第五章體內(nèi)藥物分析(編輯修改稿)
2024-08-28 13:11 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 品富集、可一次進行多個樣品萃取 ? 缺點：乳化、污染環(huán)境、 乳化的去除：加少量固體氯化鈉到水相中可減輕乳化；輕微乳化離心；嚴(yán)重乳化低溫冰箱快速冷凍破壞乳化層后融化離心 。 固相萃取法： 以固相分離方法進行樣品預(yù)處理，從水相中分離出所需測定的組份，通常以柱分離方式進行操作，故有時這種方法又稱為固相提取 活化 ?上樣 ?淋洗 ?洗脫 洗脫液濃集 28 固相萃取的模式及原理 反相固相萃取 正相固相萃取 離子交換固相萃取 ① 陰離子交換 ② 陽離子交換 實驗步驟 第一步：用甲醇潤濕小柱，活化填料 第二步：用水或適當(dāng)?shù)木彌_液沖洗小柱 — 除去大部分甲醇 第三步：加樣，使樣品經(jīng)過小柱，棄去廢液 第四步：用水或適當(dāng)?shù)木彌_液沖洗小柱，去除內(nèi)源性雜質(zhì) 第五步：選擇適當(dāng)?shù)南疵撊軇┫疵摫环治鑫?，收集洗脫液，揮干溶劑，備用或直接進行在線分析 血漿樣品可直接上柱，樣品量 ~2ml，流速 1~2ml/min 31 本法特點：少溶劑、少污染、減少液液萃取的乳化。適合各種液體檢材如血、尿、洗胃液、現(xiàn)場水、飲料等，對于肝、腎、胃以及其他固體檢材，均需制成水液方可進行固相萃取。 柱切換高效液相色譜技術(shù)是指由閥來改變流動相走向與流動相系統(tǒng)，從而使洗脫液在一特定時間內(nèi)從預(yù)處理柱進入分析柱的技術(shù)。 用兩個或兩個以上柱子連接構(gòu)成色譜網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，使不同柱子達到不同分離目標(biāo)，柱子間用切換閥聯(lián)結(jié)，這就是柱切換技術(shù)。 基本原理 是首先在預(yù)柱上實現(xiàn)生物體液中干擾大分子與待測藥物的分離，然后用柱切換將待測藥物從預(yù)柱轉(zhuǎn)移至分析柱上完成色譜分析 。 自動化固相萃取 柱切換高效液相色譜法 3. 超濾法 ? 膜分離技術(shù)，可用于測定生物樣品中游離藥物濃度 ? 按照分子截留量的大小，可分離 30?1000kD的可溶性生物大分子物質(zhì)。可加壓過濾或高速離心。 （三）、輟合物的水解： ? 酸水解法：強酸、加熱 ? 酶解：常用葡萄糖醛酸酶，一般控制 ~ ，37℃ 孵育數(shù)小時。 ? 溶劑 解： （四）、化學(xué)衍生化 使藥物變成能被分析的性質(zhì) 提高檢測靈敏度 增強藥物穩(wěn)定性 提高對光學(xué)異構(gòu)體分離的能力 ? 氣相色譜衍生化 ? 液相色譜衍生化 衍生化 方 法： 柱 前衍 生， 柱后衍 生 氣相色譜衍生化方法： 硅烷化、酰化、烷基化、不對稱衍生化 液相色譜衍生化方法： 紫外衍生化、熒光衍生化、電化學(xué)衍生化、手性衍生化 第三節(jié)、體內(nèi)樣品分析方法與方法驗證 一、分析方法的建立 （一）、分析方法的選擇 色譜分析法 免疫分析法 生物學(xué)方法 常用分析方法的特點 分析方法 檢測限度 /108g/ml 特異性 /分離能力 紫外分光光度法 （ UV） 100 － 熒光分光光度法 （ Fluor） + 原子吸收光度法 （ AA） + 氣相色譜法 （ GC） 氫火焰離子化檢測器 （ FID） 1～ 10 ++ 氮磷檢測器 （ NPD） ～ +++ 電子捕獲檢測器 （ ECD） +++ 質(zhì)譜檢測（ MS） ++++ 高效液相色譜法 （ HPLC） 紫外檢測器 （ UV） 10 ++ 熒光檢測器 （ Fluor） +++ 電化學(xué)檢測器 （ ECD） ～ +++ 質(zhì)譜檢測 ++++ 免疫法 （ RIA） 酶免疫法 （ EIA） ++ ++ 放射免疫 （二）、分析方法建立的一般程序 色譜條件的篩選： 確定最佳分析
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