第九章酶免疫技術(shù)(編輯修改稿)
2024-08-28 12:59 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 飽和硫酸銨沉淀提純 酶標(biāo)記抗體或抗原 ?固相抗體或抗原是非均相酶免技術(shù)中將游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物迅速分離的最常用方法 ?固相抗體或抗原就是把抗體或抗原結(jié)合到固相載體的表面 三、固相載體 要求 ?結(jié)合抗體或抗原的容量大 ?抗體或抗原牢固地固定在其表面 ?不影響免疫反應(yīng)性 ?利于反應(yīng)充分進(jìn)行 ?固相方法簡(jiǎn)便易行，快速經(jīng)濟(jì) 種類 ?塑料制品 ?微顆粒 ?膜載體 固相載體 將抗原或抗體結(jié)合于固相載體 用 1%～ 5%的牛血清白蛋白或 5%～ 20%小牛血清消除固相載體表面未結(jié)合的位點(diǎn)，消除非特異性吸附 包被coating 封閉blocking 包被與封閉 第二節(jié) 酶免疫技術(shù)分類 酶免疫技術(shù) 酶免疫組化 酶免疫測(cè)定 均 相 非均相 固相酶免疫測(cè)定 液相酶免疫測(cè)定 組織切片或其它標(biāo)本中抗原的定位 液體標(biāo)本中抗原或 抗體的定性和定量 用于小分子激素和半抗原（如藥物）的測(cè)定 酶標(biāo)記物與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，標(biāo)記酶的活性會(huì)發(fā)生改變，不用分離結(jié)合和游離酶標(biāo)記物，通過(guò)測(cè)定標(biāo)記酶的活性的改變，而確定抗原或抗體的含量。 原理 一、均相酶免疫測(cè)定 最具代表性的兩種技術(shù) 酶放大免疫測(cè)定技術(shù) EMIT enzymemutiplied immunoassay technique 克隆酶供體免疫分析 CEDIA cloned enzyme donor immunoassay 均相酶免疫測(cè)定 EMIT示意圖 CEDIA示意圖 ?分類： 液相酶免疫測(cè)定 固相酶免疫測(cè)定 以聚苯乙烯等材料作為固相載體的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ ELISA） 是目前最為常用的固相酶免疫測(cè)定 與均相不同之處 需分離游離與結(jié)合的酶標(biāo)記物 二、非均相酶免疫測(cè)定 第三節(jié) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 底物顯色 定性或定量的分析 原理 包被 反應(yīng) 加入待測(cè)抗體或 抗原和酶標(biāo)抗原 或抗體 洗滌 使結(jié)合在固相上 的抗原抗體復(fù)合物 與未結(jié)合的分離 1 2 3 4 一、基本原理 固相的
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