【文章內(nèi)容簡介】 株在23S rRNA基因發(fā)生了A2063G（大腸桿菌應為2058位）點突變，對十四元環(huán)內(nèi)酯類（紅霉素和竹桃霉素）表現(xiàn)高水平耐藥而對十六元環(huán)不明顯；5株發(fā)生了A2064G（大腸桿菌應為2059位）點突變，對十四元環(huán)內(nèi)酯類和十六元環(huán)均表現(xiàn)出高水平耐藥；3株發(fā)生了A2064C點突變，耐藥表型與A2064G點突變株相似。有趣的是，1株對紅霉素、羅紅霉素和克拉霉素低水平耐藥的肺炎支原體不存在2063位和2064位點突變，可能存在其它耐藥機制。Okazaki等（51）還從克林霉素和克拉霉素治療無效的肺炎病人分離出1株肺炎支原體，克隆測序23S rRNA基因發(fā)現(xiàn)其存在A2063G點突變。Matsuoka等（52）檢測了日本2000 2003年臨床分離的13株大環(huán)內(nèi)酯耐藥肺炎支原體（12株高水平耐藥M，1株低水平耐藥）23S rRNA V域和 II 域，以及核蛋白L4 和 L22編碼基因的耐藥突變，結果10株在2063位發(fā)生了A→G 替換突變（對應大腸桿菌2058位），1株發(fā)生了A→C突變；1株在2064位（對應大腸桿菌2059位）發(fā)生了A→G替換突變；低水平耐藥株在2617 位（對應大腸桿菌2611位）發(fā)生了C→G 顛換；23S rRNA II 域，以及核蛋白L4 和 L22編碼基因核苷酸中未發(fā)生突變。說明肺炎支原體臨床株大環(huán)內(nèi)酯耐藥主要由23S rRNA 中的2063位或 2064位點突變造成。Furneri等（53）在體外用交沙霉素誘導人型支原體PG21株的耐藥性，并研究其耐藥分子機理。獲得PG21/JR 和PG21/JR2兩個突變子，對十六元內(nèi)酯類藥物（交沙霉素和Miocamycin）耐藥，但林可胺類藥物（克林霉素和林可霉素）敏感。23S rRNA基因克隆測序表明，兩個突變子的2062位（大腸桿菌序號）分別發(fā)生了A2062G和A2062T點突變，推測兩個點突變與菌株的耐藥表型有關。Pereyre等（44）從臨床分離到兩株交沙霉素耐藥人型支原體MHb1和MHb2。MHb1對十六元環(huán)內(nèi)酯類（交沙霉素、螺旋霉素、麥迪霉素、泰樂菌素）、替利霉素、林可胺類藥物（林可霉素和克林霉素）均高水平耐藥， MHb2對十六元環(huán)內(nèi)酯類和替利霉素高水平耐藥而對林可胺類藥物僅中度耐藥，兩菌株對奎奴普丁達福普丁和原始霉素仍敏感?？寺y定各菌株兩個rRNA操縱子（rrnA和rrnB）上23S rRNA V域的核苷酸序列，發(fā)現(xiàn)MHb1一個操縱子（rrnB）發(fā)生了A2059G和C2611U（大腸桿菌序號）替換突變，而DNA MHb2相同操縱子（rrnB）僅發(fā)生了A2059G替換突變；兩臨床菌株與PG21模式株的23S rRNA II域35發(fā)夾（hairpin 35）的核苷酸序列相同；檢測核蛋白L4和L22編碼基因核苷酸序列，同樣與PG21模式株一致。推測兩株臨床分離的人型支原體雖然僅一個操縱子等位基因發(fā)生突變，但雜合型等位基因也足以帶來菌株的大環(huán)內(nèi)酯類耐藥表型，其中23S rRNA V域A2059G替換突變可造成菌株的十六元環(huán)內(nèi)酯類藥物耐藥表型，而C2611U突變可能與菌株的林可胺類耐藥性顯著提高有關。紅霉素、螺旋霉素、泰樂菌素等大環(huán)內(nèi)酯類藥物廣泛用于防治畜禽支原體感染引起耐藥性不斷上升，但對動物源支原體大環(huán)內(nèi)酯類耐藥性的研究仍十分有限，現(xiàn)有文獻多集中于耐藥性調查及體外耐藥性誘導方面。Kiser 等（54）最早開展大環(huán)內(nèi)酯類抗生素體外誘導雞毒支原體耐藥性研究，發(fā)現(xiàn)雞毒支原體極易對紅霉素產(chǎn)生耐藥性。Zanella等（55）在體外誘導雞毒支原體對紅霉素、螺旋霉素、泰樂菌素等大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的耐藥性。結果不同藥物之間的誘導耐藥性的難易程度存在較大差異。紅霉素和螺旋霉素耐藥性只需58代誘導即可出現(xiàn)；而泰樂菌素耐藥性則需911代誘導才出現(xiàn)。誘導耐藥株對多種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素存在不完全交叉耐藥性，泰樂菌素誘導耐藥株對紅霉素、螺旋霉素交叉耐藥，而紅霉素及螺旋霉素誘導耐藥株對泰樂菌素僅敏感性有所降低，不存在交叉耐藥性。GautierBouchardon等（47）體外誘導雞毒支原體，滑液支原體和衣阿華支原體對紅霉素、泰樂菌素等藥物的耐藥性。結果3種支原體在紅霉素及泰樂菌素作用下經(jīng)26代后即可誘導出高水平耐藥性。交叉耐藥試驗表明，泰樂菌素誘導的耐藥株對紅霉素也產(chǎn)生耐藥，而紅霉素誘導耐藥株卻不一定耐受泰樂菌素。衣阿華支原體比雞毒支原體及滑液支原體更易誘導出大環(huán)內(nèi)酯類耐藥性，提示大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥性的誘導速度快慢受支原體種類及藥物性質的影響。因此等推測衣阿華支原體比雞毒支原體及滑液支原體有更高的突變率。Takahashi等（56）體外誘導雞毒支原體對泰樂菌素的耐藥性，經(jīng)10次傳代誘導獲得的菌株對泰樂菌素的最小抑菌濃度僅比原始菌株提高8倍，與Zanella等和GautierBouchardon等的研究結果存在差異。至今仍缺乏動物源支原體大環(huán)內(nèi)酯類藥物耐藥性分子機制的研究報道。三、 支原體大環(huán)內(nèi)酯類耐藥性尚需深入研究的問題已有研究表明，細菌可通過藥物主動外排、藥物修飾失活、）藥物靶位改變、產(chǎn)生抗性肽等四種途徑對大環(huán)內(nèi)酯類藥物耐藥（57）。綜述可見，23SrRNA和核糖體蛋白突變是支原體對大環(huán)內(nèi)酯類耐藥的主要機制。至今未發(fā)現(xiàn)支原體內(nèi)存在甲基轉移酶編碼基因（43，58）。已獲得了由ABC型外排泵介導人型支原體對大環(huán)內(nèi)酯類耐藥的生理生化證據(jù)，在生殖道支原體、肺炎支原體（59）和豬肺炎支原體（60）內(nèi)還發(fā)現(xiàn)了大量的ABC轉運子及其編碼基因。紅霉素、螺旋霉素、泰樂菌素、吉他霉素等大環(huán)內(nèi)酯類藥物大量廣泛用于防治食品動物支原體感染（如豬氣喘病、雞慢性呼吸道病等）而引起動物源支原體耐藥性，造成藥物療效下降甚至失效，嚴重影響了支原體感染的有效防治，但至今對動物源支原體大環(huán)內(nèi)酯類耐藥性的機制研究仍十分有限。因此，今后應從以幾個方面加強支原體大環(huán)內(nèi)酯類耐藥性研究：1） 加強動物源致病性支原體尤其是豬肺炎支原體和雞毒支原體的大環(huán)內(nèi)酯類耐藥性機制研究。2） 深入開展支原體臨床株的大環(huán)內(nèi)酯類耐藥性研究，獲得支原體臨床株核糖體RNA及核蛋白的耐藥突變位點及突變發(fā)生頻率，確定突變與耐藥表型的關系。3） 進一步研究由ABC型外排泵介導支原體對大環(huán)內(nèi)酯類耐藥的分子機制。4） 建立快速檢測方法監(jiān)控人和動物致病性支原體大環(huán)內(nèi)酯類耐藥性的發(fā)生和發(fā)展。 參考文獻1. Kirst, . Macrolide antibiotics in foodanimal health. Exp. Opin. Invest. Drugs. 1997, 6: 1031172. 鄭忠輝，石和鵬，金潔，劉浚。大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的發(fā)展與展望. 藥物進展. 2005, 29(1): 173. 張桂枝, 羅永煌. 大環(huán)內(nèi)酯類抗生素研究進展. 動物醫(yī)學進展. 2004, 25(3): 33364. 張建民, 第三代大環(huán)內(nèi)酯酮內(nèi)酯類抗生素. 國外醫(yī)藥抗生素分冊. 2000, 21(1): 3, 215. 姜成剛, 佟恒敏, 李艷華. 大環(huán)內(nèi)酯類藥物對鏈球菌耐藥性及耐藥機制. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2005, 3: 55566. 王明貴, 張嬰元. 細菌對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥機制的研究進展. 國外醫(yī)藥抗生素分冊. 2000, 21(1): 13157. 楊慧, 沈敘莊. 肺炎鏈球菌對于大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的耐藥. 國外醫(yī)藥抗生素分冊. 2005, 26(2): 74778. 曾雪峰, 雷秉鈞, 呂曉菊, 范昕建, 馮萍, 俞汝佳. 肺炎鏈球菌對抗菌藥物的耐藥性調查及對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥機制研究. 中國抗感染化療雜志. 2004, 4(3): 150153 9. Ettayebi, M.。 Prasad, .。 Morgan, . Chloramphenicolerythromycin resistance mutations in a 23S rRNA gene of Escherichia coli. J. Bacteriol. 1985, 162: 55155710. Hansen, .。 Mauvais, P.。 Douthwaite, S. The macrolide ketolide antibiotic binding site is formed by structures in domains II and V of 23S ribosomal RNA. Mol. Microbiol. 1999, 31: 623632.11. Moazed, D.。 Noller, . Chloramphenicol, erythromycin, carbomycin and vernamycin B protect overlapping sites in the peptidyl transferase region of 23S ribosomal RNA. Biochimie 1987, 69: 87988412. Vester, B.。 Garrett, . A plasmidcoded and sitedirected mutation in Escherichia coli 23S RNA that confers resistance to erythromycin: implications for the mechanism of action of erythromycin. Biochimie 1987, 69: 89190013. Weisblum, B. Erythromycin resistance by ribosome modification. Antimicrob. Agents Chemother. 1995, 39: 57758514. Xiong, L.。 Shah, S.。 Mauvais, P.。 Mankin, . A ketolide resistance mutation in domain II of 23S rRNA reveals proximity of hairpin 35 to the peptidyl transferase centre. Mol. Microbiol. 1999, 31: 63363915. Ban, N.。 Nissen, P.。 Hansen, J.。 Moore, .。 Steitz, . The plete atomic structure of the large ribosomal subunit at A resolution. Science 2000, 289: 90592016. Hansen, J.。 Ippolito, .。