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正文內(nèi)容

制備hplc技術(shù)ppt課件(編輯修改稿)

2025-06-02 12:04 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 是很好 順序也很重要,比如,先加水再加甲醇不溶,先加甲醇再加水就溶了 用二氯甲烷可能的問題是不混溶 注意問題 上樣量的調(diào)整: mp/ma=lp/la * r2p/r2a L:柱長; m:進(jìn)樣量; r:色譜柱內(nèi)徑 p: 制備柱; a:分析柱 制備 HPLC技術(shù)問題 — 上樣量的選擇 上樣量主要根據(jù) a、柱子的大小 b、樣品的濃度 c、制備是否根據(jù)分析條件放大(例如制備柱是否還用分析用填料) 根據(jù)內(nèi)徑計(jì)算:內(nèi)徑放大 N倍,迚樣量大致可放大 N平方倍(柱長一定時(shí)) 將分析色譜上的結(jié)果放大到制備色譜中: 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的選擇 通常采用將分析 HPLC上的條件進(jìn)行優(yōu)化、放大后應(yīng)用到制備 HPLC中。 然而,分析和制備是不同的概念,如果用分析的條件(上樣量,流動(dòng)相消耗量)等條件簡單的放大,成本會(huì)很高。制備的首要概念是在達(dá)到純化的基礎(chǔ)上,降低成本,加快時(shí)間(提高效率) 。 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的選擇 濃縮法超量載樣和體積法超量載樣都會(huì)導(dǎo)致組份溶解性的降低。既然組分的分離需要一定的溶解性,那么在放大分析方法的時(shí)候,優(yōu)化溶解性、特別是選擇性就是一項(xiàng)很重要的工作。 因?yàn)檫x擇性和超量載樣潛力是相互依靠的,選擇性的提高會(huì)提高一次運(yùn)行中所分離的樣品量。 選擇性與超量載樣 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的選擇 從分析方法到制備方法的放大和方法的優(yōu)化需要三個(gè)步驟: 1. 優(yōu)化分析方法的 選擇性 。 2. 在分析柱上進(jìn)行 超量載樣 。 3. 放大到制備柱。 R =4n1 / 2*αα 1*1 + k2k2柱 效 項(xiàng)柱 選 擇 項(xiàng)柱 容 量 項(xiàng)α 主 要 受 溶 劑 的 種 類 影 響k 主 要 受 洗 脫 能 力 的 影 響k = K *V sV mK =C sC mR =4n1 / 2*αα 1*1 + k 2k 2柱 效 項(xiàng)柱 選 擇 項(xiàng)柱 容 量 項(xiàng)α 主 要 受 溶 劑 的 種 類 影 響k 主 要 受 洗 脫 能 力 的 影 響k = K *V sV mK =C sC m 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的選擇 R =4n1 / 2*αα 1*1 + k2k2柱 效 項(xiàng)柱 選 擇 項(xiàng)柱 容 量 項(xiàng)α 主 要 受 溶 劑 的 種 類 影 響k 主 要 受 洗 脫 能 力 的 影 響k = K *V sV mK =C sC mα =K2K1=k2k1 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的選擇 線形放大 非線形放大 指柱直徑、長度(即柱體積)和流速等可以根據(jù)加樣量的增加情況進(jìn)行按比例線形放大。制備色譜中,最好的線形放大是在其他工藝條件不變的情況下,只改變柱子和流速,就可以放大生產(chǎn),同時(shí)分離效果保持不變。 成本比較大,同時(shí)也大大減少生產(chǎn)的產(chǎn)量和速度 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的優(yōu)化 流速的調(diào)整: Fp/Fa = Vp/Va = Lp/La * r2p/r2a F :流速 ; V:柱體積; L:柱長; r:色譜柱內(nèi)徑; p: 制備柱; a:分析柱 注:流速一般為分析流速線性放大量的 40%~50%最好 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的優(yōu)化 梯度的調(diào)整 tp/ta = Vp/Va * Fp/Fa F :流速 ; V:柱體積; t:梯度洗脫時(shí)間 ; p:
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