小鼠脾臟細(xì)胞原代培養(yǎng)及觀察計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)報(bào)告-山東大學(xué)doc(編輯修改稿)
2025-08-14 02:24 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 。亞甲基藍(lán)是一無毒染料，氧化型為藍(lán)色，還原型為無色?；罴?xì)胞因具有較強(qiáng)的還原能力，能使亞甲藍(lán)從藍(lán)色的氧化型變成無色的還原型，故活的酵母細(xì)胞在用亞甲基藍(lán)染色后顯示無色；死亡酵母細(xì)胞或代謝緩慢的衰老酵母細(xì)胞，因無還原能力或還原能力極弱，使亞甲藍(lán)仍處于氧化態(tài)，故呈現(xiàn)藍(lán)色或淡藍(lán)色。3. 血球計(jì)數(shù)板的使用血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的厚載玻片，載玻片上有4條槽而構(gòu)成3個(gè)平臺(tái)。中間的平臺(tái)較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個(gè)半邊上面各有一個(gè)方格網(wǎng)(如圖3)。每個(gè)方格網(wǎng)共分9大格，其中間的一大格(又稱為計(jì)數(shù)室)常被用作微生物的計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)室的刻度有兩種：一種是大方格分為16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格；另一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格。但是不管計(jì)數(shù)室是哪一種構(gòu)造，它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，即每個(gè)大方格都由400個(gè)小方格組成(圖4)。每個(gè)大方格邊長(zhǎng)為1mm，則每一大方格的面積為1mm2，每個(gè)小方格的面積為1／400mm2，蓋上蓋玻片后，所以每個(gè)計(jì)數(shù)室(大方格)，每個(gè)小方格的體積為l／4000mm3。使用血球計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)時(shí)，先要測(cè)定每個(gè)小方格(或中方格)中微生物的數(shù)量，再換算成每毫升菌液(或每克樣品)中微生物細(xì)胞的數(shù)量。圖1 血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造（a、平面圖；b、側(cè)面圖）圖2 血球計(jì)數(shù)板網(wǎng)格的分區(qū)和分格【實(shí)驗(yàn)用品】1. 材料小鼠脾臟；2. 試劑PBS緩沖溶液、培養(yǎng)液、臺(tái)盼藍(lán)、伊紅；3. 器材解剖剪、解剖鑷、眼科剪、眼科鑷、培養(yǎng)皿、紗布?jí)K、吸管、橡皮頭、燒杯、移液槍、注射器、針頭、Eppendorf管（上述器具徹底清洗、消毒、烤干、包裝好）；倒置相差顯微鏡、酒精燈、酒精棉球、試管架、解剖板等?！静僮鞑襟E】A. 原代脾細(xì)胞培養(yǎng) 取材：取小白鼠一只，采用斷頭法處死，清水洗凈小白鼠并浸于75%酒精中滅菌3m
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