抗體制備技術(shù)(編輯修改稿)
2025-08-15 02:44 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 質(zhì)的特異性免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型。 種類 — 無機(jī)、生物性、人工合成、油劑和 納米顆粒。 用途 — 抗原表面積增，構(gòu)型改變；延長抗 原的滯留時間；增強(qiáng)吞噬～（二）免疫動物l免疫動物的選擇： ① 抗原來源與動物種屬的關(guān)系（越近越差） ② 動物個體的選擇（年齡、體重與健康，） ③ 抗原性質(zhì)與動物種類l免疫的方法： 免疫原的劑量～ 免疫的途徑與其間隔時間～ 免疫動物采血～ （對實驗成功與否至關(guān)重要）（（三）免疫血清的純化l特異性抗體的純化l1）親和層析l2）吸附l IgG類抗體的純化l1）鹽析l2）凝膠過濾l3）離子交換l4）親和層析 在凝膠過濾柱（ sephadex G200）上血清蛋白的層析示意 (M=IgM, G=IgG, A=IgA)在 DEAE纖維素上人血清蛋白的層析示意圖(M=IgM, G=IgG, A=IgA) 親和層析純化 IgG基本過程示意圖 (四 )免疫血清的鑒定抗體效價的測定（凝集、擴(kuò)散、 ELISA）特異性的鑒定（免疫印跡、雙擴(kuò)散）純度的鑒定（ SDSPEAG）親和力的鑒定 — affnity指抗體與抗原結(jié)合 的牢固程度，以親和常數(shù)表示。 測定方法有平衡透析、 ELISA、競爭（非 競爭）結(jié)合等。 l單抗親合常數(shù)的測定 ：l 單抗親合常數(shù)測定采用非競爭酶免疫試驗法：l 1）先確定在某一抗原濃度時抗體可以達(dá)到飽和；l 2）以該抗原濃度為實驗條件，飽和時的 OD值作為 OD100，找出 OD50時的抗體濃度和相應(yīng)的pp65抗原濃度；l 3)根據(jù)公式 Ka= n1 計算 McAb的 Ka值。l 2(n[Ab’]t[Ab ]t)l t代表測定時的溫度；l n=[Ab]t/[Ab’]t；l [Ab]t表示抗原濃度較高的 Amax的一半；l [Ab’]t表示抗原濃度較低的 Amax的一半。l 對于單克隆抗體，一般親合力要求 107L/
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