分子診斷復(fù)習(xí)題舊(編輯修改稿)
2024-08-31 14:25 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 行定位、定性分析和鑒定。它把免疫反應(yīng)的特異性、組織化學(xué)的可見性巧妙地結(jié)合起來，借助顯微鏡的顯像和放大作用，在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平檢測(cè)各種抗原。19. 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析(CLEIA):步驟與酶免疫測(cè)定相同，僅最后一步酶反應(yīng)所用底物為發(fā)光劑，通過化學(xué)反應(yīng)所發(fā)出的光在特定的儀器上進(jìn)行測(cè)定。標(biāo)記酶：HRP、AP。發(fā)光劑：魯米諾及衍生物、螺旋金剛烷環(huán)氧化物苯磷酸酯等20. PCRELISA: 在一個(gè)引物的5’端標(biāo)記上生物素以便使其能與包被板上的親合素結(jié)合而固定PCR產(chǎn)物，而在另一引物的5’端標(biāo)記FITC(熒光素)，用HRP標(biāo)記的抗FITC抗體與之結(jié)合顯色，即可進(jìn)行常規(guī)ELISA檢測(cè)。如設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，此技術(shù)還可用于定量分析。二、思考題1. 標(biāo)記免疫分析技術(shù)的種類及常用標(biāo)記物。種類：酶聯(lián)免疫吸附分析 ，免疫熒光分析，放射免疫分析，化學(xué)發(fā)光免疫分析，電化學(xué)發(fā)光免疫分析，金標(biāo)免疫分析，時(shí)間分辨熒光免疫分析常見示蹤物:酶、放射性核素、鑭系稀土元素螯合物、發(fā)光劑2. ELISA技術(shù)類型及應(yīng)用。技術(shù)類型: 雙抗體夾心法測(cè)抗原，雙抗原夾心法測(cè)抗體，間接法測(cè)抗體，競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體，競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原，捕獲包被法測(cè)抗體，BASELISA法應(yīng)用:(1)在醫(yī)學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用：病原體及其抗體的檢測(cè) 蛋白質(zhì)的檢測(cè) 非肽類激素的檢測(cè) 藥物的檢測(cè) 毒品檢測(cè)(2)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用：食品微生物的檢測(cè) 食品毒素的檢測(cè) 食品中殘留農(nóng)藥的檢測(cè) 食品中殘留抗生素的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)3. 雙脫氧終止法測(cè)序的原理。利用DNA聚合酶，以單鏈DNA為模板，以dNTP(含標(biāo)記的dNTP)為底物，在四組互相獨(dú)立的反應(yīng)體系中分別加入不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNPT)作為鏈反應(yīng)終止劑，根據(jù)堿基配對(duì)原則，在測(cè)序引物引導(dǎo)下，合成四組有序梯度的互補(bǔ)DNA鏈，然后通過高分辨率的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，放射自顯影檢測(cè)后直接識(shí)讀待測(cè)DNA的序列。4. PCR的基本原理及應(yīng)用。原理:是模擬體內(nèi)DNA半保留復(fù)制過程，通過變性、退火、延伸三步反應(yīng)的循環(huán)完成；靶基因的雙鏈DNA通過變性解鏈為單鏈，特異的引物通；過退火與單鏈DNA模板結(jié)合，在靶DNA的指導(dǎo)下引物的3’末端延伸靶DNA的互補(bǔ)鏈完成一個(gè)循環(huán)，重復(fù)這一過程，使目的DNA片段得到擴(kuò)增。應(yīng)用:目的基因的克??；基因的體外突變；DNA和RNA的微量分析；DNA序列測(cè)定；基因突變分析5. 熒光定量PCR的原理。熒光定量PCR（FQPCR）基于熒光能量傳遞技術(shù)（fluorescence resonance energy transfer FRET），通過受體發(fā)色團(tuán)之間偶極偶極相互作用，能量從供體發(fā)色團(tuán)轉(zhuǎn)移到受體發(fā)色團(tuán)，轉(zhuǎn)移效率與兩個(gè)發(fā)
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