菌生長為陰性。記 。 六、毒性酶類試驗F溶血試驗F鏈激酶試驗F卵磷脂酶試驗F血漿凝固酶試驗（一） 溶血試驗原理： 某些細菌在代謝過程中能產(chǎn)生溶血素，可使人或動物的紅細胞發(fā)生溶解，不同的細菌有不同的溶血反應(yīng)，借此可鑒別細菌。試驗方法?平板法?試管法平板法 將培養(yǎng)物接種于血平板培養(yǎng)基上，36177。1 ℃ 培養(yǎng) 24～ 48h，觀察結(jié)果。溶血試驗的溶血類型及現(xiàn)象（ 1） α（甲型）溶血 : 菌落周圍出現(xiàn)較窄的半透明的草綠色溶血環(huán)。（ 2） β （乙型）溶血 : 菌落周圍出現(xiàn)較寬的透明溶血環(huán)。（ 3） γ（ 丙型）溶血 : 菌落周圍無溶血環(huán)。甲型（ α）溶血 乙型（ β）溶血丙型（ γ）溶血試管法 將待檢菌培養(yǎng)液與等量的 2% 羊血球混合，在 36177。1 ℃ 培養(yǎng) 16～ 18h，觀察結(jié)果。如溶血，培養(yǎng)液可出現(xiàn)透明狀。結(jié)果觀察與記錄? 有溶血現(xiàn)象，為陽性，記 +；? 無溶血現(xiàn)象，為陰性，記 （二） 鏈激酶試驗原理： A群鏈球菌群能產(chǎn)生鏈激酶，該酶能使血液中的纖維蛋白酶原變成纖維蛋白
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