【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 行應(yīng)來了銀杏葉開發(fā)的第二個(gè)高峰期，有專家預(yù)測(cè)說銀杏葉產(chǎn)品的開發(fā)的將持續(xù)走熱，將推動(dòng)中國(guó)人對(duì)銀杏系列產(chǎn)品的高度消費(fèi)觀念的進(jìn)一步提高，帶動(dòng)中國(guó)銀杏產(chǎn)業(yè)的更大發(fā)展。本產(chǎn)品銀杏葉凍干粉產(chǎn)品將填補(bǔ)世界空白，正常投產(chǎn)后將實(shí)現(xiàn)年銷售收入10億元。三、項(xiàng)目研究工作概況（一）功能主治及命名依據(jù)本品具活血化瘀通經(jīng)活絡(luò)之功效，用于缺血性腦中風(fēng)。中醫(yī)辯證屬中經(jīng)絡(luò)氣虛血瘀證，癥見半身不遂，口知歪斜，言語(yǔ)匯謇澀或不語(yǔ)，感覺減或消失，面色恍白，氣短乏力，口流涎，自汗出，心悸便溏，手足腫脹，舌質(zhì)暗淡，舌苔薄白或白膩，脈沉細(xì)、細(xì)緩或細(xì)弦者。本品由銀杏葉一味藥制成，劑型為凍干粉劑。根據(jù)新藥審批辦法《有關(guān)中藥新藥部分的修訂和補(bǔ)充規(guī)定命名原則》中主要藥物加劑型的方法，命名為注射用銀杏葉凍干粉。（二）處方來源，選題目的、選題依據(jù)注射用銀杏葉凍干粉的處方為科研方。銀杏在我國(guó)有漫長(zhǎng)的藥用、食用史，素有活化石之稱。據(jù)《食療本草》記載，其可用于心悸怔中，肺虛咳喘等癥。特別是近十年來，國(guó)內(nèi)外對(duì)銀杏葉提取物（GEB）進(jìn)行了較深入的研究。鑒于西藥在治療中風(fēng)病時(shí)尚不能避免嚴(yán)懲的副作用，故我公司科研人員把傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)理論與現(xiàn)代藥理研究成果相結(jié)合，運(yùn)用現(xiàn)代制藥工藝技術(shù)研制而成具有臨床療效確切、使用安全，起效迅速的中藥二類新藥——注射用銀杏葉凍干粉。中風(fēng)又名卒中。本病起病急驟，證見多端，變化迅速，與風(fēng)性善行數(shù)變的特征相似，故以中風(fēng)名之。是以卒然昏仆，不省人事，伴口眼歪斜，半身不遂，語(yǔ)言不利，或不經(jīng)錯(cuò)仆而僅以 僻不遂為主的一種疾病。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為：其發(fā)生的主要因素在于患者平素氣血虧虛，與心、肝、腎三臟陰陽(yáng)失調(diào)，加之憂思惱怒，或飲酒飽食，或外邪侵襲等誘因，以致氣血運(yùn)行受阻，肌膚筋脈失于濡養(yǎng)：或陰虧于下，肝陽(yáng)暴張，陽(yáng)化風(fēng)動(dòng)，血隨氣逆，挾痰挾火，橫竄經(jīng)隧，蒙蔽清竅，而形成上實(shí)下虛，陰陽(yáng)互不維系的危急證候。西醫(yī)學(xué)認(rèn)為腦卒中是指“發(fā)展迅速，具有血管源性腦功能局灶性障礙，并且持續(xù)時(shí)間超過24小時(shí)或引起死亡的臨床癥候群”。因?yàn)樗褐杆心X血管病的突然發(fā)作，故又稱：“腦血管意外”。將腦血管病分為蛛網(wǎng)膜下腔出血，腦出血、腦梗塞、腦血管痙攣等。引起腦座中的危險(xiǎn)因素主要有高血壓、心臟病、糖尿病、高脂血癥，血液高粘滯綜合癥等疾病。因此中風(fēng)病是中老年人最常見的疾病之一，具有發(fā)病率高，致死率高，致殘率高的特點(diǎn)。我國(guó)近年統(tǒng)計(jì)表明腦卒中發(fā)病率為120～180/10萬(wàn)人，患病人數(shù)約500～600萬(wàn)人。每年死于腦卒中者約100萬(wàn)人，幸存者約3/4不同程度喪失勞動(dòng)能力，重度致殘者占40%以上，每年新發(fā)病約130～150萬(wàn)人，其中60萬(wàn)以上的病例為腦梗塞患者。因此，如何提高腦血管病在恢復(fù)期的治愈率，改善患者的生存質(zhì)量，已成為國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究的重要課題。西醫(yī)學(xué)治療缺血性腦卒中的方法主要有以下：增加腦血流量，包括顱內(nèi)外動(dòng)脈旁路搭橋術(shù)，能使座中的死亡率和再發(fā)率減少20%；由于缺血性腦卒中80%以上是由血栓或栓塞造成的，因此，鏈激酶和尿激酶等溶栓劑常作為腦栓塞的常規(guī)治療，能改善病人的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀促進(jìn)神經(jīng)功能擴(kuò)張半球周圍的正常血管床，但往往不能增加缺血區(qū)血的流量；抗血小板和抗凝治療經(jīng)證明是有臨床療效的方法，抗血小板藥物臨床主要有ASP、潘生丁、噻氯吡啶等，此類藥物可顯著降低腦卒中的復(fù)發(fā)率。甘露醇、速尿、腎上腺糖皮質(zhì)激素是腦卒中胖子水療法的主要措施之一，迅速使用脫水劑能減輕癥狀或拯救生命。鈣離子拮抗劑，阿片受體拮抗劑，血小板激活因子拮抗劑對(duì)缺血性腦傷有保護(hù)治療作用。上述治療對(duì)于急性期挽救病人的生命起到了積極的作用。但西醫(yī)往往重治療，輕康復(fù)，忽略了病人恢復(fù)期功能的治療，且從西醫(yī)角度來看，目前對(duì)恢復(fù)期尚無積極有效的治療方法，中醫(yī)治療本病強(qiáng)調(diào)標(biāo)本兼治，結(jié)合中醫(yī)的針炙、推拿、藥浴等方法，對(duì)于降低腦卒中后的致死率，致殘率、復(fù)發(fā)率起到了顯著作用。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為中風(fēng)恢復(fù)期的基礎(chǔ)為本虛標(biāo)實(shí)，本虛主要為氣虛，陰虛，兼夾標(biāo)實(shí)主要為血瘀。本虛者，因年老體虛，腎精虧虛，而“肝腎同源”，故腎精虧虛可致肝血不足，肝腎陰虛，陰虛無以制陽(yáng)，則風(fēng)陽(yáng)亢張，上擾清竊，或操持過度，形神失養(yǎng)，致陰血暗耗，虛陽(yáng)化風(fēng)，擾動(dòng)為患；或房室不節(jié)，縱欲傷精，致水虧于下，火旺于上，發(fā)為本病。瘀血者多因正氣虛衰，氣虛運(yùn)血無力，血腦瘀滯；或暴怒傷肝，肝陽(yáng)暴亢，血隨氣逆，上壅清竊，瘀結(jié)于腦脈；或肝氣郁結(jié)，氣滯血瘀，發(fā)為本病，因此治療上強(qiáng)調(diào)標(biāo)本兼治，祛邪與扶正并舉。再結(jié)合中醫(yī)的針灸、推拿、藥浴等方法，更與西醫(yī)相配合，從整體上調(diào)調(diào)機(jī)體的失衡狀態(tài)，可改善大腦局部的神經(jīng)及血管功能，對(duì)于降低腦卒中后的致死率、致殘率、復(fù)發(fā)率起到了顯著的作用。目前，用于治療腦卒中恢復(fù)期的中草藥近百種，現(xiàn)代藥學(xué)研究和臨床研究均證實(shí)對(duì)該病有確切的療效，且新藥不斷出現(xiàn)，但是隨著我國(guó)人口老齡化問題的日趨嚴(yán)重，腦中風(fēng)病人急劇上升，治療腦中風(fēng)恢復(fù)期的藥物遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足病人的需求。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明銀杏葉中含有黃酮類化合物，萜類化合物等生物活性成份，這些成份具有相當(dāng)強(qiáng)烈的抗氧化作用，能清除生物體內(nèi)過剩的自由基，阻止體內(nèi)脂質(zhì)過氧化，提高機(jī)體的免疫力等。其黃酮類成份，能擴(kuò)冠；改善心、腦血液循環(huán)，降低血清膽固醇，還有高層這敏，抗休克、抗器官移植排斥反應(yīng)等作用，是首選的治療心腦血管疾病的天然藥物。因此，開發(fā)和利用銀杏葉治療心、腦血管疾病有著廣闊的前景。（三）制備工藝及其研究資料制備工藝工藝研究 用正交試驗(yàn)法確定最佳提取工藝。（四）與質(zhì)量有前的理化性質(zhì)研究資料及文獻(xiàn)資料銀杏葉為現(xiàn)行版藥典收載藥材，有據(jù)可查。（五）臨床試驗(yàn)用藥品的原料（藥材）和成品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案及臣草說明我們對(duì)該藥組方擬定了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案及起草說明。鑒別 對(duì)本品銀杏葉采用薄層色譜法鑒別，斑點(diǎn)清晰，故列入標(biāo)準(zhǔn)中。含量測(cè)定 、。并經(jīng)中試，連續(xù)生產(chǎn)三批產(chǎn)品質(zhì)量基本穩(wěn)定，初步制定了臨床試驗(yàn)用藥品的原料（藥材）和成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案及起草說明。（六）臨床試驗(yàn)用藥品的初步穩(wěn)定性試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料經(jīng)過三個(gè)月的正常室溫下放置考核，本品在臨床研究用藥品包裝，在常溫下質(zhì)量是穩(wěn)定的，直接與藥物接觸的包裝材料對(duì)藥品的質(zhì)量穩(wěn)定性無影響。（七）臨床試驗(yàn)用樣品及其質(zhì)量檢驗(yàn)和衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)報(bào)告書（樣品數(shù)量至少應(yīng)為全檢需要量的3倍）產(chǎn)品質(zhì)量與衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)符合標(biāo)準(zhǔn)。（八）與功能主治有關(guān)的主要藥效學(xué)試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料銀杏葉凍干粉iv 、改善其神經(jīng)行為。腦組織勻漿生化指標(biāo)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)該藥能顯著降低腦組織中MDA含量，升高SOD含量。腦組織病理切片顯示該藥對(duì)神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用明顯。表明該藥對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性局灶性腦缺血有顯著的保護(hù)作用。銀杏葉凍干粉iv能明顯縮短實(shí)驗(yàn)性彌散性全腦缺血大鼠的翻正反射恢復(fù)時(shí)間，還能顯著降低腦缺血再灌注后腦組織中伊文思藍(lán)的含量。即降低腦血管通透性，表明該藥對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性彌散性全腦缺血有保護(hù)作用。銀杏葉凍干粉iv能明顯增加小鼠急性不完全性腦缺血后2h內(nèi)的存活數(shù)，表明該藥對(duì)小鼠急性不完全性腦缺血有保護(hù)作用，（95%—）。Iv后10min即開始起效，達(dá)峰時(shí)間20min左右，持續(xù)時(shí)間可達(dá)120min以上。同一劑量組iv的效應(yīng)強(qiáng)于ig。還能明顯延長(zhǎng)小鼠在缺氧狀態(tài)下的存活時(shí)間，表明該能提高小鼠耐缺氧的能力。銀杏圳凍干粉iv給藥對(duì)麻醉犬的腦血浪量，腦血管阻力，血壓，心率和心電均無明顯影響。銀杏葉凍干粉對(duì)PAF誘導(dǎo)家兔體外血小板聚集有明顯抑制作用。對(duì)ADP誘導(dǎo)家兔體外血小板聚集抑制作用較弱。該藥iv和PAF誘導(dǎo)兔體內(nèi)血小板聚集也有明顯抑制作用；該藥對(duì)血小板無明顯影響。Iv時(shí)可降低兔紅細(xì)胞壓積和全血粘度，尤其是對(duì)高切變速率的全血粘度改善作用更明顯，高劑量組對(duì)低、高切變速率時(shí)全血粘度均可有改善作用。Iv可明顯抑制大鼠和家兔動(dòng)——靜脈旁路血栓形成。Iv可明顯延長(zhǎng)小鼠凝血時(shí)間。（九）一般藥理研究的試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料家犬麻醉（）狀態(tài)下，靜脈滴注銀杏葉凍干粉大、中、小三個(gè)劑量（、），總體積10ml/kg，對(duì)給藥160、90、120分鐘測(cè)定的血壓（SBP、DBP、BP）、呼吸頻率、振幅、體溫、心率、心電圖（P、QRS、ST、T波間期、振幅）參數(shù)，均無明顯變化。銀杏葉凍干粉大、中、小三個(gè)劑量組（、），藥后30分鐘，對(duì)小鼠腹腔注射45mg/kg戊巴比妥鈉，動(dòng)物的睡眠時(shí)間與生理鹽水對(duì)照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p）；對(duì)小鼠腹腔注射25mg/kg戊巴比妥納動(dòng)物入睡個(gè)數(shù)大劑量組與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p）；對(duì)小鼠10分鐘內(nèi)自發(fā)活動(dòng)次數(shù)，大、中劑量組與對(duì)照組比較p。綜上所述：銀杏葉凍干粉上述劑量對(duì)犬血壓、呼吸、體溫、心電圖無影響；高劑量與戊巴比妥鈉有協(xié)同作用，能增加小鼠入睡個(gè)數(shù)；對(duì)小鼠自主活動(dòng)有一定抑制作用。（十）動(dòng)物急性毒性試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料銀杏葉凍干粉小鼠靜脈注射的，最大給藥量小鼠死亡率為30%，iv急性毒性試驗(yàn)無法測(cè)出LD50，相當(dāng)于的臨床用藥的128倍（臨床擬用量為10g生藥/60kg/日，）。銀杏葉凍干粉小鼠腹腔注射最大給藥量小鼠死亡率為15%，ip給藥無法LD50,，相當(dāng)于臨床擬量的320倍。（十一）動(dòng)物長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料大白鼠長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)取SpragueDawley大鼠80只，試驗(yàn)分高（600mg提取物/kg）\k (190mg提取物/kg)、低（60mg提取物/kg）劑量組及5%葡萄糖注射液對(duì)照組，每組動(dòng)物20只，雌雄各半。腹腔注射，每天一次，每周給藥6天，試驗(yàn)周期為13周。各試驗(yàn)組留1/2動(dòng)物以觀察4周恢復(fù)期變化。結(jié)果表明，大鼠的行為活動(dòng)、皮毛色澤及糞便均屬正常。攝食量未發(fā)現(xiàn)明顯的與藥物作用的有關(guān)的異常變化。高、中、低劑量組動(dòng)物的體重增長(zhǎng)與對(duì)照組相比無顯著差異。主要的臟器生量及其九與對(duì)照組比較未見顯著性差異。血液學(xué)和血液生化學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，高、中、低劑量組大鼠血液所檢測(cè)的各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較未見明顯由于藥物所所的異常變化。病理切片結(jié)果顯示，個(gè)別主要臟器均有不同程度輕度改變，通過Ridit分析，非藥物本身所引起的病理改變，肺臟的改變可能系病毒或細(xì)菌感染所致，在臨床試驗(yàn)中應(yīng)注意肝臟指標(biāo)的變化。據(jù)此推測(cè)，高中低劑量邊疆腹腔注射給予該藥13周，大志未表現(xiàn)出明顯的毒性反就。在本試驗(yàn)條件下，諞藥ip給藥13周，對(duì)大鼠的無毒劑量為600mg提取物/kg。若人以60kg計(jì)，銀杏注射液對(duì)大鼠的無毒劑量（600mg提取物/kg）約相當(dāng)于人用劑量的120倍（人用劑量為300mg提取物/天/60kg人）。 狗長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn) 本試驗(yàn)觀察該藥邊疆靜脈注射（iv）給藥13周Beagle犬所發(fā)生的各種反應(yīng)，以評(píng)估該藥的安全性。Beagle犬24只，試驗(yàn)分藥物高（300mg提取物/kg）、中（95mg提取物/kg）、低（30mg提取物/kg）組及空白對(duì)照組（5%葡萄糖注射液）。每組動(dòng)物6只，雌雄各半。靜脈注射，每日一次，每周6次，試驗(yàn)周期為13周。各試驗(yàn)組準(zhǔn)備2只動(dòng)物觀察4周恢復(fù)期變化。結(jié)果表明，靜脈注射該藥13周后對(duì)犬的血常規(guī)、血清生化、尿常規(guī)和攝食量等均未發(fā)現(xiàn)明顯的與藥物作用有關(guān)的異常變化。動(dòng)物的活動(dòng)狀況在給藥后一切正常。與對(duì)照組相比，各給藥組的犬體重及體重增長(zhǎng)正常且在同周內(nèi)無顯著差異。犬心電圖各項(xiàng)指標(biāo)正常。組織切片檢查表明，在所有受檢臟器中均未見明顯的病理改變。犬心電圖各項(xiàng)指標(biāo)正常。組織切片檢查表明，在所有受檢臟器中均未見明顯的病理改變。在本試驗(yàn)條件下，銀杏葉凍干粉iv給藥13周對(duì)犬的無毒劑量為300mg提取物/kg，約相當(dāng)于人用劑量的60倍（人用劑量為300mg提取物/天/60kg人）。（十二）處方組成及功能主治。用中醫(yī)藥理論闡述適應(yīng)病癥的病因、病機(jī)、治法與方解略（十三）臨床試驗(yàn)的設(shè)計(jì)方案及供臨床醫(yī)師參閱的藥理、毒理研究結(jié)論綜述。由我公司臨床藥理專家設(shè)計(jì)完成。（十四）補(bǔ)充資料——安全性試驗(yàn)注射用銀杏葉凍干粉對(duì)Beagle犬肢靜脈血無溶血及紅細(xì)胞凝集，對(duì)健康豚鼠和Beagle犬無過敏反應(yīng)，對(duì)家兔肌肉注射未見注射部位肌肉組織有異常改變。對(duì)家兔耳靜脈滴注無明顯血管刺激反應(yīng)，對(duì)家兔無致熱原反應(yīng)。經(jīng)以上試驗(yàn)，結(jié)果表明該制劑是安全的。四、藥材指紋圖譜（一）銀杏葉藥材HPLC指導(dǎo)紋圖譜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)名稱、漢語(yǔ)拼音【名 稱】銀杏葉【漢語(yǔ)拼音】Yinxingye來源【基 源】本品為銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba 。【產(chǎn) 地】江蘇泰州。【采 收 期】910月。【產(chǎn)地加工】秋季葉尚綠時(shí)采收，及時(shí)干燥。供試品溶液的的制備（略）對(duì)照品溶液的制備（略）測(cè)定方法（略）照高效液相色譜法（《中國(guó)藥典》）2000年版一部附錄（Ⅵ D）測(cè)定。色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（略）測(cè)定法（略）指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)（1）指紋圖譜（略）（2）共有指紋峰的標(biāo)定：（略）（3）共有指紋峰面積的比值；（略）（4）非共有峰面積；（略）（2）銀杏葉藥材HPLC指紋圖譜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)起草說明名稱、漢語(yǔ)拼音（略）來源；（略）供試品溶液的制備；（略）對(duì)照品溶液的制備；（略）測(cè)定方法；（略）照高效液相色譜法（《中國(guó)藥典》）2000年版一部附錄（Ⅵ D）測(cè)定。儀器和試劑Waters 600E泵；Waters 996PAD檢測(cè)器；Millennium32工作站；717自動(dòng)進(jìn)樣器。色譜條件：（略）測(cè)定方法的選擇；（略）流動(dòng)相的確定；（略）檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇：（略）穩(wěn)定性試驗(yàn) 取批次為3的樣品。按供試品溶液制備方法制備供試品，分別在0，1，22，24，30小時(shí)檢測(cè)指紋圖，結(jié)果見表1，2。結(jié)果表明各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和峰面積的比值基本沒有明顯的變化，符合指紋圖的要求。精密度試驗(yàn) 取批次為3的樣品，按供試品溶液制備方法制備供試品，邊疆進(jìn)樣5次，檢測(cè)指紋圖，結(jié)果見表3，4。結(jié)果表明各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和單峰面積大于或等于10%總峰面積的色譜峰面積的比值基本一致，符合指紋圖的要求。重現(xiàn)性試驗(yàn) 取批次為3的樣品5份，按供試品溶液制備方法制備供試品，檢測(cè)指紋圖，結(jié)果見表5，6。結(jié)果表明各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和單峰面積大于或等于10%總峰面積的鈀譜峰面積的比值基本一致，符合指紋圖的要求。五、臨床方案——以血塞能注射液為對(duì)照藥評(píng)價(jià)銀杏葉凍干粉，治療缺血性腦中風(fēng)恢復(fù)期（瘀血阻絡(luò)型中風(fēng)中經(jīng)絡(luò)）的有效性和安全性的分層隨機(jī)、多中心臨床研究。（一）試驗(yàn)背景資料并根據(jù)《新藥審批原則》、《中藥