國自然基金標書模板(編輯修改稿)
2025-08-30 02:07 本頁面
【文章內容簡介】 促進紅細胞生成以糾正貧血，在臨床上已被廣泛使用十余年。其造血活性的主要機制為抑制晚紅系祖細胞凋亡而非直接刺激細胞生成[3]。隨著EPO受體在腦、肝臟、子宮等器官及實體腫瘤組織的發(fā)現，EPO的髓外作用日益受到重視[4]。近十年的研究主要集中于EPO的腦保護作用， EPO/EPO受體通過抗凋亡、抗炎、抗氧化等機制，可預防或減輕神經系統(tǒng)缺血/再灌注損傷[5]。一項已完成的EPO對缺血性中風病人安全性和療效的隨機雙盲臨床試驗，對于中風8小時內的患者，連續(xù)3天經靜脈使用重組EPO（rebinant EPO, rEPO），觀察30天顯示rhEPO對于急性缺血性中風患者能有效縮小梗塞面積和改善臨床表現[6]。同時在心肌細胞也發(fā)現EPO受體的存在。已有研究表明EPO可在細胞水平顯著減少缺氧誘導的大鼠心肌細胞凋亡，同時器官水平研究表明EPO可減少缺血再灌注心肌損傷和梗死心肌的范圍，改善心功能[7]。在缺血再灌注的不同時期，包括心肌缺血前、缺血時及再灌注時使用單一劑量rEPO均能產生顯著心肌保護作用[8]。由于單一劑量EPO治療后3~5天才可見外周循環(huán)中紅細胞增加，因此EPO的心臟保護作用與增加紅細胞濃度無關，直接保護機制可能包括：（1）減少心肌細胞凋亡；（2）穩(wěn)定內皮細胞和促進血管生成[9]；（3）動員骨髓內皮祖細胞[10]；（4）減輕缺血和再灌注引起的炎癥反應[11]等。體內EPO主要由腎臟分泌入循環(huán)，EPO和細胞膜的EPO受體結合發(fā)揮生物活性，激活多種信號轉導途徑發(fā)揮抗凋亡作用[12]。多種神經細胞可分泌EPO和表達EPO受體，EPO/EPO受體系統(tǒng)被認為是腦缺血損傷的內源性保護機制，在腦缺血/再灌注或持續(xù)局部腦缺血時，神經細胞上調EPO受體和分泌EPO增強，并且上調EPO受體要早于增加EPO分泌[13，14]。EPO受體在成年大鼠心肌細胞、內皮細胞和纖維母細胞均有表達[15]，細胞EPO受體表達可能與缺氧，胰島素樣生長因子（insulinlike growth factor, IGF），腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor, TNF），白介素1（interleukin, IL1）和白介素6（interleukin6, IL6）等有關[4]。目前尚無心肌組織分泌EPO的證據，調控心肌細胞EPO受體表達的因素尚不明確，對于心肌梗死時是否也存在EPO受體上調尚不清楚。EPO受體的表達分布和時間，對于外源性EPO的治療效果起決定作用。在大鼠離體心臟Langendorff灌注模型中，40min缺血和2h再灌注，EPO受體的表達量和在心肌細胞內皮細胞和纖維母細胞的表達分布未見顯著改變，并且發(fā)現外源性EPO治療使心肌組織EPO受體下調[15]。是否持續(xù)缺血或更長的再灌注時間能使EPO受體的表達量和分布產生影響，以及EPO治療是否會導致EPO受體持久下調等情況，需進一步研究。本項目研究缺血性心臟病時EPO受體的表達和功能。重點探討心肌細胞表達EPO受體的調控機制，缺血和再灌注損傷時心肌組織EPO受體表達分布和時間特征，以及外源性EPO的心臟保護作用與心肌EPO受體功能的關系。同時，觀察外源性EPO治療對于心臟EPO受體表現情況影響等。通過研究以明確缺血性心臟是否存在EPO/EPO受體的內源性保護機制和外源性EPO治療的最佳時間窗，為臨床使用EPO治療急性心肌缺血性損傷提供實驗依據。項目研究目標及與申請者研究工作長期目標的關系研究目標：探索心肌細胞表達EPO受體的影響因素，明確心肌缺血損傷時是否存在EPO/EPO受體的內源性保護機制。探索外源性EPO對于心肌保護作用及與EPO受體表達的關系，明確EPO治療的時間要求。EPO治療缺血性心臟病提供實驗依據。與申請者研究工作長期目標的關系：本課題組成員長期從事心血管疾病治療和細胞移植治療的研究，在心血管生理學、細胞生物學分子生物學、分子遺傳學和病理學等方面做了大量的工作，積累了豐富的理論和實踐經驗。項目研究內容，研究方案和進度安排研究內容：第一部分：體外實驗：大鼠心肌細胞EPO受體表達及影響因素低氧及IL6等細胞因子對體外培養(yǎng)的心肌細胞EPO受體表達的影響：觀察體外培養(yǎng)的心肌細胞EPO受體表達情況，以及在低氧和/或與心肌梗死相關的IL6等細胞因子對于心肌細胞EPO受體表達的影響。外源性EPO對缺氧心肌細胞損傷的保護作用及EPO受體的表達變化：觀察外源性EPO對于心肌細胞的保護作用，以及EPO處理對于心肌細胞表達EPO受體的變化。第二部分：在體實驗：缺血損傷對于心肌細胞表達EPO受體的影響缺血性損傷時心肌表達EPO受體改變及分布：觀察缺血再灌注及心肌梗死模型中缺血區(qū)域心肌細胞、內皮細胞及間質細胞表達EPO受體情況及隨時間的改變。缺血性心肌損傷時循環(huán)中EPO濃度改變及時間特征：觀察缺血再灌注及心肌梗死時循環(huán)中EPO濃度改變，隨時間的濃度曲線，以及與EPO表達相關的細胞因子水平的改變。外源性EPO對缺血心肌的保護作用及對EPO受體影響：觀察外源性EPO對于缺血再灌注及心肌梗死的保護作用和EPO治療開始時間及維持治療對于保護作用的影響。觀察外源性EPO對于缺血心肌表達EPO受體的影響。研究方案： 第一部分 體外培養(yǎng)的心肌細胞EPO受體表達及影響因素新生大鼠心肌細胞原
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