【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 5)但不能形成病毒粒子(Bruss and Vieluf, 1995)。亞病毒顆粒的形成和分泌可作為HBV包膜蛋白正確折疊和參與病毒粒子形成的指標(biāo)。L蛋白將前體S結(jié)構(gòu)域暴露在ER胞質(zhì)一側(cè)（ipreS）對(duì)于核殼的包膜化非常重要。表明L蛋白前體S結(jié)構(gòu)域含有一些區(qū)域能介導(dǎo)與衣殼的聯(lián)系。與ipreS結(jié)構(gòu)域具基質(zhì)蛋白功能相一致，胞質(zhì)內(nèi)DHBV衣殼的細(xì)胞內(nèi)途徑受DHBV L蛋白的影響 (Summers et al.,1990。 Summers et al., 1991)。當(dāng)L蛋白不存在時(shí)，衣殼將進(jìn)入細(xì)胞核，將其基因組釋放至核質(zhì)；當(dāng)L蛋白表達(dá)達(dá)到一定的閾值，衣殼將以有包膜的病毒粒子形式被釋放。DHBV L蛋白的這個(gè)功能可歸于161個(gè)氨基酸長(zhǎng)的前體S結(jié)構(gòu)域的116137位氨基酸(Lenhoff and Summers, 1994)。HBV的 ipreS中也發(fā)現(xiàn)了一個(gè)短的類似的區(qū)域103至124位氨基酸（或92113位氨基酸，與病毒基因型有關(guān)）。該區(qū)域的小氨基酸的替換會(huì)阻斷病毒粒子的形成，但L蛋白仍能被組裝進(jìn)入亞病毒顆粒(Bruss, 1997)，甚至連更細(xì)微的突變?nèi)鐚蓚€(gè)相鄰的氨基酸換成丙氨酸，也會(huì)阻斷核殼的包膜化。但該結(jié)構(gòu)域的上游區(qū)域可被缺失，而不影響病毒粒子的形成(Bruss and Thomssen, 1994)；下游的大多數(shù)區(qū)域直至S結(jié)構(gòu)域內(nèi)II型信號(hào)的跨膜區(qū)的突變也沒(méi)有任何影響(Bruss,1997)。第二個(gè)暴露在ER胞質(zhì)一側(cè)的包膜蛋白結(jié)構(gòu)域是S蛋白跨膜區(qū)的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。遺傳學(xué)分析顯示該環(huán)靠近C端的一半?yún)^(qū)域內(nèi)的短片斷的缺失會(huì)抑制病毒粒子的形成，但不抑制20nm亞病毒顆粒的形成(LofflerMary et al., 2000)，但該區(qū)域內(nèi)的點(diǎn)突變不具這種效應(yīng)(V. Bruss, unpublished)。在沒(méi)有微粒體存在時(shí)。實(shí)驗(yàn)表明，L蛋白的兩個(gè)片段（一個(gè)從24至191位氨基酸；一個(gè)從191至322位氨基酸）在衣殼的結(jié)合中具有協(xié)同作用(Tan et al., 1999)。因此，我們推測(cè)在出芽時(shí)上述兩個(gè)片段或其中的一個(gè)作為基質(zhì)結(jié)構(gòu)域直接與病毒衣殼結(jié)合，這類似于α病毒E2蛋白的胞質(zhì)尾在粒子形成中的作用(Cheng et al., 1995)。通過(guò)突變體分析，對(duì)衣殼上可能的結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行了定位。對(duì)核心蛋白隨機(jī)插入和缺失突變體的初步篩選確定了一些突變體(Koschel et al.,1999)，他們均能完成前體基因組的包裝、衣殼的組裝和病毒DNA的合成，但會(huì)阻斷核殼的包膜化(Koschel et al., 2000)，相似的表型在分離自慢性病毒攜帶者的自然發(fā)生HBV突變體中也有發(fā)現(xiàn)(LePogam et al., 2000)。在基于HBV衣殼晶體結(jié)構(gòu)的更深層次的篩選中，52個(gè)暴露在衣殼表面的氨基酸被換成丙氨酸(Ponsel and Bruss, 2003)。11個(gè)突變體特異性引起核殼包膜化的缺失（），它們成簇地定位在突觸的基部或突觸之間的凹處。突觸中間區(qū)域或頂部的突變則沒(méi)有影響。但是，HBV從轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的出芽可被一個(gè)經(jīng)肽庫(kù)篩選所得的多肽所抑制，且該多肽能與突觸頂部結(jié)合(Bottcheret al., 1998。 Dyson and Murray, 1995)。可能這種抑制效應(yīng)是由空間障礙所引起，而不是由于包膜與衣殼間特異性相互作用被阻斷。人們認(rèn)為包膜蛋白的其中一個(gè)或兩個(gè)基質(zhì)結(jié)構(gòu)域可直接與衣殼表面的一個(gè)或兩個(gè)結(jié)構(gòu)域結(jié)合，這點(diǎn)在HBV的一個(gè)雙重突變體中得到了證實(shí)。在該突變體中，核心基因I97L突變會(huì)引起相對(duì)未成熟的衣殼包膜化，而L蛋白基質(zhì)結(jié)構(gòu)域內(nèi)A119F突變可抑制I97L的突變效應(yīng)(Le Pogam and Shih, 2002)。另外，來(lái)自HBV包膜蛋白和衣殼的多肽的體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)也同樣證實(shí)了這點(diǎn)(Poisson et al., 1997)。在體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)中，肝組織來(lái)源的病毒衣殼和重組衣殼都能與對(duì)應(yīng)于L和S蛋白基質(zhì)結(jié)構(gòu)域的多肽較好的結(jié)合(Hourioux et al., 2000)，這表明衣殼與包膜蛋白的相互作用可能并不能區(qū)分成熟和未成熟的衣殼。在描述20nm亞病毒顆粒形成的章節(jié)中有提到：嗜肝病毒包膜蛋白的組裝過(guò)程具有選擇性，尚沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何的外源蛋白被組裝進(jìn)亞病毒顆粒，即便是禽類或哺乳類來(lái)源的包膜蛋白也不能混合組裝。這在病毒粒子的包膜中也是一致的。WHV的L蛋白可以代替HBV L蛋白參與HBV病毒粒子的形成盡管效率較低，而DHBV 的L蛋白則不行(Gerhardt and Bruss, 1995)。這與WHV比DHBV在L蛋白基質(zhì)結(jié)構(gòu)域上與HBV具有更高同源性的事實(shí)相符合。不過(guò)，通過(guò)融合S蛋白N端將外源結(jié)構(gòu)域組裝進(jìn)HBV包膜是可行的(Bruss and Ganem, 1991)。另外，需將分泌信號(hào)融合在蛋白N端以確保外源結(jié)構(gòu)域被轉(zhuǎn)運(yùn)至ER腔。所產(chǎn)生蛋白的構(gòu)象與用外源序列取代前體S2結(jié)構(gòu)域的M蛋白構(gòu)象相似。該融合體與HBV在細(xì)胞系中的共表達(dá)可產(chǎn)生表型混合的病毒，并將外源結(jié)構(gòu)域暴露在病毒粒子表面。一種被稱為丁型肝炎（HDV或delta virus）的缺損病毒可增殖性感染僅HBV感染的肝細(xì)胞 (Taylor, 2003)，因?yàn)镠DV可利用HBV的包膜。HDV核殼由一環(huán)狀ssRNA和HDV編碼的具長(zhǎng)短兩種形式的蛋白組成（delta 抗原），環(huán)狀ssRNA因?yàn)榉肿颖旧砜梢曰パa(bǔ)配對(duì)而具雙鏈構(gòu)象。球形核殼的結(jié)構(gòu)尚哺清楚，較長(zhǎng)delta 抗原在C端比短的delta抗原多19個(gè)氨基酸，且在該區(qū)域含異戊二烯化（isoprenylation）信號(hào)。異戊二烯化對(duì)于HDV核殼的包膜化很重要。與HDV病毒粒子形成過(guò)程不同(Hwang and Lai, 1993)，在HDV病毒粒子形成過(guò)程中，HBV 的S蛋白很充足(Wang et al., 1991)。L蛋白對(duì)于HDV的感染是必須的。這些結(jié)果表明HDV和HBV衣殼包膜化的分子機(jī)制是不同的，盡管它們利用相同的包膜蛋白。參考文獻(xiàn)：Acs, G., Sells, ., Purcell, ., Price, P., Engle, R., Shapiro, M.,Popper, H., 1987. 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