甲醛降解細菌的分離鑒定和降解效果測定(編輯修改稿)
2025-08-31 18:28 本頁面
【文章內容簡介】 Taq Plus DNA Polymerase（3）培養(yǎng)基和溶液Ⅰ、 LB培養(yǎng)基：胰化蛋白胨10g、NaCl 10g、酵母提取物50g、H2O 1000mL、Ⅱ、MS培養(yǎng)基：MgSO4 KH2PO4 g K2HPO4 NH4NO4 ，H2O 1000mL。Ⅲ、DNA提取所用溶液：20％SDS溶液、TE緩沖液（10mmol/L TrisHCl；1mmol/LEDTA，）、5mol/L NaClO氯仿－異戊醇（V/V 24：1）Ⅳ、瓊脂糖凝膠電泳（溴酚藍蔗糖溶液染色） 實驗方法 菌株分離純化Ⅰ、取活性污泥懸浮液10ml于LB培養(yǎng)基中，在30℃、150r/min的搖床上培養(yǎng)16～24h后，吸取10ml富集液于裝有100ml MS培養(yǎng)基的250ml三角搖瓶中，并加入80μL質量濃度為37%～40％甲醛），最后將三角搖瓶用錫紙包住瓶口（以防甲醛揮發(fā)）；在30℃、150r/min的搖床上培養(yǎng)16～24h。Ⅱ、取菌懸液，稀釋涂布于LB平板上，30℃恒溫培養(yǎng)24h。在平板上挑選出各單菌落菌種，接種于加有240μL甲醛溶液的MS培養(yǎng)基中，在30℃、150r/min的搖床上培養(yǎng)16～24h。分別取樣，測定其溶液中的甲醛濃度，選出甲醛濃度最低的搖瓶，用棉簽接種于LB斜面上，30℃恒溫培養(yǎng)24h，分離出菌株。 菌株鑒定（1）對分離出的菌株進行一系列形態(tài)特征及生理生化特征鑒定。（2）進行DNA提取，16S rDNA 序列的擴增（PCR反應條件為：95 ℃ 4min ；95 ℃ 1min ，48 ℃1min ，72 ℃ 1min ，30 個循環(huán)；72 ℃ 10min），瓊脂糖凝膠電泳及PCR產物純化、測序，確立同源性。 降解甲醛效果測定菌體接入到裝有100mL MS培養(yǎng)基的三角瓶中，在30℃，150r/min的搖床上培養(yǎng)12h后，轉接到裝有200ml MS培養(yǎng)基的三角瓶中，并加入240μL甲醛，最后將三角瓶瓶口用錫箔紙密封；在30℃，150r/min的搖床上培養(yǎng)8h后，每隔2h取一次樣。；將離心管放在12000r/min的高速離心機中離心10min；取出后，取上清夜5μL于比色管中，加5mL水將其稀釋1000倍，并加入1mL的顯色劑；最后放入58℃的水浴鍋中顯色30min。 顯色完全后在413nm波長下測甲醛濃度（OD），并繪制出降解曲線圖
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