【文章內容簡介】 /ml）。　　 菌形及純度　　染色鏡檢，應為革蘭氏陰性桿菌。至少觀察10個視野，平均每個視野內不得有10個以上非典型菌（線狀、粗大或染色可穎桿菌），并不應有雜菌?！　?無菌試驗　　按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行?！　?安全試驗　　 毒性試驗　　用體重18～20g之健康小白鼠5只，或用體重350～450g之健康豚鼠2只，觀察7日，應無死亡?！　　　∮皿w重18～20g之健康小白鼠2只，用苯酚作防腐劑的菌苗注射之小白鼠會發(fā)生戰(zhàn)栗癥狀，但不應超過半小時，觀察7日，不得有局部膿腫或死亡。　　4 保存與效期　　應保存于2～8℃。自稀釋之日起效期為1年半。如原液保存超過1年稀釋，應相應縮短效期（自原液采集之日起總效期不得超過2年半）。傷寒菌苗使用說明書　　本品系用傷寒菌培育后，取菌苔制成懸液，加甲醛殺菌，以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋制成。用于預防傷寒?！　”酒窞槿榘咨幕鞈乙海椒臃栏瘎?，不應含有異物或搖不散的凝塊?！　〗臃N對象　　重點用于部隊、港口、鐵路沿線工地的工作人員，下水道、糞便、垃圾處理人員、飲食業(yè)、醫(yī)務防疫人員及水上居民，或有本病流行地區(qū)的人群?！　∮梅ā　?．上臂外側三角肌附著處皮膚經消毒后皮下注射。　　2．初次注射本菌苗者，需注射3次，每次間隔7～10天，注射劑量如下：　　1～6周歲：?！　?周歲以上～14周歲：?！　?4周歲以上：?！　〖訌娮⑸鋭┝颗c第3針相同?！　〗伞　?．發(fā)熱，嚴重高血壓，心、肝、腎臟病及活動性結核?！　?．孕婦，月經及哺乳期?！　?．有過敏反應病史者?！　》磻　【植靠沙霈F紅腫，有時全身有寒熱或頭痛?！　∽⒁馐马棥　?．用前搖勻。瓶內有搖不散的凝塊、異物，或安瓿有裂紋，曾經發(fā)生過凍結者都不能使用?！　?．應備有1∶1000腎上腺素，以供偶有發(fā)生休克時急救之用?！　”４妗　”４嬗?～8℃暗處。吸附百日咳菌苗、白喉、破傷風類毒素混合制劑制造及檢定規(guī)程本品系由百日咳菌苗原液、精制白喉類毒素及精制破傷風類毒素用氫氧化鋁吸附制成。供兒童預防百日咳、白喉及破傷風之用?！　? 抗原要求　　 百日咳菌苗原液應符合附錄1《百日咳菌苗原液制造及檢定要求》?！　?精制白喉類毒素應符合《吸附精制白喉類毒素制造及檢定規(guī)程》中4項的要求?！　?精制破傷風類毒素應符合《吸附精制破傷風類毒素制造及檢定規(guī)程》中4項的要求。　　2 制造　　 配方　　每ml制劑中各種抗原成份含量如下：　　百日咳菌45億～90億　　精制白喉類毒素20Lf　　精制破傷風類毒素5Lf　　 吸附劑配制，見《吸附精制破傷風類毒素制造及檢定規(guī)程》5項?！　?氫氧化鋁稀釋　　～ /ml。%（g /ml），%（g /ml），高壓蒸汽滅菌。　　 吸附　　按計算量將精制白喉類毒素、精制破傷風類素及百日咳菌苗原液加入稀釋好的吸附劑內?！！　?分批　　同批吸附劑同批配合的原液同次吸附的制品為1批。如用大罐吸附時，所用抗原和吸附劑可以多批混合（精制類毒素不超過3批），每罐為1批。　　3 成品檢定　　 物理化學檢查　　 振搖后應呈均勻乳白色混懸液。不應有搖不散的凝塊或異物。　　～?！　?%～%(g /ml)。　　 %～%(mg /ml)?！　?%(g /ml)?！　?鑒別試驗　　抽取樣品，另枸櫞酸鈉或用其他適宜方法將吸附劑溶解后，離心沉淀百日咳菌體和殘留的吸附劑，按《吸附精制白喉類毒素制造及檢定規(guī)程》、《吸附精制破傷風類毒素制造及檢定規(guī)程》《百日咳菌苗原液制造及檢定要求》?！　?無菌試驗　　按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行?！　?毒性試驗　　應符合附錄1《百日咳菌苗原液制造及檢定要求》?！　?安全試驗　　 小白鼠法　　用體重18～20g之健康小白鼠5只，不得有局部膿腫或死亡。　　 豚鼠法　　用體得300～400g豚鼠，每批制品不少于4只，分兩側，應符合《吸附精制白喉類毒素制造及檢定規(guī)程》《吸附精制破傷風類毒素制造及檢定規(guī)程》?！　?效力試驗　　 百日咳菌苗免疫力試驗　　每3批抽1批進行，應符合附錄1《百日咳菌苗原液制造及檢定要求》?！　?白喉及破傷風類毒素的效力試驗　　每更換1批類毒素時進行。取體重300～400g豚鼠4只，第30天采血，將分離的血清等量混合，進行白喉及破傷風抗毒素單位測定?！　?白喉抗毒素單位測定　　用Lr /300家兔皮內法?！　?破傷風抗毒素單位測定　　用L+/100小白鼠皮下法。　　 白喉類毒素的效力試驗亦可采用攻毒法。取體重300～350g豚鼠5只以上。第30天各皮下攻擊白喉毒素200個MLD，觀察7天，豚鼠死亡不得超過20%；同時另取體重240～270g豚鼠3只，各皮下注射1個MLD毒素作為對照，2只對照豚鼠應發(fā)病并于96小時內死亡，允許另1只較晚死亡或發(fā)病。　　 亦可按WHO推薦的效力檢定方法（見《吸附精制白喉類毒素制造及檢定規(guī)程》附錄和《吸附精制破傷風類毒素制造及檢定規(guī)程》附錄）?！　? 保存與效期　　應保存于2～8℃。自吸附之日起效期為1年半?！　「戒? 百日咳菌苗原液制造及檢定要求　　本品系用百日咳第Ⅰ相菌種經培育后取菌體制成懸液，加適當殺菌劑，以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋制成，每ml含菌45億～90億。用于制備百日咳菌苗、白喉、破傷風類毒素混合制劑?！　? 菌種　　 制造百日咳菌苗之菌種、檢定用的Ⅰ相診斷血清、百日咳分型血清及百日咳參考菌苗，由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或經同意?！　?菌種檢定　　 培養(yǎng)特性　　于包姜（BordetGengou）氏或其他適宜的培養(yǎng)基上培育，各菌株應具有典型的形態(tài)及生化特性。　　 血清學特性　　將35～37℃培育40～48小時的菌苔，混懸于生理鹽水或磷酸鹽緩沖生理鹽水內，使每ml含菌20億個，與Ⅰ相血清做定量凝集反應，凝集效價應達到血清原效價之半。同時與單價分型血清做定量凝集反應，其型別應與該菌種標定型別相同?！　　　∮媒】导彝没螂嗍笾辽?只，用培育40～48小時的菌苔混懸于磷酸鹽緩沖生理鹽水內，然后稀釋為幾個不同濃度的菌液，經72小時觀察反應。，判為合格。　　 毒力試驗　　用體重16～18g之小白鼠至少3組，每組至少10只，在麻醉狀態(tài)下從鼻腔滴入經培育40～48小時，記錄小白鼠生死情況，按Reed Muench法計算LD50?！　?免疫力試驗　　 方法　　按附錄2《百日咳菌苗原液免疫力試驗方法》進行?！　　　　Ｈ粼囼灳旱男r低于此要求時，可復試，其結果的幾何平均值（如用概率分析法時，應用加權幾何平均值）≥，仍判為合格?！　?菌種保存　　 菌種應用凍干法保存?！　?凍干菌種應保存在2～8℃。，合格的菌種可使用2年，以后每年檢查1次，如仍合格可繼續(xù)使用1年?！　?. 制造　　 制造百日咳菌苗原液至少應選用2個菌株，制成的菌苗應含3型因子?！　?制造百日咳菌苗原液用活性炭半綜合培養(yǎng)基或其他適宜的培養(yǎng)基。如用液體培養(yǎng)基，不得含有已知引起人體毒性或變態(tài)反應的成分?！　?原液制造　　 菌種　　凍干菌種啟開后接種于改良包姜氏或活性炭半綜合培養(yǎng)基或其他適宜的培養(yǎng)基上。于35～37℃培育不超過72小時，以后各代不超過48小時，傳代菌種保存不得超過14天，凍干菌種啟開后用于生產時不應超過10代?！　?培育　　可用固體法或液體法培育。培育時間不得超過48小時，經檢查為純菌后，用適當方法收集菌體，～?！　?殺菌　　%（ml /ml）甲醛溶液殺菌，放37℃2～3天。亦可用其他適宜的殺菌劑和殺菌方法殺菌?！　　　≡簯鹌浚ü蓿┏闃咏臃N普通瓊脂斜面及普通血液瓊脂斜面（或活性炭半綜合培養(yǎng)基）各1管，放35～37℃培育2天，然后放24～26℃1天。有雜菌生長者應廢棄?！　?原液合并　　固體法工藝生產經純菌試驗合格的原液應進行合并。不同菌株不同日期制造2的原液應分別合并。合并后，可加適量防腐劑，并保存于2～8℃。　　 原液檢定　　 濃度測定　　每瓶原液應按中國細菌濁度標準與質量檢定部門會同測定濃度。稀釋菌苗時即按此濃度計算?！　?鏡檢　　每瓶原液取樣稀釋至成品濃度，涂片染色鏡檢，應為革蘭氏陰性球桿菌。至少觀察10個視野，應無雜菌?！　?凝集反應　　Ⅰ相血清做定量凝集試驗，其凝集效價應達血清原效價之半，如僅達到或低于血清原效價1/4時，應作免疫力試驗，合格后方可使用；同時應用單價分型血清做定性凝集試驗，其所含型別應與制造原液的菌種型別相同。　　 無菌試驗　　每瓶原液除按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行無菌試驗外，并做特異無菌試驗。如特異無菌試驗有百日咳菌生長，可復試一次，若仍有百日咳菌生長，原液應判為不合格?！　?毒性試驗　　　　按附錄3《百日咳菌苗原液毒性試驗方法》進行?！　?判定　　試驗組小白鼠注射后72小時的總體重不少于注射前總體重，第7天小白鼠增加的體重不少于對照組增加體重的60%，并不得有死亡，該批原液毒性試驗判為合格。　　試驗結果達不到上述要求，可復試一次。仍達到不過要求?！　?原液保存　　應保存于2～8℃。原液自采集之日起至成品發(fā)出不得少于4個月。原液自采集之日起效期為3年。附錄2 百日咳菌苗原液免疫力試驗方法　　1 免疫　　 動物　　選用體重10～12g同性或雌雄性各半的健康NIH小白鼠?！　游镫S機分為三組，每組16只或20只（同性或雌雄性各半，為保證攻擊后有16只或20只小白鼠，可適當多免疫幾只小白鼠），同時飼養(yǎng)健康小白鼠55只，備做對照用?！　?免疫原稀釋　　177。，、百日咳參考菌苗稀釋至每ml含8IU，（）、（）（）?！　?免疫方法　　將不同稀釋度的免疫原分別免疫小白鼠?！　? 攻擊菌及攻擊菌液的制備　　 菌種　　小白鼠腦內攻擊用58030（18323）菌株?！　?培養(yǎng)基　　可用包姜氏培養(yǎng)基（含羊血20%～30%）或其他適宜的培養(yǎng)基。　　 培養(yǎng)溫度及時間　　放35～37℃培育，第一代不超過72小時，攻擊時菌種的培育時間為20～24小時。原代菌種放2～8℃可保存2周。　　　　將培育20～24小時的菌苔經肉眼檢查為純菌后，177。，用滅菌脫脂棉過濾，測定濃度，～、作為試驗組的攻擊菌液，然后再連續(xù)稀釋，、800、80及8個菌，以上5個不同稀釋度的菌液，作為對照組的攻擊菌液?！　?工作起止時間　　自攻擊菌液制備（開始刮菌）。　　　　在攻擊前后，接種于包一姜氏培養(yǎng)基或其他適宜的培養(yǎng)基平皿中，每次不得少于2個平皿，其菌落形成單位約為濁度測定的1/4?！　? 攻擊　　動物免疫后14天，（含8萬個菌），4號針頭。在試驗組攻擊后再進行對照組毒力測定，對照組每稀釋度攻擊10只小白鼠?！　? 記錄結果　　動物攻擊后觀察14天。攻擊后第2天，將試驗組動物處理成每組16只或20只。以后逐日觀察動物并記錄死亡數，最初3天死亡的動物不作統計，至第14天有麻痹、頭部腫脹、弓背及明顯聳毛的動物按死亡計算?！　? 結果計算　　　 按WilsonWorcester氏法計算參考菌苗及待檢菌苗的ED50177。SD%，每個ED50標準差的范圍一般應為64%～156%?！　?按ReedMuench氏法計算對照組LD50，1個LD50的菌數應不高于800個菌?！　?計算均質性因子“α”?！　　　〈龣z原液每ml應含IU=參考菌苗ED50/待檢原液ED50參考菌苗每ml的IU數　　6 效力評價　　百日咳原液按成品菌苗嘗試稀釋后。附錄3 百日咳菌苗原液毒性試驗方法　　1 選用體重14～16g健康小白鼠，每批原液不少于10只（同性或雌雄性各半）?！　? 177。（含成品菌苗相同量的防腐劑），將百日咳原液稀釋至成品菌苗濃度的1/2?！　? 。另取同數量同體重的小白鼠（同性或雌雄性各半），177。　　4 注射后的小白鼠應逐日觀察，并于喂食后2小時進行稱重?！　? 于注射前、注射后72小時及7天，分別稱試驗組及時對照組小白鼠的體重。　　6 試驗組小白鼠注射后72小時的總體重不少于注射前的總體重；7天小白鼠平均增加的體重不少于對照組平均增加體重的60%，并不得有死亡，該批原液毒性試驗判為合格。　　7 試驗結果若達不到上述要求，可進行復試，仍達不到上述要求，原液可放置2～8℃保存3～4個月再進行復試，如仍達不到上述要求，該批原液的毒性判為不合格。吸附百日咳菌苗、白喉、破傷風類毒素混合制劑使用說明書　　本品系由百日咳菌苗原液、精制白喉類毒素及精制破傷風類毒素用氫氧化鋁吸附制成。每ml中含百日咳菌8個效力單位，精制白喉類毒素20Lf、精制破傷風類毒素5Lf。供兒童預防百日咳、白喉及破傷風之日。　　本品為乳白色懸液，含硫柳汞防腐劑，放置后菌體易下沉，但經振搖后能均勻分散?！　〗臃N對象　　3個月～6周歲兒童。　　用法　　。　　　　自3月齡開始免疫，至12月齡完成三針次免疫，每針間隔4～6周。18～24月齡注射第4針?！　〗伞　∮邪d癇、神經系統疾患及抽風史者禁用。急性傳染病（包括恢復期）及發(fā)熱者暫緩注射?！　》磻　∽⑸浔酒泛?，局部可有紅腫、疼痛、發(fā)癢，或有低熱、疲倦、頭痛等，一般不須特殊處理即行消退，如有嚴重反應應及時診治。　　注意事項　　，如出現搖不散之凝塊，有異物，安瓿有裂紋，制品曾經凍結，標簽不清和過期失效者不可使用。　　，局部可能有硬結，可逐步吸收。注射第2針時應更換另側部位?！　　?000腎上腺素，供偶有發(fā)生休克時急救用?！　?、驚厥等異常情況者，不再注射第二針?！　”４妗　４嬗?～8℃暗處，不得凍結。凍干皮內注射用卡介苗制造及檢定規(guī)程本品系卡介菌經培育后凍干制成。用于預防結核病?！　? 菌種　　 制造卡介苗的菌種，應由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或經同意。嚴禁使用通過動物的菌種制造卡介苗?！　?如果采用次代種子批，單批收獲培養(yǎng)物的總代數