【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 圖1 小鼠的捉拿方法 圖2 大鼠的捉拿方法2 大 鼠 捉拿固定的方法基本上與小鼠相同。由于大鼠比小鼠牙尖性猛，不易用襲擊的方式抓取，捉拿時(shí)較難一些，為防大鼠在驚恐或激怒時(shí)咬傷手指，實(shí)驗(yàn)者應(yīng)帶上棉手套或帆布手套，先用右手將鼠尾提起，放在粗糙物上，向后輕拉鼠尾，使其不動(dòng)，再用左手拇、食指捏住頭頸部皮膚，其余三指和手掌固定鼠體，使其頭、頸、腹呈一直線（圖2），這時(shí)右手可作注射，若需進(jìn)行手術(shù)，則應(yīng)對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉后固定于手術(shù)臺(tái)上。如需尾靜脈取血或注射，可將大鼠放入固定盒內(nèi)或用小黑布袋裝大鼠，使其只露尾巴。3 豚 鼠 豚鼠膽小易驚，性情溫和，不咬人，抓取幼小豚鼠時(shí)，只需用雙手捧起來，對(duì)體型較大或懷孕的豚鼠，先用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指環(huán)握頸部，另一只手托住其臀部（圖3）。 圖3 豚鼠的捉拿方法4 家 兔 家兔比較馴服，一般不會(huì)咬人，但腳爪較尖，應(yīng)避免抓傷。抓取時(shí)輕輕將兔提起，另一手托其臀部，使其軀干的重量大部分集中在該手上，然后按實(shí)驗(yàn)需要將兔固定成各種姿勢(shì)（圖4）。注意抓兔時(shí)不要單提兩耳，因?yàn)橥枚荒艹惺苋碇亓?，易造成疼痛而引起掙扎，因此單提兔耳，捉拿四肢，提抓腰部和背部都是不正確的抓法。圖4 家兔的捉拿與固定5 青蛙和蟾蜍 用左手握住動(dòng)物，以食指和中指夾住一側(cè)前肢，大拇指壓住另一前肢，用右手協(xié)助，將兩后肢拉直，左手無名指和小指將其壓住固定（圖5）。注意在抓取蟾蜍時(shí)，切勿擠壓其兩側(cè)耳部突起的毒腺，以免毒液噴出射入眼中。圖5 蟾蜍的捉拿與固定 二 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，常常需要編號(hào)分組，將動(dòng)物做上不同的標(biāo)記加以區(qū)別。標(biāo)記的方法很多，常用的編號(hào)標(biāo)記方法有染色法、掛牌法和烙印法。家兔等較大動(dòng)物可用特制的號(hào)碼牌固定于耳上，而小動(dòng)物則常用染色法。染色法是藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)課中最常使用的方法，通常用化學(xué)試劑涂染動(dòng)物背部或四肢一定部位的皮毛，代表一定的編號(hào)，常用染色的化學(xué)試劑有：黃色：3%5%苦味酸溶液咖啡色：20%硝酸銀溶液紅色：%中性紅或品紅溶液黑色：煤焦油的酒精溶液圖6 大鼠、小鼠標(biāo)記法 （1）110號(hào)標(biāo)記法：編號(hào)的原則是先左后右，從前到后，如將動(dòng)物背部的肩、腰、臀部按左、中、右分為九個(gè)區(qū)，從左到右標(biāo)記19號(hào)，第10號(hào)不作標(biāo)記（圖6）。（2）10100號(hào)標(biāo)記法：在上述編號(hào)的同一部位，用各種不同顏色的化學(xué)試劑擦上斑點(diǎn)，就可代表相應(yīng)的十位數(shù)，例如涂上黃色的苦味酸代表110號(hào)，涂上紅色的中性紅代表1120號(hào)，涂上咖啡色的硝酸銀代表2130號(hào)，以此類推。三 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥方法1 小 鼠 灌胃法 以左手捉住小鼠，使其腹部朝上，右手持灌胃器（以12mL注射器上連接細(xì)玻璃灌胃管或把注射針頭磨鈍稍加彎曲制成的灌胃針頭），灌胃管長約45cm，直徑約1mm。操作時(shí)，先從小鼠口角將灌胃管插入口腔內(nèi)，然后用灌胃管向后上方壓迫小鼠頭部，使口腔與食道呈一直線，再將灌胃管沿著上顎壁輕輕推入食道（圖7），當(dāng)推進(jìn)約23cm時(shí)可稍感有阻力，表明灌胃管前部已到達(dá)膈肌，此時(shí)即可推進(jìn)注射器進(jìn)行灌胃，若注射器推注困難，應(yīng)抽出重插，若誤入氣管給藥，可使小鼠立即死亡，注藥后輕輕拔出灌胃管。 皮下注射法 通常選擇背部皮下注射，操作時(shí)輕輕拉起背部皮膚，將注射針刺入皮下，把針尖向左右擺動(dòng)，易擺動(dòng)說明針尖確已刺入皮下，然后注射藥液，拔針時(shí)，以手捏住針刺部位，防止藥液外漏（圖8）。 圖7 小鼠灌胃法 圖8 小鼠皮下注射法 肌肉注射法 小鼠因肌肉較少，很少采用肌肉注射，若有需要可注射于股部肌肉，多選后腿上部外側(cè)。 以左手固定小鼠，腹部向上，注射部位應(yīng)是腹部的左、右下外側(cè)1/4的部位，因?yàn)榇颂師o重要器官。用右手將注射器針頭刺入皮下，沿皮下向前推進(jìn)35mm，接著使針頭與皮膚呈45度角刺入腹肌，繼續(xù)向前推進(jìn)，通過腹肌進(jìn)入腹腔后感覺抵抗力消失，此時(shí)可注入藥液，（圖9）。圖9 小鼠腹腔注射法 圖10 小鼠尾靜脈注射法 靜脈注射法 一般采用尾靜脈注射，事先將小鼠置于固定的筒內(nèi)或鐵絲罩內(nèi)，或扣于燒杯內(nèi)，使尾巴露出，尾巴于4550。C的溫水中浸泡半分鐘或用75%的酒精棉球擦拭，使血管充血，選擇尾巴左右兩側(cè)靜脈注射，如針頭確已在血管 內(nèi)，推注藥液應(yīng)無阻力，注射時(shí)若出現(xiàn)隆起白色皮丘，阻力增大，說明未注入血管，應(yīng)拔出針頭重新向尾根部移動(dòng)注射。注射完畢后，把尾巴向注射部位內(nèi)側(cè)折曲而止血。需反復(fù)靜脈注射時(shí)，應(yīng)盡可能從尾端開始，按次序向尾根部移動(dòng)注射。（圖10）。 2 大 鼠 灌胃法 用左手以捉拿固定法握住大鼠（若兩人合作時(shí)，助手以左手捉住大鼠用右手抓住后肢和尾巴），灌胃方法與小鼠相類似，僅采用安裝在510mL注射器上的金屬灌胃管（長68cm,尖端為球狀的金屬灌胃管）。一次灌藥量為12mL/100g體重。 皮下注射法 注射部位可選擇背部或大腿外側(cè)，操作時(shí)輕輕拉起注射部位皮膚，將注射針刺入注射部位皮下，一次注射藥量為1mL/100g體重。 肌肉注射與腹腔注射法同小鼠。 靜脈注射法 清醒大鼠可采用尾靜脈注射，方法同小鼠，麻醉大鼠可從舌下靜脈給藥，也可將大鼠腹股溝切開，從股靜脈注射藥物。3 豚 鼠 灌胃法 用左手拇指和食指固定豚鼠兩前肢，其余手指握住鼠身（兩人操作時(shí)，助手以左手從動(dòng)物的背部把后腿伸開，并把腰部和后腿一起固定，用左手的拇指和食指捏住兩前肢固定），灌胃管與灌胃方法同大鼠。亦可采用插管灌胃法，用木或竹制開口器，把導(dǎo)尿管或塑料管通過開口器中央的小孔插入胃內(nèi)，回注射器針?biāo)?，無空氣抽回時(shí)即可注入藥液。 皮下注射法 注射部位多選擇大腿內(nèi)側(cè)、背部、肩部等皮下脂肪少的部位。通常在大腿內(nèi)側(cè)注射，一般需兩人合作，一人固定豚鼠，一人握住側(cè)后肢，將注射器針頭與皮膚呈45。角方向刺入皮下，確定針頭在皮下后注射，注射完畢后以指壓刺入部位片刻，以防藥液外漏。 肌肉注射與腹腔注射法同小鼠。 靜脈注射法 注射部位可選擇前肢皮下頭靜脈、后肢小隱靜脈、耳殼靜脈、或雄鼠的陰莖靜脈，偶爾亦可用心臟穿刺給藥。一般用前肢皮下頭靜脈穿刺較用后肢小隱靜脈成功率高，而后肢小隱靜脈下部比較固定，比起明顯可見但不固定的上部穿刺成功率要高。也可在脛前部將皮膚切開一小口，暴露出脛前靜脈后注射，一次注射量不超過2mL。4 兔 灌胃法 給家兔灌胃需要兩人合作，助手就坐，將家兔的軀體夾于兩腿之間，左手緊握雙耳固定頭部，右手抓住雙前肢固定前身。術(shù)者將木或竹制的開口器橫放在家兔的上下頜之間，固定于舌頭之上，然后把合適的導(dǎo)尿管經(jīng)開口器中小孔，沿圖11 家兔灌胃法上顎壁慢慢插入食道約1518cm，此時(shí)可將導(dǎo)尿管外口端置于一杯清水中，若無氣泡逸出，說明確已插入食道，這時(shí)可用注射器注入藥液，然后用少許清水沖洗導(dǎo)尿管，灌胃完畢，應(yīng)先捏閉導(dǎo)尿管外口，拔出導(dǎo)尿管，再取出開口器（圖11）。 皮下、肌肉、腹腔注射法 基本方法與鼠類相同，選用的針頭可以大一些。給藥的最大容量分別為：、。 靜脈注射法 注射部位一般采取耳緣靜脈（兔耳外緣的血管為靜脈，中央的血管為動(dòng)脈（圖12）。可用酒精棉球涂擦耳部邊緣靜脈部位的皮膚， 或用電燈泡烘烤兔耳使血管擴(kuò)張，以左手食指放在耳下將兔耳墊起，并以拇指按住耳緣部分，右手持注射器，針頭經(jīng)皮下，沿皮下向前推進(jìn)少許再刺入血管，注射時(shí)若無阻力或無發(fā)生局部皮膚發(fā)白隆起現(xiàn)象，說明針頭在血管內(nèi)即可注射 圖12 兔耳緣血管分布 圖13 兔耳緣靜脈注射法藥液，注射完畢壓住針眼，拔去針頭，繼續(xù)壓迫數(shù)分鐘止血（圖13）。5 青蛙和蟾蜍淋巴囊內(nèi)注射 蛙及蟾蜍皮下有多個(gè)淋巴囊，對(duì)藥物易吸收， 但皮膚無彈性，藥液容易從穿刺孔逸出。因此，給任何一個(gè)淋巴囊注藥均不能直接刺入。如作腹淋巴囊注射時(shí)，將針頭從股部上端刺入肌層，進(jìn)入腹壁皮下淋巴囊再注藥，作胸部淋巴囊注射時(shí)，針頭由口腔底部穿下頜肌層而達(dá)胸部皮下；作股淋巴囊注射時(shí)，應(yīng)從小腿皮膚刺入，通過膝關(guān)節(jié)而達(dá)大腿部皮下。（圖14）。 圖14 蛙的皮下淋巴囊四 動(dòng)物的麻醉和取血1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉在一些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，特別是手術(shù)等實(shí)驗(yàn)，為減少動(dòng)物的掙扎和保持其安靜，便于操作，常需對(duì)動(dòng)物采取必要的麻醉。由于動(dòng)物屬間的差異等情況，所采用的麻醉方法和所選用的麻醉劑亦有所不同。 常用的麻醉劑 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常用的麻醉劑分為三類，即揮發(fā)性麻醉劑、非揮發(fā)性麻醉劑和中藥麻醉劑。 揮發(fā)性麻醉劑這類麻藥包括乙醚、氯仿等。乙醚吸入麻醉適應(yīng)于各種動(dòng)物，其麻醉量和致死量差距大，所以安全度也大，動(dòng)物麻醉深度容易掌握，而且麻醉后蘇醒較快。其缺點(diǎn)是對(duì)局部刺激作用大，可引起上呼吸道黏膜液體分泌增多，再通過神經(jīng)反射可影響呼吸、血壓和心跳活動(dòng)，并且容易引起窒息，故在乙醚吸入麻醉時(shí)必須有人照看，以防止麻醉過深而出現(xiàn)上述情況。 非揮發(fā)性麻醉劑 這類麻醉劑種類較多，包括巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉等巴比妥類的衍生物，氨基甲酸乙脂和水合氯醛。這些麻醉劑使用方便，一次給藥可維持較長的麻醉時(shí)間，麻醉過程較平衡，動(dòng)物無明顯掙扎現(xiàn)象。但其缺點(diǎn)是蘇醒較慢。 中藥麻醉劑動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)有時(shí)也用到像洋金花和氫溴酸冬莨菪堿等中藥麻醉劑，但由于其作用不夠穩(wěn)定，而且常需加佐劑麻醉效果才能理想，故使用過程中不能得到普及，因而，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室不選用這類麻醉劑進(jìn)行麻醉。 動(dòng)物的麻醉方法吸入法：用一塊圓玻璃板和一個(gè)鐘罩或一個(gè)密閉的玻璃箱作為揮發(fā)性麻醉劑的容器，多選用乙醚做麻藥。麻醉時(shí)用幾個(gè)棉球，將乙醚倒入其中，迅速轉(zhuǎn)入鐘罩或箱內(nèi)，讓其揮發(fā)，然后把待麻醉動(dòng)物投入，約隔4～6min即可麻醉，麻醉后應(yīng)立即取出，并準(zhǔn)備一個(gè)蘸有乙醚的棉球小燒杯，在動(dòng)物麻醉變淺時(shí)套在鼻上使其補(bǔ)吸麻藥。本法最適于大、小鼠的短期操作性實(shí)驗(yàn)的麻醉，腹腔和靜脈給藥麻醉法：非揮發(fā)性和中藥麻醉劑均可用作腹腔和靜脈注射麻醉，操作簡(jiǎn)便，是實(shí)驗(yàn)室最常采用的方法之一。腹腔給藥麻醉多用于大鼠、小鼠和豚鼠，較大的動(dòng)物如兔、狗等則多用于靜脈給藥進(jìn)行麻醉。由于各種麻醉劑的作用長短以及毒性的差別，所以在腹腔和靜脈麻醉時(shí)，一定要控制藥物的濃度和注射量（詳見附錄表2）。%～%鹽酸普魯卡因注射；眼、鼻、咽喉、黏膜表面麻醉可2%鹽酸可卡因溶液，滴入后數(shù)秒鐘即可出現(xiàn)麻醉。1 靜脈注射必須緩慢，同時(shí)觀察肌肉緊張性、角膜反射和對(duì)皮膚夾捏的反應(yīng)，當(dāng)這些活動(dòng)明顯減弱或消失時(shí)，立即停止注射。配制的藥液濃度要適中，不可過高，以免麻醉過急；但也不能過低，以減少注入溶液的體積。2 麻醉時(shí)需注意保溫。麻醉期間，動(dòng)物的體溫調(diào)節(jié)機(jī)能往往受到抑制，出現(xiàn)體溫下降，可影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。此時(shí)常需采取保溫措施， 3 做慢性實(shí)驗(yàn)時(shí)，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應(yīng)加熱至動(dòng)物體溫水平。2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采血方法實(shí)驗(yàn)研究中，經(jīng)常要采集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血液進(jìn)行常規(guī)檢查或某些生物化學(xué)分析，故必須掌握血液的正確采集。不同動(dòng)物采血部位與采血量的關(guān)系見附錄三。常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的最大安全采血量與最小致死采血量，見附錄四。第五章 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器操作技術(shù)BL410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)1 概述：BL410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)是配置在微機(jī)上的4通道生物信號(hào)采集、放大、顯示、記錄與處理系統(tǒng)，它將現(xiàn)代電子技術(shù)與計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理技術(shù)有機(jī)地融合在一起，替代了原來利用分離的放大器、示波器、記錄儀、刺激器等眾多儀器組成的煩瑣的生物信號(hào)觀測(cè)與記錄裝置，在微機(jī)上以中文Windows操作系統(tǒng)平臺(tái)為基礎(chǔ)，直觀而操作簡(jiǎn)便，這套實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)主要由以下三部分組成：IBM兼容微機(jī)。Biolap410生物信號(hào)采集、放大硬卡；Biolap98生物信號(hào)顯示與處理軟件。2 生物信號(hào)顯示與處理軟件界面介紹： 主界面：主界面（圖1）是我們與BL410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)打交道的直觀窗口，熟悉主界面上各個(gè)部分的用途，可以幫助我們使用和操作該系統(tǒng)，為實(shí)驗(yàn)觀察和記錄打下基礎(chǔ)。 主界面從上到下依次分為：標(biāo)題條、菜單條、工具條、生物信號(hào)顯示窗口、反演相關(guān)功能按鈕區(qū)及狀態(tài)條等6個(gè)部分；在生物信號(hào)顯示窗口的左邊為控制區(qū)和信息區(qū)，控制區(qū)從上到下可分為4個(gè)通道的參數(shù)及掃描速度調(diào)節(jié)區(qū)和特殊實(shí)驗(yàn)標(biāo)記選擇區(qū)；在主界面左下角有一個(gè)最小化的設(shè)置刺激器參數(shù)對(duì)話框。主界面上各個(gè)部分的功能見表1。圖1 BL410生物信號(hào)顯示與處理軟件主界面表1 BL410軟件主界面上各部分功能一覽表名稱 功能備注標(biāo)題條 顯示Biolap98軟件的名稱以及實(shí)驗(yàn)標(biāo)題菜單條顯示所有的頂層菜單項(xiàng)，您可以選擇其中的某一菜單項(xiàng)以彈出其子菜單。最底層的菜單項(xiàng)代表一條命